一种抗肿瘤重组胶原蛋白及其制备方法和应用技术

本申请提供一种抗肿瘤重组胶原蛋白及其制备方法和应用，本申请的重组胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本申请的重组胶原蛋白与天然胶原蛋白相比，分子量小容易制备，可在酵母等高等真核细胞中表达制备，具有天然胶原良好的生物活性，能有效支持细胞粘附、提高皮肤抗氧化损伤能力、显著抑制肿瘤细胞增殖；可用于食品、保健品、生物医药等领域。本发明专利技术的制备方法安全、易于放大、生产成本低，应用前景广阔。前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种抗肿瘤重组胶原蛋白及其制备方法和应用


[0001]本申请属于基因工程
，尤其涉及一种抗肿瘤重组胶原蛋白及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是哺乳动物中最重要和最丰富的蛋白质之一，在人体的皮肤、结缔组织和骨骼以及其它组织中发现的结构蛋白。在人体内胶原蛋白的含量约为总蛋白质的30％。胶原蛋白的结构是三螺旋，由命名为GLY
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X
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Y的重复的三联体氨基酸序列组成，X和Y可以是任何氨基酸。重组胶原蛋白具有良好的水溶性、无病毒感染风险、低排异性、生物相容性等优点，在生物医药、组织工程、食品、化妆品等领域有着广泛的应用。
[0003]胶原蛋白可以给予肌肤必需的养分，改善皮肤细胞生存环境和促进组织的新陈代谢。目前，已有研究表明胶原蛋白寡肽是改善皮肤水分含量的功能因子，保持皮肤纤维结构的完整性，通过补充胶原蛋白合成所需的营养物质，起到修补受损细胞作用。同时，也有报道证实人胶原XV
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α1具有改善睡眠效果，人胶原IV
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α3具有诱导细胞凋亡作用。因此，在特定领域，通过特定的氨基酸替代、氨基酸序列修饰可精确构建胶原蛋白，可在疾病控制和治疗方面起到更有效的作用，也将会是一种更安全更高效的选择。

技术实现思路

[0004]本申请的目的在于提供了一种抗肿瘤重组胶原蛋白，所述抗肿瘤重组胶原蛋白能有效支持细胞粘附、提高皮肤抗氧化损伤能力、显著抑制肿瘤细胞增殖。可广泛应用于食品、保健品、生物医药等领域。
[0005]本申请的具体技术方案如下：
[0006]1、一种抗肿瘤重组胶原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]2、一种核酸分子，其特征在于，其编码项1所述的重组胶原蛋白。
[0008]3、根据项2所述的核酸分子，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.2所示。
[0009]4、一种宿主细胞，其特征在于，其包含项2所述核酸分子。
[0010]5、根据项4所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞选自毕赤酵母、酿酒酵母、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌中的任意一种。
[0011]6、一种制备项1所述重组胶原蛋白的方法，其特征在于，其包括下述步骤：
[0012]利用项4或5所述的宿主细胞进行表达，然后进行分离纯化得到。
[0013]7、根据项6所述的方法，其特征在于，所述分离纯化的方法包括盐析法、超滤法、亲和层析法和凝胶过滤层析法。
[0014]8、项1所述的重组胶原蛋白，或项2或3所述的核酸分子所编码的重组胶原蛋白，或由项4或5所述的宿主细胞生产的重组胶原蛋白在制备具有抗氧化、抑制肿瘤生长的食品、化妆品、保健品及药物组合物中的应用。
[0015]9、一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，其包括项1所述的重组胶原蛋白，或项2或
3所述的核酸分子所编码的重组胶原蛋白，或由项4或5所述的宿主细胞生产的重组胶原蛋白。
[0016]专利技术的效果
[0017]1.本申请的重组胶原蛋白是全新的序列，长度远小于天然人胶原蛋白基因，且其翻译的蛋白分子量小，容易制备。
[0018]2.本申请制备的重组胶原蛋白由毕赤酵母工程菌表达而得，该蛋白无内毒素隐患，且该蛋白携带组氨酸标记，可通过特异性亲和进行纯化，纯化步骤简单。
[0019]3.本申请的方法所制备的基因重组胶原蛋白，能有效促进哺乳动物抗氧化能力提升、抑制肿瘤细胞生长的作用。
具体实施方式
[0020]下面结合实施例进一步说明本申请，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本申请，并非用于限制本申请。
[0021]除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本申请作进一步的说明，但不用来限制本申请的范围。
[0022]如本文所使用的，术语“多肽”、“肽”、“蛋白”、“蛋白质”在本文中互换使用以意指氨基酸残基的聚合物。即，针对多肽的描述同样适用于描述肽和描述蛋白质，且反之亦然。所述术语适用于天然产生氨基酸聚合物以及其中一个或一个以上氨基酸残基为非天然编码氨基酸的氨基酸聚合物。如本文中所使用，所述术语涵盖任何长度的氨基酸链。
[0023]如本文所使用的，术语“核酸分子”可以包括包含天然和/或非天然存在的核苷酸和碱基的那些，例如包括具有骨架修饰的那些，所述核酸分子指的是核苷酸的聚合物，核苷酸的此类聚合物可以含有天然和/或非天然核苷酸，并且包括但不限于DNA、RNA和PNA。核苷酸序列指的是构成核酸分子的线性序列。
[0024]在一些情况下，核酸分子含有cDNA，在一些情况下，可以修饰核酸分子以用于本申请所述的构建体中，如用于密码子优化。在一些情况下，出于克隆到载体的目的，可以将序列设计为含有末端限制性位点序列。
[0025]在一些情况下，核酸分子可以从多种来源获得，如通过一种或多种给定细胞内的或从所述一种或多种给定细胞中分离的编码核酸的聚合酶链式反应(PCR)扩增获得。
[0026]如本文所使用的，术语“多核苷酸”或“核苷酸”意指单股或双股形式的脱氧核糖核苷酸、脱氧核糖核苷、核糖核苷或核糖核苷酸及其聚合物。除非特定限制，否则所述术语涵盖含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，所述类似物具有类似于参考核酸的结合特性并以类似于天然产生的核苷酸的方式进行代谢。除非另外特定限制，否则所述术语也意指寡核苷酸类似物，其包括PNA(肽核酸)、在反义技术中所用的DNA类似物(硫代磷酸酯、磷酰胺酸酯等)。除非另外指定，否则特定核酸序列也隐含地涵盖其保守修饰的变异体(包括(但不限于)简并密码子取代)和互补序列以及明确指定的序列。
[0027]如本文所使用的，术语“载体”用于描述可以被工程化以含有可以在宿主细胞中扩
增的克隆的一种多核苷酸或多种多核苷酸的核酸分子。载体包括但不限于：单链，双链或部分双链的核酸分子；包含一个或多个游离末端，没有游离末端(例如环状)的核酸分子；包含DNA，RNA或两者的核酸分子；以及本领域已知的其它多核苷酸种类。一种类型的载体是“质粒”，其是指可以插入额外DNA片段的环状双链DNA环，例如通过标准分子克隆技术。某些载体能够在引入它们的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其它载体(例如，非游离型哺乳动物载体)在引入宿主细胞后整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导它们可操作地连接的那些基因的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。重组表达载体可以包含适于在宿主细胞中表达核酸的形式的本申请的核酸，这意味着重组表达载体包括一种或多种调节元件，其可以基于用于表达的、可以与待表达的核酸序列可操作地连本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤重组胶原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1所述的重组胶原蛋白。3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.2所示。4.一种宿主细胞，其特征在于，其包含权利要求2所述核酸分子。5.根据权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞选自毕赤酵母、酿酒酵母、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌中的任意一种。6.一种制备权利要求1所述重组胶原蛋白的方法，其特征在于，其包括下述步骤：利用权利要求4或5所述的宿主细胞进行表达，然后...

【专利技术属性】
技术研发人员：范代娣，徐茹，段志广，宇文伟刚，严建亚，
申请(专利权)人：陕西巨子生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：