校准物、复合体、及对IgA凝集体进行测定的方法技术

本发明专利技术以提供在IgA凝集体的测定中使用的校准物、及使用该校准物的IgA凝集体的测定方法作为目的。本发明专利技术由含具有生物素基的IgA及亲和素类的校准物解决所述的课题。亲和素类的校准物解决所述的课题。亲和素类的校准物解决所述的课题。

【技术实现步骤摘要】
校准物、复合体、及对IgA凝集体进行测定的方法


[0001]本专利技术涉及用于取得试样中的IgA凝集体的浓度的校准物。本专利技术涉及含具有生物素基的IgA和亲和素类的复合体。本专利技术涉及使用凝集素对试样中的IgA凝集体进行测定的方法。

技术介绍

[0002]在专利文献1中记载了由使用与IgA凝集体特异性地反应的凝集素的酶联免疫吸附法(ELISA)法检测试样中的IgA凝集体的方法。另外，在专利文献1中记载了当对从IgA肾病患者及健康人的血清纯化的IgA的检测结果进行比较时，患者来源的纯化IgA对于凝集素特别强地反应。
[0003]【现有技术文献】
[0004]【专利文献】
[0005]【专利文献1】专利第6066220号公报
[0006]【专利技术的概要】
[0007]【专利技术要解决的课题】
[0008]在由ELISA法等的免疫测定法定量测定受试物质时，使用校准物。校准物一般是指含与受试物质相对应的标准物质的试剂。在免疫测定的领域中，标准物质多是从生物体试样单离的或是合成的受试物质本身。但是，不知晓用于IgA凝集体的测定的适合的校准物。从而，本专利技术旨在提供：在IgA凝集体的测定中使用的校准物、该校准物中所含的，含具有生物素基的IgA和亲和素类的复合体、及使用该校准物的IgA凝集体的测定方法。
[0009]【用于解决课题的手段】
[0010]本专利技术提供含具有生物素基的IgA及亲和素类的用于取得试样中的IgA凝集体的浓度的校准物。本专利技术提供用于取得试样中的IgA凝集体的浓度的含具有生物素基的IgA和亲和素类的复合体。本专利技术提供使用凝集素对试样中的IgA凝集体进行测定的方法，其为包括使用含具有生物素基的IgA及亲和素类的校准物取得试样中的IgA凝集体的浓度的方法。
[0011]【专利技术的效果】
[0012]根据本专利技术，提供在IgA凝集体的测定中使用的校准物、含具有生物素基的IgA和亲和素类的复合体、及使用该校准物的IgA凝集体的测定方法。
[0013]【附图的简单的说明】
[0014]【图1】是具有生物素基的IgA和亲和素类的复合体的模式图。
[0015]【图2】是具有生物素基的IgA、亲和素类和具有与凝集素结合的糖链及生物素基的多肽的复合体的模式图。
[0016]【图3】是处于一试剂的形态的校准物的模式图。
[0017]【图4】是处于含多个试剂的试剂组的形态的校准物的模式图。
[0018]【图5】是处于含多个试剂的试剂组的形态的校准物的模式图。
【具体实施方式】
[0019]本实施方式的方法是使用凝集素的IgA凝集体的测定方法。IgA凝集体是指在IgA肾病患者的血液中IgA凝集而发生的多聚体IgA。目前，难以从IgA肾病患者的血液等分离及纯化IgA凝集体。因此，无法在校准物中使用IgA凝集体本身。一方面，糖链无异常的IgA单体可容易地入手。但是，这样的IgA单体不与凝集素结合。因此，如上所述，不知晓用于IgA凝集体的测定的适合的校准物。
[0020]本实施方式的方法的特征在于，使用含具有生物素基的IgA及亲和素类的校准物取得试样中的IgA凝集体的浓度。“生物素基”是指生物素类的化学结构之中，含咪唑并赖氨酸环的杂环部分。在本说明书中“生物素类”的用语包含生物素及其类似物。作为生物素的类似物，可举出例如脱硫生物素、氧基生物素等。在本说明书中“亲和素类”的用语包含亲和素及其类似物。作为亲和素的类似物，可举出例如链霉亲和素、中性亲和素(商标)、Tamavidin(注册商标)等。亲和素类一般以由4个亚基构成的四聚体的形态存在。以下，如“1分子的链霉亲和素”一样言及1分子的亲和素类，1分子的亲和素类是指四聚体的亲和素类。1分子的亲和素类可与4个生物素基结合。
[0021]具有生物素基的IgA(以下，也称为“生物素化IgA”)可通过将IgA单体和生物素类由使用交联剂等的公知的方法结合而得到。也可使用市售的生物素标记试剂。1分子的生物素化IgA所具有的生物素基的数不特别限定，可为1个，也可为多个。IgA单体当是人来源时，也可为天然的IgA及重组型IgA之任一者。IgA的同种型也可为IgA1及IgA2之任一者。优选的同种型是IgA1。
[0022]在在本实施方式的方法中使用的校准物中，经生物素基和亲和素类的结合而形成了生物素化IgA和亲和素类的复合体。即，校准物是含生物素化IgA和亲和素类的复合体的试剂。在本实施方式中，此复合体相当于对于IgA凝集体的标准物质。复合体的一例示于图1。图中，“STA”表示链霉亲和素，“B”表示生物素基。在图1中，在1分子的链霉亲和素结合有4分子的生物素化IgA，但本专利技术不限定于此例。如图1所示，生物素化IgA和亲和素类的复合体是IgA的拟似的凝集体。由于此复合体可与在IgA凝集体的测定中使用的凝集素结合，通过使用含此复合体的校准物，可取得试样中的IgA凝集体的浓度。再者，在图1中，为方便起见、仅显示1个生物素化IgA所具有的生物素基，但如上所述，生物素化IgA也可具有多个生物素基。
[0023]生物素化IgA和亲和素类的复合体可通过将生物素化IgA和亲和素类混合而得到。混合的条件只要是蛋白质不变性的条件，就不特别限定。例如，也可将生物素化IgA的溶液和亲和素类的溶液混合，于4℃～40℃、优选于15℃～37℃搅拌或静置。
[0024]在本实施方式中，复合体优选由1分子的亲和素类和2、3或4分子的生物素化IgA构成。在生物素化IgA具有多个生物素基时，理论上、复合体可成为多个分子的亲和素类和多个分子的生物素化IgA连锁结合的巨大分子。但是，为实质上不发生那样的巨大分子，或即使发生也对本实施方式的方法无影响的程度的量。绝大部分的复合体是1分子的亲和素类和2、3或4分子的生物素化IgA的复合体、特别是1分子的亲和素类和4分子的生物素化IgA的复合体。这被认为是，因为由立体位阻等的原因，不发生生物素化IgA和亲和素类的连锁的结合。
[0025]在进一步的的实施方式中，校准物也可还含具有与凝集素结合的糖链及生物素基
的多肽(以下，也称为“生物素化载体蛋白质”)。其中，“多肽”的用语是指多个氨基酸由肽键结合的物质，还包含蛋白质及其片段等。在此校准物中，经生物素基和亲和素类的结合而形成了生物素化IgA、亲和素类和生物素化载体蛋白质的复合体。即，此校准物是含生物素化IgA、亲和素类和生物素化载体蛋白质的复合体的试剂。
[0026]生物素化载体蛋白质可通过将具有与凝集素结合的糖链的多肽(以下，也称为“载体蛋白质”)和生物素类由使用交联剂等的公知的方法结合而得到。也可使用市售的生物素标记试剂。1分子的生物素化载体蛋白质所具有的生物素基的数不特别限定，可为1个，也可为多个。
[0027]载体蛋白质只要是具有在本实施方式的方法中使用的凝集素能结合的糖链，就不特别限定。当是已知的凝集素时，特异性地结合有该凝集素的糖链的序列或结构是公知的。作为载体蛋白质，可举出例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.校准物，其含具有生物素基的IgA及亲和素类，且用于取得试样中的IgA凝集体的浓度。2.权利要求1所述的校准物，其为含所述具有生物素基的IgA和所述亲和素类的复合体的试剂。3.权利要求1所述的校准物，其为包括下列试剂的试剂组：含所述具有生物素基的IgA的试剂、和含所述亲和素类的试剂。4.权利要求1所述的校准物，其还含具有与凝集素结合的糖链及生物素基的多肽。5.权利要求4所述的校准物，其为含所述具有生物素基的IgA、所述亲和素类和所述多肽的复合体的试剂。6.权利要求4所述的校准物，其为包括下列试剂的试剂组：含所述具有生物素基的IgA的试剂、含所述亲和素类的试剂、和含所述多肽的试剂。7.含具有生物素基的IgA和亲和素类的复合体，其用于取得试样中的IgA凝集体的浓度。8.使用凝集素对试样中的IgA凝集体进行测定的方法，其包括使用含具有生物素基的IgA及亲和素类的校准物，取得所述试样中的IgA凝集体的浓度。9.权利要求8所述的方法，其中所述校准物是含所述具有生物素基的IgA和所述亲和素类的复合体的试剂。10.权利要求8所述的方法，其中所述校准物是包括下列多个试剂的试剂组：含所述具有生物素基的IgA的试剂、和含所述亲和素类的复合体的试剂，其中所述多个试剂中的所述复合体的浓度互相不同。11.权利要求8所述的方法，其中所述校准物还含所述具有与凝集素结合的糖链及生物素基的多肽。12.权利要求11所述的方法，其中所述多肽含选自M2BP、MUC1及α2M的至少1种糖蛋白质的全部或一部分。13....

【专利技术属性】
技术研发人员：高浜洋一，松崎英树，京藤拓也，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：