一种麻黄草分子身份证及其应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种麻黄草分子身份证及其应用。利用本发明专利技术所提供的分子身份证和方法可以准确的鉴定麻黄草，且属水平的分子身份证有效地避免了为不同麻黄属物种分别建立一种鉴别方法带来的繁琐工作；同时，本发明专利技术所提供的方法适用性更广，可检测所有能提取出DNA的样品中是否含有麻黄草，并能准确鉴定陈年样本中的麻黄草成分。因此，能够实现麻黄草原植物、药材、种子、种苗、粉末、粗提取加工品及复方制剂等的快速、准确鉴定。定。定。

【技术实现步骤摘要】
一种麻黄草分子身份证及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种麻黄草分子身份证及其应 用。

技术介绍

[0002]麻黄草为麻黄科麻黄属(Ephedra)多年生草本状小灌木的统称。麻黄属内 共有约67种，中国分布约15种，包括草麻黄(E.sinica)、木贼麻黄(E.equisetina)、 中麻黄(E.intermedia)、山岭麻黄(E.gerardiana)、丽江麻黄(E.likiangensis) 等。麻黄草具有发汗散寒、宣肺平喘等功效，已被广泛应用于风寒感冒、胸闷喘 咳、风水浮肿等症的临床治疗。因此，有必要开发一种能准确识别麻黄草，并可 用于检测混合材料、复方制剂及粗提加工品中是否含有麻黄草成分的鉴定方法。
[0003]本领域技术人员熟知的分子身份证是通过提取生物的DNA遗传信息来建 立的分辨不同生物的一个凭证，因为不同的生物所带有的遗传信息不同，因此分 子身份证将作为区分不同生物的有效凭证。然而，尽管分子身份证技术已经成熟， 但本领域技术人员理解，并不是所有的物种都能确定地筛选出普适性好、特异性 强的分子身份证。由于麻黄草分布的地理环境差别很大、种类繁多，据悉，人们 还未能找到一种适用于中国境内10种以上的麻黄草、且能与其他成分准确区分 开的麻黄草分子身份证。
[0004]另外，麻黄草是地球上古老的植物，据考古学家分析，3800年前古人就可 能食用麻黄，分析中就用到了麻黄的鉴定技术，但这些技术非常复杂，因为陈年 的标本中往往仅存痕量的DNA，人们很难找到一种灵敏而特异的麻黄草分子身 份证，使其用于从陈年标本的DNA中准确鉴定麻黄草。

技术实现思路

[0005]本专利技术的一个目的在于，提供一种可广泛适用于中国境内13个种以上的麻 黄草的通用分子身份证。
[0006]本专利技术的另一个目的在于提供一种麻黄草的鉴定方法，尤其是可用于鉴定 陈年样本中麻黄草的方法。所述方法同样可用于检测混合材料、复方制剂及粗提 加工品中是否含有麻黄草成分。
[0007]在一种情况下，陈年是指几十年或上百年，例如超过100年。
[0008]人们容易理解，比起常规的DNA降解严重的材料，陈年样品已仅剩痕量DNA， 所以，在陈年样品中鉴定麻黄草的难度更高。
[0009]为此，本专利技术首先提供一种麻黄草的最佳分子身份证，其在属水平上普适性 好、特异性好，能在陈年样品中准确鉴定麻黄草。
[0010]在具体实施例中，本专利技术麻黄草分子身份证为SEQ ID No.1所示的核苷酸序 列。
[0011]本专利技术还提供一种用于检测麻黄草成分的试剂盒，包含本专利技术的分子身份 证。
[0012]优选的，试剂盒中还包含如SEQ ID No.2(MH
‑
1F)及SEQ ID No.3(MH
‑ꢀ
1R)所示的引物序列。
[0013]优选的，试剂盒还包含DNA聚合酶、dNTP、MgCl2、缓冲液、染料、水、 使用说明书中的一种或几种。
[0014]本专利技术还提供一种麻黄草的鉴定方法，所述鉴定方法包括检测待测样品基 因组DNA中是否存在上述麻黄草分子身份证。
[0015]在一种实施例中，所述鉴定方法包括如下步骤：
[0016]1)提取待测样本中的DNA，获得样本中的全基因组DNA；
[0017]2)以步骤1)所得的全基因组DNA为模板，经PCR扩增，获得含有所述麻黄 草分子身份证区域的短序列片段；
[0018]3)对扩增产物进行测序，去除测序低质量区后拼接获得完整的扩增片段，检 测测序结果中是否存在所述麻黄草分子身份证。
[0019]本专利技术还提供了一种利用所述方法在检测粗提加工物、中成药及混合样本 中有无麻黄草成分的应用。
[0020]本专利技术还提供了上述麻黄草分子身份证，或鉴定方法，或试剂盒在麻黄草鉴 定中的应用。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的优势在于：
[0022]1)、本专利技术的分子身份证在麻黄草属水平的适用性最为广泛。
[0023]2)、本专利技术的分子身份证可用于陈年样品中麻黄草的鉴定。
[0024]3)、本专利技术的分子身份证可实现对混合样品、粗提加工品及复方制剂中否含 有麻黄草材料进行准确检测。
[0025]4)、毫无疑问，本专利技术的麻黄草分子身份证也能适用于新鲜的麻黄草、合成 的麻黄草、麻黄草原植物、麻黄草药材、麻黄草种子、麻黄草种苗、或麻黄草粉 末的快速、准确鉴定。
[0026]可以看出，本专利技术并不是简单地使用分子身份证技术来鉴别麻黄草，而是利 用分子身份证技术深度挖掘和筛选到一种特殊的麻黄草分子身份证：能够广泛 适用于中国境内13个种以上的麻黄草鉴别；能鉴定特殊条件下的麻黄属植物，尤 其是陈年样本麻黄草，以及鉴定中药等混合物中的麻黄草。
[0027]具体而言，本专利技术提供如下技术方案：
[0028]麻黄草分子身份证，其含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
[0029]本专利技术中，所述麻黄草分子身份证为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
[0030]本专利技术基于ITS2序列对麻黄属物种有一定鉴别能力的情况下，筛选麻黄属 物种在该序列区域内的保守片段并在NCBI(National Center for BiotechnologyInformation)序列数据库中进行BLAST分析，得到如SEQ ID No.1所示的核苷 酸序列。
[0031]本专利技术还提供一种麻黄草的鉴定方法，所述鉴定方法包括检测待测样品基 因组DNA中是否存在上述麻黄草分子身份证。
[0032]优选，所述方法包括如下步骤：
[0033]1)提取待测样本中的DNA，获得样本中的全基因组DNA；
[0034]2)以步骤1)所得的全基因组DNA为模板，经PCR扩增，获得含有所述麻黄 草分子身份证区域的短序列片段；
[0035]2)对扩增产物进行测序，去除测序低质量区后拼接获得完整的扩增片段，检 测测
序结果中是否存在所述麻黄草分子身份证。
[0036]根据本专利技术的一个优选实施方案，PCR扩增所使用的正向引物为SEQ IDNo.2所示的核苷酸序列，反向引物为SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。
[0037]MH
‑
1F：5
′‑
TCATCGAGTCTTTGAACGC
‑3′
(SEQ ID No.2)；
[0038]MH
‑
1R：5
′‑
ATGCGAAGGTCCCCTTTT
‑3′
(SEQ ID No.3)。
[0039]本专利技术还提供了一种利用所述方法在检测粗提加工物、中成药及混合样本 中有无麻黄草成分的应用。
[0040]一种用于检测麻黄草成分的试剂盒，包含如SEQ ID No.2及SEQ ID No.3所 述的引物序列。
[0041]优选地，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种麻黄草分子身份证，其特征在于，所述麻黄草分子身份证的核酸序列如SEQ ID No.1所示。2.一种麻黄草的鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法包括检测样品DNA中是否存在权利要求1所述的麻黄草分子身份证。3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1)提取待测样本中的DNA；2)以步骤1)的DNA为模板，进行PCR扩增；3)对扩增产物进行测序，检查测序结果中是否存在所述麻黄草分子身份证。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，PCR扩增采用的正向引物序列如SEQ ID No.2所示，反向引物序列如SEQ ID No.3所示。5.根据权利要求2
‑
4之一所述的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩建萍，王刚，白璇姣，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所，
类型：发明
国别省市：