一种饲用屎肠球菌原粉的制备方法技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，具体涉及一种饲用屎肠球菌原粉的制备方法，该制备方法包括下述步骤：（1）种子的制备方法；（2）接种屎肠球菌的制备方法；（3）接种枯草芽孢杆菌的制备方法；（3）培养液浓缩处理；（5）低温真空冷冻干燥。该方法优点是：采用分段培养方法先接入屎肠球菌，培养2～6小时形成优势菌，然后接入的枯草芽孢杆菌能代谢产生蛋白酶类，快速分解豆粕，产生多种小肽和营养因子，便于屎肠球菌的生长繁殖，屎肠球菌密度达180亿/毫升。屎肠球菌密度达180亿/毫升。

【技术实现步骤摘要】
一种饲用屎肠球菌原粉的制备方法


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种饲用屎肠球菌原粉的制备方法。

技术介绍

[0002]屎肠球菌等乳酸菌类益生菌在水产养殖中，可以起到抑制有害微生物、净化水质、改善水产动物生态环境、提高免疫力、促进生长的作用。侯树宇等研究复合微生态制剂在对虾养殖中的应用，研究结果表明，微生态制剂可以显著改善对虾养殖池中的水质，养殖池中CODCr明显下降，去除率高达84.7%；微生态复合菌制剂可显著降低养殖水中的CODCr，使水质处于一种良好的状态。胡毅等研究表明，在凡纳滨对虾饲料中添加益生菌，能使肠道蛋白酶和淀粉酶活力升高，并且能显著降低了肠道及粪便弧菌数（P<0.05），不同程度提高了凡纳滨对虾血清蛋白浓度、酚氧化酶活力、溶菌酶活力和总抗氧化力，有效提高免疫力。宋协法等研究益生茵对半滑舌鳎养殖水质及仔稚鱼生长的影响，结果表明，添加益生菌对养殖水质没有不良影响，并且可以有效提高半滑舌鳎仔稚鱼的增重率、肥满度和成活率，从而提高养殖的经济效益乳酸菌作为重要的益生菌已经广泛应用于食品、医药、轻工业和畜牧业等领域。乳酸菌主要作为饲料添加剂和养殖池塘水质调控剂应用于水产养殖中，能抑制病原菌的生长，防控病害，提高动物机体免疫力，促进生长，净化养殖水环境。高密度发酵培养基配制不合理，培养密度低，且在生长过程中不形成芽孢，抗性较差，在离心和冷冻干燥过程中，存活率较低、稳定性较差，使产品活菌数含量少，成本较高。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是为了解决上述问题，提供一种提高培养活菌数，提升冷冻干燥成活率和储存稳定性，并降低保护剂使用成本的屎肠球菌生产方法。
[0004]本专利技术的目的是为了克服上述不足而提供一种饲用屎肠球菌原粉的制备方法：发酵液活菌数达1.2～2.0
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10 cfu/mL，且稳定期延长，为后处理提供了更长的时间；冷冻干燥使用的保护剂来源广泛，价格便宜，用量适宜，成本较低；冷冻干燥存活率高达80%～95%，屎肠球菌原粉活菌数高达1.0
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12 cfu/g～1.5
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cfu/g。本专利技术产品可以应用于在水产养殖，主要作为饲料添加剂和养殖池塘水质调控剂。该方法优点是：采用分段培养方法先接入屎肠球菌，培养2～6小时形成优势菌，然后接入的枯草芽孢杆菌能代谢产生蛋白酶类，快速分解豆粕，产生多种小肽和营养因子，便于屎肠球菌的生长繁殖，屎肠球菌密度达180亿/毫升；屎肠球菌大都采用厌氧培养，接入芽孢杆菌后，可以采用通气搅拌培养，控制溶解氧为0，可以增强屎肠球菌的抗氧胁迫能力和储存稳定性；加入的保护剂来源广泛、价格便宜，降低了成本；生产的菌粉储存存活率高本专利技术通过下述技术方案实现的：一种饲用屎肠球菌原粉的制备方法，该制备方法包括下述步骤：（1）种子的制备方法；（2）接种屎肠球菌的制备方法；（3）接种枯草芽孢杆菌的制备方法；（3）培养液浓缩处理；（5）低温真空冷冻干燥。
[0005]其中：（1）种子的制备：取枯草芽孢杆菌斜面，用接种环挑取2环菌苔，接种于营养肉汤中，25～38℃条件下摇床培养12～18小时，得到枯草芽孢杆菌种子液；取屎肠球菌斜面，用接种环挑取2环菌苔，接种于MRS液体培养基中，25～38℃条件下静置培养18～28小时，得到屎肠球菌种子液；（2）接种屎肠球菌：取屎肠球菌种子液，按1%～10%接种量接种于发酵罐无菌发酵培养基中，调节pH5.0～7.2，不通气、转速60～120rpm搅拌培养2～6小时；（3）接种枯草芽孢杆菌：取枯草芽孢杆菌种子液，按1%～10%接种量接种于步骤（2）所述发酵罐中，通气量1：0.1～0.5、溶解氧0、搅拌转速60～120rpm，用20%NaOH自动控制pH5.2～6.0，4 h后一次性补料2%（V/V），继续培养6 h～20 h，得到培养液；（4）培养液浓缩处理：将步骤（3）所述培养液经蝶式离心机6000 rpm～7000 rpm离心得到菌泥，浓缩20倍～40倍，加入保护剂，搅拌均匀，得到菌悬液；（5）低温真空冷冻干燥：将步骤（4）所述菌悬液，分装入冻干盘，冷冻干燥后粉碎、包装即得屎肠球菌原粉。
[0006]其中所述步骤（1）中的枯草芽孢杆菌产蛋白酶能力较强，能快速分解豆粕为小肽，便于屎肠球菌生长利用。
[0007]其中步骤（2）中发酵培养基组成为：葡萄糖2～40g/L，蛋白胨1～20g/L，酵母粉1～15g/L，硫酸铵2～8g/L，豆粕2～30g/L，结晶乙酸钠1～10g/L，硫酸镁0.1～2g/L，硫酸锰0.1～2g/L，碳酸钙0～10g/L，吐温80 0.1～5g/L，磷酸氢二钾0.1～5g/L。
[0008]其中步骤（3）中补料培养基组成为：葡萄糖400～1000 g/L，115 ℃灭菌15 min～30 min。
[0009]其中所述步骤（4）保护剂配方为（按保护剂与菌泥质量比计）：糊精0.5%～10%，脱脂乳0.5%～10%，海藻糖0.1%～10%。
[0010]其中所述步骤（5）低温真空冷冻干燥条件为：预冻温度
‑
40℃～
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50℃，预冻时间2 h～8 h，前箱真空度为0.1 mba～0.2 mba，冷冻冻干时间为40 h～68 h。
[0011]本专利技术的优点和积极效果是：1、本专利技术方法，发酵液活菌数达1.2～2.0
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10 cfu/mL，且稳定期延长，为后处理提供了更长的时间。该方法优点是：采用分段培养方法先接入屎肠球菌，培养2～6小时形成优势菌，然后接入的枯草芽孢杆菌能代谢产生蛋白酶类，快速分解豆粕，产生多种小肽和营养因子，便于屎肠球菌的生长繁殖，屎肠球菌密度达180亿/毫升；屎肠球菌大都采用厌氧培养，接入芽孢杆菌后，可以采用通气搅拌培养，控制溶解氧为0，可以增强屎肠球菌的抗氧胁迫能力和储存稳定性；加入的保护剂来源广泛、价格便宜，降低了成本；生产的菌粉储存存活率高。
[0012]2、本专利技术方法，冷冻干燥使用的保护剂来源广泛，价格便宜，用量适宜，成本较低。
[0013]3、本专利技术方法，低温真空冷冻干燥存活率高达80%～95%，屎肠球菌原粉活菌数高达1.0
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12 cfu/g～1.5
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12 cfu/g。
具体实施方式
[0014]下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，本专利技术的实施方式不限于此。
[0015]实施例1
（1）种子的制备：取枯草芽孢杆菌斜面，用接种环挑取2环菌苔，接种于营养肉汤中，37℃条件下摇床培养18小时，得到枯草芽孢杆菌种子液；取屎肠球菌斜面，用接种环挑取2环菌苔，接种于MRS液体培养基中，37℃条件下静置培养18小时，得到屎肠球菌种子液；（2）接种屎肠球菌：取屎肠球菌种子液，按1%～10%接种量接种于发酵罐无菌发酵培养基中，调节pH6.5，不通气、转速72rpm搅拌培养4小时；（本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种饲用屎肠球菌原粉的制备方法，其特征在于该制备方法包括下述步骤：（1）种子的制备方法；（2）接种屎肠球菌的制备方法；（3）接种枯草芽孢杆菌的制备方法；（3）培养液浓缩处理；（5） 低温真空冷冻干燥。2.根据权利要求1所述的一种饲用屎肠球菌原粉的制备方法，其中：（1）种子的制备：取枯草芽孢杆菌斜面，用接种环挑取2环菌苔，接种于营养肉汤中，25～38℃条件下摇床培养12～18小时，得到枯草芽孢杆菌种子液；取屎肠球菌斜面，用接种环挑取2环菌苔，接种于MRS液体培养基中，25～38℃条件下静置培养18～28小时，得到屎肠球菌种子液；（2）接种屎肠球菌：取屎肠球菌种子液，按1%～10%接种量接种于发酵罐无菌发酵培养基中，调节pH5.0～7.2，不通气、转速60～120rpm搅拌培养2～6小时；（3）接种枯草芽孢杆菌：取枯草芽孢杆菌种子液，按1%～10%接种量接种于步骤（2）所述发酵罐中，通气量1：0.1～0.5、溶解氧0、搅拌转速60～120rpm，用20%NaOH自动控制pH5.2～6.0，4 h后一次性补料2%（V/V），继续培养6 h～20 h，得到培养液；（4）培养液浓缩处理：将步骤（3）所述培养液经蝶式离心机6000 rpm～7000 rpm离心得到菌泥，浓缩20倍～40倍，加入保护剂，搅拌均匀，得到菌悬液；（5）低温真空冷冻干燥：将步骤（4）所述菌悬液，分装入冻干盘，冷冻干燥后粉碎、...

【专利技术属性】
技术研发人员：江文涛，马家好，马加军，卢刚，
申请(专利权)人：广州金水动物保健品有限公司，
类型：发明
国别省市：