一种检测葡萄糖氧化酶活性的方法技术

本发明专利技术属于酶制剂检测技术领域，具体提供了一种检测葡萄糖氧化酶活性的方法。本发明专利技术在待测葡萄糖氧化酶液和葡萄糖及碘化钾充分反应后加入硫酸终止反应，然后使用硫代硫酸钠滴定生成的碘，从而定量的计算出葡萄糖氧化酶的酶活性。该检测方法操作简单，反应时间短，检测灵敏准确，反应过程中使用的均为常规化学试剂，检测过程安全，反应条件温和，适用于食品酿造、饲料添加、面粉改良、医药领域等，而且不需要制作过氧化氢标准曲线，避免操作误差导致结果不准确。果不准确。果不准确。

【技术实现步骤摘要】
一种检测葡萄糖氧化酶活性的方法


[0001]本专利技术属于酶制剂检测
，具体涉及一种检测葡萄糖氧化酶活性的方法。

技术介绍

[0002]葡萄糖氧化酶是一种需氧脱氢酶，能够以分子氧为受体，将β
‑
D
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葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢。由于葡萄糖氧化酶具有催化效率高、无毒副作用、高度专一性等特点，并能将葡萄糖氧化成葡萄糖酸而起到去除葡萄糖、脱氧、杀菌效果，因而被广泛应用于医药生产、食品加工、饲料添加等方面，全球GOD年总产值超过150亿元，且需求量逐年以10％
‑
30％速度递增。但是葡萄糖氧化酶的活力定义和检测方法没有国家标准，仅个别省份有地方标准，大多生产企业采用自己的企业标准测定。
[0003]目前，主要的葡萄糖氧化酶活力检测方法有滴定法、电化学法、分光光度计法、测压法、凝胶电泳法和傅里叶变换红外光谱法，其中电化学法、测压法、凝胶电泳法和傅里叶变换红外光谱法及连续分光光度法由于操作繁杂、仪器依赖和试剂缺乏等方面存在的问题，并未被大量推广使用。滴定法和普通分光光度计的原理均是葡萄本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测葡萄糖氧化酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)使用磷酸盐缓冲液稀释葡萄糖氧化酶作为待测酶液，记录稀释倍数为N，并将待测酶液预热；(2)配制葡萄糖溶液、碘化钾溶液和钼酸铵溶液，将三者混匀后预热，分为多份反应底物备用；(3)取V
1 ml预热后的待测酶液，加入到一份步骤(2)的反应底物中，酶解反应T分钟后立即加入硫酸溶液终止反应；(4)取V
1 ml磷酸盐缓冲液加入到另一份步骤(2)的反应底物中，T分钟后立即加入与步骤(3)中等量的硫酸溶液，作为空白对照组；(5)向步骤(3)得到的产物中滴加指示剂，混匀后，使用浓度为f mol/l的碘单质还原剂滴定至无色，记录碘单质还原剂消耗的体积为V
2 ml；同时对步骤(4)的空白对照组进行相同的滴定反应，记录碘单质还原剂消耗的体积为V
3 ml；(6)根据公式计算葡萄糖氧化酶活性X其中，a为碘单质还原剂与双氧水的换算系数；1000为转化因子。2.如权利要求1所述的检测葡萄糖氧化酶活性的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的磷酸盐缓冲液是由NaH2PO4·
2H2O和Na2HPO4·
12H2O混合制备的浓度为0.05
‑
0.25mol/l，pH...

【专利技术属性】
技术研发人员：程瑛，张成杰，徐丽，周樱，詹志春，
申请(专利权)人：武汉新华扬生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：