抗原的测定方法和测定装置制造方法及图纸

本发明专利技术提供一种抗原的测定方法，其具备：准备含有抗原的溶液；准备特异性识别抗原且与磁性载体结合了的第一抗体；准备特异性识别抗原且被氧化酶修饰的第二抗体；准备与氧化酶反应的底物(含有底物的底物液)；使第一抗体识别抗原；使第二抗体识别抗原；使用磁场，将被第一抗体和第二抗体识别的抗原的抗原抗体复合物捕捉到磁场内；将抗原抗体复合物在被捕捉在磁场内的状态下进行清洗；使底物与抗原抗体复合物反应而生成过氧化氢；以及测定过氧化氢。以及测定过氧化氢。以及测定过氧化氢。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗原的测定方法和测定装置


[0001]本专利技术涉及抗原的测定。

技术介绍

[0002]迄今为止，已开发了很多各种抗原的测定方法。但是，大多是大型的构成、到测定完成为止花费工夫及时间的方法。
[0003]例如，高效液相色谱法(HPLC法)中，为了提高测定的速度而需要使用高压泵，因此难以小型化。另外，还可以列举：装置价格昂贵；需要进行柱的定期维护；等。除此以外，还开发了酶法或免疫法这样的比以往的HPLC法更简便且能够进行短时间测定的方法，但需要高精度的光学装置，因此测定所需的装置仍然价格昂贵且容易大型化。
[0004]因此，要求简便且简单地测定各种抗原的方法和小型化的测定装置。

技术实现思路

[0005]本专利技术包括抗原的测定方法和测定器件。本专利技术的一个实施方式的抗原的测定方法可以具备：对于抗原，准备特异性识别上述抗原且与磁性载体结合了的第一抗体；和准备特异性识别上述抗原且被氧化酶修饰的第二抗体。可以使用磁场将被上述第一抗体和上述第二抗体识别的上述抗原的抗原抗体复合物捕捉到上述磁场内。可以将上述抗原抗体复合物在被捕捉在上述磁场内的状态下进行清洗。可以使底物与上述抗原抗体复合物反应而生成过氧化氢。可以测定上述过氧化氢。
附图说明
[0006]图1A是示意性地示出一个实施方式的抗原的测定的图。
[0007]图1B是示意性地示出一个实施方式的抗原的测定的图。
[0008]图1C是示意性地示出一个实施方式的抗原的测定的图。
[0009]图1D是示意性地示出一个实施方式的抗原的测定的图。
[0010]图1E是示意性地示出一个实施方式的抗原的测定的图。
[0011]图2是示出一个实施方式的抗原的测定步骤的流程图。
[0012]图3是示出一个实施方式的抗原的测定步骤的流程图。
[0013]图4是示出一个实施方式的抗原的测定步骤的流程图。
[0014]图5是示出所测定的输出电流的时间变化的曲线图。
[0015]图6是示出图5所示的电流值的各样品间的比较的柱状图。
[0016]图7是一个实施方式的抗原测定系统的示意图。
[0017]图8是一个实施方式的抗原测定系统的示意图。
[0018]图9是一个实施方式的抗原测定系统的示意图。
[0019]图10是一个实施方式的抗原测定系统的示意图。
[0020]图11是一个实施方式的抗原测定系统的示意图。
[0021]图12是一个实施方式的抗原测定系统的示意图。
[0022]图13是一个实施方式的抗原测定系统的示意图。
[0023]图14是一个实施方式的抗原测定系统的示意图。
具体实施方式
[0024]＜测定方法＞
[0025]本专利技术的一个实施方式的抗原的测定方法可以具备：
[0026]准备(在本专利技术中也称为预备、提供)含有抗原的溶液；
[0027]准备特异性识别上述抗原且与磁性载体结合了的第一抗体；
[0028]准备特异性识别上述抗原且被氧化酶修饰的第二抗体；
[0029]准备与上述氧化酶反应的底物(含有底物的底物液)；
[0030]使上述第一抗体识别上述抗原；
[0031]使上述第二抗体识别上述抗原；
[0032]使用磁场，将被上述第一抗体和上述第二抗体识别的上述抗原的抗原抗体复合物捕捉到上述磁场内；
[0033]将上述抗原抗体复合物在被捕捉在上述磁场内的状态下进行清洗；
[0034]使上述底物与上述抗原抗体复合物反应而生成过氧化氢；以及
[0035]测定上述过氧化氢。
[0036]作为测定对象的试样可以是溶液。溶液可以是体液，也可以是体液来源的溶液，也可以是体液的稀释液。溶液也可以是并非体液(非体液来源的)的溶液，也可以是体液或体液来源的溶液与非体液来源的的溶液的混合液。溶液可以是样品测定中使用的溶液，也可以是用于校正的测定中使用的溶液。例如，溶液可以是标准液、校正液。作为测定对象的试样可以是样本。
[0037]体液可以是血液。体液也可以是血液来源的溶液。体液例如可以是血浆、血清。体液也可以是淋巴液，也可以是组织间液、细胞间液、间质液等组织液，也可以是体腔液、浆膜腔液、胸水、腹水、心包液、脑脊液(髓液)、关节液(滑液)、眼房水(房水)。体液也可以是唾液、胃液、胆汁、胰液、肠液等消化液，也可以是汗、泪、鼻水、尿、精液、阴道液、羊水、乳汁。体液可以是动物的体液，也可以是人的体液。
[0038]“体液”可以是溶液。
[0039]溶液可以包含含有测定对象物质的、磷酸缓冲生理盐水(PBS)或N
‑
三(羟甲基)甲基
‑2‑
氨基乙磺酸缓冲液(TES)等生理缓冲液。溶液只要含有测定对象物质则没有特别限定。
[0040]溶液可以含有作为测定对象物质的抗原。例如，溶液可以是泪，测定对象物质可以是泪中所含的糖化白蛋白。或者，测定对象物可以是血液或血清中的白蛋白、糖化白蛋白、血红蛋白、糖化血红蛋白，也可以是间质液中的白蛋白、糖化白蛋白，也可以是泪中的白蛋白、糖化白蛋白，也可以是尿中的白蛋白、糖化白蛋白等。白蛋白可以是氧化型白蛋白(HNA)、还原型白蛋白(HMA)。
[0041]在一些实施方式中，抗原可以是蛋白质。在一些实施方式中，抗原可以含有蛋白质，也可以是蛋白质。在一些实施方式中，蛋白质可以是修饰蛋白质。修饰(modification)
例如可以是糖基化、乙酰化、磷酸化、甲基化、硝基化、脂质附加等。在一些实施方式中，抗原可以是糖化蛋白质。
[0042]在一些实施方式中，抗原可以是果糖胺。果糖胺可以是糖化蛋白质，也可以是糖化肽，也可以是糖化氨基酸。糖化蛋白质可以是糖化白蛋白，也可以是糖化血红蛋白。糖化蛋白质可以是AGE(Advanced Glycation End Products、糖化终产物、晚期糖化终末产物)。
[0043]在一些实施方式中，抗原可以是生物，也可以含有生物。例如，抗原可以是细菌，这种情况下，抗体例如可以是抗大肠杆菌抗体。例如抗原可以是病毒。例如抗体可以识别病毒表面的蛋白质。在抗原为细菌的情况下，作为抗体，例如可以使用抗病原性微生物抗体(针对大肠杆菌、利斯特菌、沙门氏菌的多克隆抗体。Sera care公司)、抗感染症病原菌抗体(针对螺旋杆菌、葡萄球菌等的多克隆抗体、Sera Care公司)、病原性微生物单克隆抗体(多功能性蛋白质研究所公司)等。作为以即使不识别细菌本身也可识别由大肠杆菌诱发的LPS抗体的抗体作为抗原的抗体，可以使用Anti
‑
E.coli LPS抗体(Abcam公司)。
[0044]抗原可以是半抗原(不完全抗原)。抗原可以是脂质、核酸或分子量为几百以下的低分子。抗原可以是生理活性物质。
[0045]“磁性载体”是含有与外部的磁场反应的磁性体材料的载体。用于磁性载体的材料可以是反磁性体，也可以是顺磁性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗原的测定方法，其具备：准备含有抗原的溶液；准备特异性识别所述抗原且与磁性载体结合了的第一抗体；准备特异性识别所述抗原且被氧化酶修饰的第二抗体；准备与所述氧化酶反应的底物；使所述第一抗体识别所述抗原；使所述第二抗体识别所述抗原；使用磁场，将被所述第一抗体和所述第二抗体识别的所述抗原的抗原抗体复合物捕捉到所述磁场内；将所述抗原抗体复合物在被捕捉在所述磁场内的状态下进行清洗；使所述底物与所述抗原抗体复合物反应而生成过氧化氢；以及测定所述过氧化氢。2.根据权利要求1所述的方法，其中，还具备：准备过氧化氢传感器，将所述抗原抗体复合物捕捉到所述磁场内包括：利用所述磁场将所述抗原抗体复合物捕捉到所述过氧化氢传感器的附近。3.根据权利要求1所述的方法，其中，还具备：在使用所述磁场将所述抗原抗体复合物捕捉到所述磁场内的同时将所述生成的过氧化氢分离到所述磁场外。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，作为测定对象的所述抗原包含修饰蛋白质。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述修饰蛋白质包含糖化蛋白质。6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第一抗体和所述第二抗体中的至少一者含有针对作为测定对象的糖化蛋白质的单克隆抗体。7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述第一抗体和所述第二抗体中的所述至少一者含有识别所述糖化蛋白质的糖化位点的单克隆抗体。8.根据权利要求6或7所述的方法，其中，所述第一抗体和所述第二抗体中的所述至少一者含有识别所述糖化蛋白质的由糖化产生的立体结构的单克隆抗体。9.根据权利要求5～8中任一项所述的方法，其中，所述第一抗体和所述第二抗体中的一者为识别所述糖化蛋白质的单克隆抗体，所述第一抗体和所述第二抗体中的另一者为识别所述糖化蛋白质的多克隆抗体。10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，所述氧化酶包含葡萄糖氧化酶，所述底物包含葡萄糖。11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，测定所述过氧化氢包括：使用过氧化氢电极。12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，测定所述过氧化氢包括：测定所述过氧化氢电极的电流；和根据所述电流测定所述溶液内的所述抗原的浓度。13.根据权利要求11或12所述的方法，其中，所述过氧化氢电极在其表面具有为了减少夹杂物的影响而形成的薄膜。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述过氧化氢电极被实质上由高分子构成的保护膜覆盖。15.根据权利要求1～14中任一项所述的方法，其中，所述抗原包含糖化白蛋白。16.根据权利要求15所述的方法，其中，含有所述糖化白蛋白的溶液包含生物体来源的体液。17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述体液为泪液或唾液。18.根据权利要求16所述的方法，其中，所述体液为血液、血浆或血清。19.根据权利要求15～18中任一项所述的方法，其中，对于所述糖化白蛋白，所述第一抗体和所述第二抗体中的一者为抗GA单克隆抗体，所述第一抗体和所述第二抗体中的另一者为抗白蛋白抗体。20.一种GA值的测定方法，其具备：准备含有糖化白蛋白和未糖化白蛋白的溶液；测定包含所述糖化白蛋白和所述未糖化白蛋白的白蛋白的总量；准备特异性识别所述糖化白蛋白且与磁性载体结合了的第一糖化白蛋白抗体；准备特异性识别所述糖化白蛋白且被氧化酶修饰的第二糖化白蛋白抗体；准备与所述氧化酶反应的底物；使所述第一糖化白蛋白抗体识别所述糖化白蛋白；使所述第二糖化白蛋白抗体识别所述糖化白蛋白；使用磁场，捕捉被所述第一糖化白蛋白抗体和所述第二糖化白蛋白抗体识别的所述糖化白蛋白的抗原抗体复合物；将所述糖化白蛋白的抗原抗体复合物在被捕捉在所述磁场内的状态下进行清洗；使所述底物与所述糖化白蛋白的抗原抗体复合物反应而生成过氧化氢；测定所述过氧化氢；以及根据所测定的所述过氧化氢的量和所测定的所述白蛋白的总量，求出所述糖化白蛋白量与总白蛋白量的比。21.根据权利要求20所述的方法，其中，测定包含所述糖化白蛋白和未糖化白蛋白的白蛋白的总量包括：光学测定白蛋白。22.根据权利要求21所述的方法，其中，光学测定所述白蛋白包括：使吸光...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫泽雄弥，
申请(专利权)人：株式会社普欧威盖特，
类型：发明
国别省市：