用于真核细胞的细胞培养基制造技术

本文提供了细胞培养基以及使用所述培养基进行细胞培养和从细胞中产生蛋白质的方法。基进行细胞培养和从细胞中产生蛋白质的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于真核细胞的细胞培养基


[0001]本专利技术整体涉及用于真核细胞的细胞培养基以及由其衍生的天然和重组产物的产生。

技术介绍

[0002]细胞培养物制造技术广泛用于生物医药的制备。随着对生物医药需求的增加，对增加细胞生长、活力和蛋白质产量的需求也显著增加。现在，人们在培养、喂养和维持细胞培养物的方法和策略上付出了很多努力。
[0003]考虑到大规模细胞培养过程的挑战和费用以及不断增长的对生物产品的更多数量和更低成本的需求，提供重组蛋白产生中甚至渐进式改进的新细胞培养方法是有价值的。需要对细胞培养过程、重组多肽表达、滴度和细胞活力进行改进，以提高产生水平，从而降低与制造蛋白质治疗剂相关的成本。

技术实现思路

[0004]基于蛋白质的生物医药产品的开发、制造和销售的增长导致对可以改善生物医药产品产生的产生方法的需求不断增加。
[0005]本文公开的实施方案通过提供用于制造此类生物医药产品的方法和培养基来满足上述需求。
[0006]本公开至少部分地提供了一种用于真核细胞的细胞培养基。
[0007]在一个示例性实施方案中，所述用于真核细胞的细胞培养基可以包括基础培养基。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以另外包含5
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甲硫腺苷。在该实施方案的另一个方面，所述细胞培养基可以包含至少约10nM 5
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甲硫腺苷。在该实施方案的又一个方面，所述细胞培养基可以包含约10nM至约200nM 5
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甲硫腺苷。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以另外包含烟酰胺。在该实施方案的另一个方面，所述细胞培养基可以包含至少约50nM烟酰胺。在该实施方案的又一个方面，所述细胞培养基可以包含约2000nM 5
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烟酰胺。在该实施方案的一个方面，在所述细胞培养基中生长的蛋白质的滴度比不包含至少约10nM 5
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甲硫腺苷的另一种细胞培养基高至少约2％。在该实施方案的在另一个方面，在所述细胞培养基中生长的蛋白质的滴度比不包含至少约50nM烟酰胺的另一种细胞培养基高至少约2％。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以任选地另外包含一种或多种选自下列的酸：乳酸、苯基乳酸、吲哚乳酸、琥珀酸、α
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羟基异戊酸、α
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羟基异己酸、2
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(4
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羟基
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苯基)乳酸或2
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羟基
‑3‑
甲基戊酸、这些酸的盐、这些酸的酯以及它们的组合。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以任选地另外包含糖、氨基酸、维生素、盐、痕量金属离子、嘌呤和/或嘧啶。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以包含5
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甲硫腺苷的盐或酯。在该实施方案的另一个方面，所述细胞培养基可以包含烟酰胺的盐或酯。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以具有约6.5至约8的pH。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基不具有来源于动物的蛋白质。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可
以是无血清培养基。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以是化学成分确定的培养基。
[0008]在一个示例性实施方案中，用于真核细胞的所述细胞培养基可以包含补料培养基。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以另外包含5
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甲硫腺苷。在该实施方案的另一个方面，所述细胞培养基可以包含至少约10nM 5
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甲硫腺苷。在该实施方案的又一个方面，所述细胞培养基可以包含约10nM至约200nM 5
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甲硫腺苷。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以另外包含烟酰胺。在该实施方案的另一个方面，所述细胞培养基可以包含至少约50nM烟酰胺。在该实施方案的又一个方面，所述细胞培养基可以包含约50nM至约2000nM5
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烟酰胺。在该实施方案的一个替代方面，所述细胞培养基可以另外包含5
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甲硫腺苷和烟酰胺。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以任选地另外包含一种或多种选自下列的酸：乳酸、苯基乳酸、吲哚乳酸、琥珀酸、α
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羟基异戊酸、α
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羟基异己酸、2
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(4
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羟基
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苯基)乳酸或2
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羟基
‑3‑
甲基戊酸、这些酸的盐、这些酸的酯以及它们的组合。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以任选地另外包含糖、氨基酸、维生素、盐、痕量金属离子、嘌呤和/或嘧啶。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以包含5
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甲硫腺苷的盐或酯。在该实施方案的另一个方面，所述细胞培养基可以包含烟酰胺的盐或酯。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以具有约6.5至约8的pH。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基不具有来源于动物的蛋白质。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以是无血清培养基。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以是化学成分确定的培养基。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养基可以任选地包含烟酰胺。在该实施方案的一个方面，在所述细胞培养基中生长的蛋白质的滴度比不包含至少约10nM 5
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甲硫腺苷的另一种细胞培养基高至少约2％。在该实施方案的在另一个方面，在所述细胞培养基中生长的蛋白质的滴度比不包含至少约50nM烟酰胺的另一种细胞培养基高至少约2％。
[0009]本公开至少部分地提供了一种产生蛋白质的方法。
[0010]在一个示例性实施方案中，所述产生蛋白质的方法可以包括在细胞培养物产生培养基中培养具有编码所述蛋白质的核酸的真核细胞，以及在一段时间内使用具有5
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甲硫腺苷的滋养培养基喂养所述真核细胞。在该实施方案的一个方面，所述滋养培养基可以具有至少约1nM 5
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甲硫腺苷。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养物产生培养基可以包含一种或多种选自下列的酸：乳酸、苯基乳酸、吲哚乳酸、琥珀酸、α
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羟基异戊酸、α
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羟基异己酸、2
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(4
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羟基
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苯基)乳酸或2
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羟基
‑3‑
甲基戊酸、这些酸的盐、这些酸的酯以及它们的组合。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养物产生培养基可以包含糖、氨基酸、维生素、盐、痕量金属离子、嘌呤和/或嘧啶。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养物产生培养基可以包含5
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甲硫腺苷的盐或酯。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养物产生培养基可以具有约6.5至约8的pH。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养物产生培养基不具有来源于动物的蛋白质。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养物产生培养基可以是无血清培养基。在该实施方案的一个方面，所述细胞培养物产生培养基可以是化学成分确定的培养基。在该实施方案的一个方面，所述真核细胞可以选自本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于表达阿柏西普的真核细胞的细胞培养基，所述细胞培养基包含：基础培养基或补料培养基；和5
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甲硫腺苷或烟酰胺。2.如权利要求1所述的细胞培养基，其中所述细胞培养基中的5
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甲硫腺苷的浓度为至少约10nM。3.如权利要求1所述的细胞培养基，其中所述细胞培养基中的烟酰胺的浓度为至少约50nM。4.如权利要求1所述的细胞培养基，其还包含一种或多种选自下列的酸：乳酸、苯基乳酸、吲哚乳酸、琥珀酸、α
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羟基异戊酸、α
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羟基异己酸、2
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(4
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羟基苯基)乳酸或2
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羟基
‑3‑
甲基戊酸、这些酸的盐、这些酸的酯以及它们的组合。5.如权利要求2所述的细胞培养基，其中在所述细胞培养基中产生的所述阿柏西普的滴度比不具有至少约10nM 5
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甲硫腺苷的另一种细胞培养基高至少约2％。6.如权利要求3所述的细胞培养基，其中在所述细胞培养基中产生的所述阿柏西普的滴度比不具有至少约50nM烟酰胺的另一种细胞培养基高至少约2％。7.如权利要求1所述的细胞培养基，其中所述5
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甲硫腺苷或所述烟酰胺可以是其盐或酯的形式。8.如权利要求1所述的细胞培养基，其中所述培养基的pH维持在约6.5至约8的范围内。9.如权利要求1所述的细胞培养基，其中所述培养基不具有来源于动物的蛋白质。10.如权利要求1所述的细胞培养基，其中所述培养基是无血清培养基。11.如权利要求1所述的细胞培养基，其中所述培养基是化学成分确定的培养基。12.一种用于培养真核细胞以增加阿柏西普的产量的方法，所述方法包括以下步骤：在细胞培养基中培养真核细胞；用5
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甲硫腺苷补充所述细胞培养基，其中所述5
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甲硫腺苷的浓度为约10nM至约200nM；以及在所述真核细胞中产生阿柏西普，其中用5
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甲硫腺苷补充使所述阿柏西普的滴度增加。13.如权利要求12所述的方法，其中所述阿柏西普的所述滴度比使用不具有至少约10nM 5
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甲硫腺苷的细胞培养基的另一种方法高至少约2％。14.如权利要求12所述的方法，其中所述细胞培养基还包含一种或多种选自下列的酸：乳酸、苯基乳酸、吲哚乳酸、琥珀酸、α
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羟基异戊酸、α
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羟基异己酸、2
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【专利技术属性】
技术研发人员：薛维，J，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：