一种重组I型人源化胶原蛋白C1L3T及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L3T及其制备方法和用途。本发明专利技术提供的重组I型人源化胶原蛋白C1L3T包含以SEQ ID No.3所示的序列，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T任选地包含以SEQ ID No.2所示的序列，优选地，以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列直接相连。本发明专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L3T的氨基酸序列源自天然胶原蛋白氨基酸序列，不仅分子量小于天然I型胶原蛋白，且相比I型胶原蛋白本身具有更加良好的细胞黏附效果，同时制备方法简单，可获得较高产量的胶原蛋白。量的胶原蛋白。量的胶原蛋白。

【技术实现步骤摘要】
一种重组I型人源化胶原蛋白C1L3T及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及一种重组I型人源化胶原蛋白C1L3T及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]胶原蛋白(collagen)是生物高分子，是动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，其可以占到蛋白质总量的25％～30％，在某些生物体内胶原蛋白的含量甚至高达80％以上。胶原蛋白主要分布于人体的皮肤、血管、骨骼、筋腱、牙齿和软骨等处，是这些组织的主要基质和支架，保护并连结各种组织，在体内发挥着重要的生理功能。
[0003]胶原蛋白最普遍的结构特征是由3条肽链形成的三螺旋结构，即由3条A肽链以右手超螺旋方式形成蛋白质，这样的三股螺旋区域被称为胶原区域。每个A肽链在分子结构上都是由重复出现的Gly
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X
‑
Y(X、Y代表Gly之外的任何氨基酸残基，X往往是Pro，Y往往是Hyp)肽段构成左手螺旋，3条链在氨基酸残基的相互作用下，以同一轴为中心，以右手超螺旋方式形成稳定的三股螺旋结构。在生物体中，胶原蛋白的合成和修饰从原胶原开始，经历了羟基化、糖基化、相互交联等诸多化学变化，受到了多种生物酶的复杂调控。原胶原除了含有胶原链之外，还含有球状的头部和尾部。没有这些头部和尾部，胶原链就不会折叠成为正确的三螺旋，从而缺乏胶原蛋白的生物学活性。因此，按照原始基因序列制备的胶原蛋白不可能在体外自发的组织形成正确的空间结构。这样的困难严重阻碍了人胶原蛋白的研发和生产。
[0004]当前市场上销售的胶原蛋白产品都是取自猪、牛、鱼等动物组织中。以胶原蛋白的氨基酸组成而言：哺乳动物猪、牛与人的相似度为95％，鱼与人的相似度65％。虽然哺乳动物猪、牛等与人的胶原蛋白相似度较高，但其难以避免病毒感染以及致敏性的危险。然而人体对于食用鱼类所萃取的胶原蛋白的利用率低于65％，无法完全被人体吸收与利用。
[0005]综上所述，目前的胶原蛋白只能在化妆品和保健品中使用，根本无法发挥胶原蛋白的原本生物学功能。

技术实现思路

[0006]专利技术要解决的问题
[0007]针对上述本领域中按照原始基因序列制备的胶原蛋白难以在体外自发的组织形成正确的空间结构，异源胶原蛋白容易诱发免疫反应及生物利用率低的情况，本专利技术提供了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L3T，同时提供了其制备方法和用途。
[0008]用于解决问题的方案
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L3T，其中，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T包含以SEQ ID No.3所示的序列。
[0010]进一步地，上述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T任选地包含以SEQ ID No.2所示的
序列；优选地，以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列直接相连。
[0011]进一步地，上述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T包含以下序列中的一种或多种：以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；与以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列具有80％、82％、85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，并且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果；以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果；由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果，所述严格条件是中等严格条件，中
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高严格条件，高严格条件或非常高严格条件。
[0012]第二方面，本专利技术提供了多核苷酸，其编码上述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T。
[0013]第三方面，本专利技术提供了表达载体，其包含上述第二方面所提供的多核苷酸。
[0014]第四方面，本专利技术提供了宿主细胞，其包含上述第三方面所提供的表达载体。
[0015]第五方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T的生产方法，其包括以下步骤：
①
在培养基中培养上述本专利技术在第四方面提供的宿主细胞并生产蛋白；
②
收获并纯化所述蛋白，优选用Ni柱和/或离子交换层析纯化所述蛋白；
③
任选地对所述蛋白进行酶切，优选用PPase蛋白酶酶切所述蛋白。
[0016]第六方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T在制备产品中的用途，其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0017]第七方面，本专利技术提供了包含上述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T的产品，其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0018]第八方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T在制备具有促进细胞黏附作用的产品中的用途。
[0019]专利技术的效果
[0020]通过上述技术方案的实施，本专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L3T的氨基酸序列源自天然胶原蛋白氨基酸序列，不仅分子量小于天然I型胶原蛋白，且相比I型胶原蛋白本身具有更加良好的细胞黏附效果，同时制备方法简单，可获得较高产量的胶原蛋白。
附图说明
[0021]图1为重组表达载体pET32a
‑
C1L3T的质粒图谱，其中C1L3T对应的氨基酸序列为SEQ ID No.4。
[0022]图2为蛋白C1L3T诱导表达及纯化后的凝胶电泳图，第1泳道为分子量Marker，第2泳道为PPase酶切后的C1L3T蛋白，第3泳道为用Ni柱提纯后的C1L3T蛋白，第4泳道为用Capto Q离子交换柱纯化后的C1L3T蛋白。
[0023]图3为商品化的人胶原蛋白和蛋白C1L3T的细胞黏附活性检测结果。
具体实施方式
[0024]以下对本专利技术的实施方式进行说明，但本专利技术不限定于此。除非另有说明，本专利技术中使用的仪器设备、试剂、材料等均可通过常规商业手段获得。
[0025]本专利技术中，使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。本说明书中，“任选的”或“任选地”是指接下来描述的事件或情况可发生或可不发生，并且该描述包括该事件发生的情况和该事件不发生的情况。
[0026]本专利技术中，“组织工程产品”是指用于组织工程的产品。组织工程是一门以细胞生物学和材料科学相结合，进行体外或体内构建组织或器官的新兴学科。
[0027]本专利技术中，“医疗器械”是指直接或者间接用于人体的仪器、设备、器具、体外诊断试剂及校准物、材料以及其他类似或者相关的物品。
[0028]本专利技术中，“中等严格条件”，“中
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高严格条件”，“高严格条件”或“非本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组I型人源化胶原蛋白C1L3T，其中，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T包含以SEQ ID No.3所示的序列。2.根据权利要求1所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L3T，其特征在于，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T任选地包含以SEQ ID No.2所示的序列；优选地，以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列直接相连。3.根据权利要求1或2所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L3T，其特征在于，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L3T包含以下序列中的一种或多种：以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；与以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列具有80％、82％、85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，并且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果；以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果；由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留以SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨霞，武庚风，张永健，
申请(专利权)人：山西锦波生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：