一种重组Ⅰ型人源化胶原蛋白C1L1T及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种重组Ⅰ型人源化胶原蛋白C1L1T及其制备方法和用途。本发明专利技术提供的重组Ⅰ型人源化胶原蛋白C1L1T包含以SEQ ID No.3所示的序列；任选地，所述重组Ⅰ型人源化胶原蛋白C1L1T包含以SEQ ID No.2所示的序列；优选地，以SEQ ID No.3所示的序列和以SEQ ID No.2所示的序列直接相连。本发明专利技术提供的重组Ⅰ型人源化胶原蛋白C1L1T具有促进细胞黏附的活性，所述重组Ⅰ型人源化胶原蛋白C1L1T的氨基酸序列选自天然I型人胶原蛋白氨基酸序列，应用于人体不会产生免疫反应，并且其制备方法简单，在低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。

【技术实现步骤摘要】
一种重组Ⅰ型人源化胶原蛋白C1L1T及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及一种重组Ⅰ型人源化胶原蛋白C1L1T及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]胶原蛋白(collagen)是一类蛋白质家族，在动物体内含量丰富，广泛分布在动物的皮肤、骨骼、肌腱、韧带和血管之中，是哺乳动物体内含量最多的一类蛋白质，也是细胞外基质的重要组成成分。人体中胶原蛋白含量占总蛋白的25％～30％，起着保护并连结各种组织的重要作用，在体内发挥着重要的生理功能。人体中含量最多的是I型胶原蛋白，约占85％以上，I型胶原蛋白在骨、皮肤、腱和角膜中含量高，II型存在于软骨、椎间盘和玻璃体中，III型存在于血管、新生皮肤和瘢痕组织中。
[0003]胶原蛋白具有很好的生物相容性、生物降解性以及生物活性，例如低免疫原性、在体内易被人体吸收，能促进细胞增殖、促进血小板凝结、参与细胞迁移、粘附等方面。因此胶原蛋白广泛的应用在医药化工、食品、化妆品等行业中。
[0004]然而，天然胶原蛋白不溶于水，性质不均一，很难被人体直接利用，往往需要利用化学手段处理之后再进行使用。当前市场上销售的胶原蛋白产品都是取自猪、牛、鱼等动物组织中，具有被病毒感染的风险，同时由于无法与人体相容，会导致免疫排斥反应和过敏症状的出现。所以，目前胶原蛋白只能在化妆品和保健品中使用，根本无法发挥胶原蛋白原本的生物学功能。
[0005]通过基因工程方法制备胶原蛋白，可以解决利用传统方式提取的胶原蛋白所带来的疾病感染风险，并且通过对胶原蛋白氨基酸序列进行优化，可以提高胶原蛋白的亲水性、稳定性，优化胶原蛋白的分子量，从而使制备的胶原蛋白具有良好的组织相容性、皮肤透过性和安全性。目前国外研究机构通过培育含人胶原蛋白基因的小鼠，得到了含有人胶原蛋白的乳汁，但是这样生产的成本过高，生产周期过长，无法投入大规模生产。

技术实现思路

[0006]专利技术要解决的问题
[0007]针对上述本领域中异源胶原蛋白容易诱发免疫反应且不易被人体吸收利用，以及人源胶原蛋白生产成本高、周期长、无法大规模生产等问题所导致的胶原蛋白利用率低的情况，本专利技术提供了一种重组Ⅰ型人源化胶原蛋白C1L1T，同时提供了其制备方法和用途。
[0008]用于解决问题的方案
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L1T，其中，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T包含以SEQ ID No.3所示的序列。
[0010]进一步地，在上述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T中，任选地，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T包含以SEQ ID No.2所示的序列；优选地，以SEQ ID No.3所示的序列和以SEQ ID No.2所示的序列直接相连。
[0011]进一步地，在上述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T中，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T包含：a)以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；b)与SEQ ID No.4的氨基酸序列具有90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，并且其保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果；c)SEQ ID No.4的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果；或d)由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码SEQ ID No.4的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果，所述严格条件是中等严格条件，中
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高严格条件，高严格条件或非常高严格条件。
[0012]第二方面，本专利技术提供了编码上述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T的多核苷酸。
[0013]第三方面，本专利技术提供了包含上述多核苷酸的表达载体。
[0014]第四方面，本专利技术提供了包含上述表达载体的宿主细胞。
[0015]第五方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T的生产方法，其包括以下步骤：
①
在培养基中培养上述本专利技术在第四方面提供的宿主细胞并生产蛋白；
②
收获并纯化所述蛋白，优选用Ni柱和/或阴离子交换层析纯化所述蛋白；和
③
任选地对所述蛋白进行酶切，优选用PPase蛋白酶酶切所述蛋白。
[0016]第六方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T在制备产品中的用途，其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0017]第七方面，本专利技术提供了包含上述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T的产品，其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0018]第八方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T在制备具有促进细胞黏附作用的产品中的用途。
[0019]专利技术的效果
[0020]通过上述技术方案的实施，本专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L1T相比I型胶原蛋白本身具有更加良好的细胞黏附效果，其氨基酸序列选自天然胶原蛋白氨基酸序列，应用于人体不会产生免疫反应，同时其制备方法简单，在低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。
附图说明
[0021]图1为重组表达载体pET32a
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C1L1T的质粒图谱，其中C1L1T对应的氨基酸序列为SEQ ID No.4。
[0022]图2为蛋白C1L1T诱导表达后的蛋白电泳图；第1泳道为用Ni柱提纯后的蛋白C1L1T，第2泳道为PPase酶切后的蛋白C1L1T，第3泳道为分子量Marker。
[0023]图3为人胶原蛋白、蛋白C1L1T细胞黏附活性检测结果。
具体实施方式
[0024]以下对本专利技术的实施方式进行说明，但本专利技术不限定于此。除非另有说明，本专利技术中使用的仪器设备、试剂、材料等均可通过常规商业手段获得。
[0025]本说明书中，使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两
方面的含义。本说明书中，“任选的”或“任选地”是指接下来描述的事件或情况可发生或可不发生，并且该描述包括该事件发生的情况和该事件不发生的情况。
[0026]本说明书中，“组织工程产品”是指用于组织工程的产品。组织工程是一门以细胞生物学和材料科学相结合，进行体外或体内构建组织或器官的新兴学科。
[0027]本说明书中，“医疗器械”是指直接或者间接用于人体的仪器、设备、器具、体外诊断试剂及校准物、材料以及其他类似或者相关的物品。
[0028]在本专利技术中，选择I型胶原蛋白序列为筛选优化的序列。所述人胶原I型COL1A1的序列是NCBI参照序列：NP_000079(SEQ ID No.1)，参见https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/NP_000079.2。
[0029][0030][0031]上述序列中粗体下本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组I型人源化胶原蛋白C1L1T，其中，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T包含以SEQ ID No.3所示的序列。2.根据权利要求1所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L1T，其特征在于，任选地，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T包含以SEQ ID No.2所示的序列；优选地，以SEQ ID No.3所示的序列和以SEQ ID No.2所示的序列直接相连。3.根据权利要求1或2所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L1T，其特征在于，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L1T包含：a)以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；b)与SEQ ID No.4的氨基酸序列具有90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，并且其保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果；c)SEQ ID No.4的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果；或d)由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码SEQ ID No.4的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留SEQ ID No.4的氨基酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨霞，武庚风，张永健，
申请(专利权)人：山西锦波生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：