一种中国被毛孢多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种中国被毛孢多糖及其制备方法和应用，属于多糖提取技术领域。本发明专利技术所述中国被毛孢多糖中糖残基的构型为α构型，糖苷键类型为(1

【技术实现步骤摘要】
一种中国被毛孢多糖及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及多糖提取
，尤其涉及一种中国被毛孢多糖及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]冬虫夏草为传统名贵中药材，是冬虫夏草菌和蝙蝠蛾科昆虫幼虫的复合体。研究表明，冬虫夏草中含有多糖、核苷、蛋白质或多肽、甾醇和D
‑
甘露醇等多种生物活性成分，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖、抗菌、抗疲劳和保肾保肝等多种药理功效。作为冬虫夏草的无性型菌株，中国被毛孢(Hirsutella sinensis Liu,Guo,Yu et Zeng,sp.nov.)具有抗疲劳、抗肿瘤、抗炎、保肾和抑制肺纤维化等多种药理活性，其发酵产物被广泛用于医药和保健食品，其最具代表性的产品为杭州华东医药股份有限公司生产的“百令胶囊”(中国被毛孢Cs
‑
C
‑
Q80发酵菌丝体)。2010年，中国被毛孢以冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)的无性型菌株被《中华人民共和国药典》(2010版)收录。
[0003]糖类化合物是自然界中存在最为广泛的，有着重要生物功能的一类化合物，包括单糖及其衍生物、寡糖、多糖和复合多糖等。真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离得到的一类活性多糖。作为一种天然生物大分子，真菌多糖因其广泛的药理活性和低毒副作用的优点，成为生物学和医学领域中的研究热点。冬虫夏草多糖(Cordyceps Polysacchride，CP)具有免疫调节、降血糖、抗肿瘤等多种药理功效，是冬虫夏草的主要活性成分之一。但是，中国被毛孢多糖的研究却始终未得到广泛关注。
[0004]作为野生冬虫夏草的重要补充替代资源，中国被毛孢，特别是发酵冬虫夏草菌粉Cs
‑
C
‑
Q80的化学成分和药理活性研究被越来越多的研究者关注。但是，由于多糖结构的复杂性，中国被毛孢中多糖类成分的研究还不够全面深入，现有研究主要集中在分离纯化技术和单糖组成方面，对其中多糖类成分的整体认识还不清楚。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种中国被毛孢多糖及其制备方法和应用，所述中国被毛孢多糖结构明确且具有优异的免疫调节活性。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种中国被毛孢多糖，具有式1所示结构：
[0008][0009]式1中，x+y+z＝80～90。
[0010]优选的，所述中国被毛孢多糖中糖残基的构型为α构型，糖苷键类型为(1
→
4)
‑
D
‑
葡聚糖，在O
‑
6、O
‑
3或O
‑
2连有单个α
‑
D
‑
Glcp分支；分子量M
w
为800～1000kDa。
[0011]本专利技术提供了上述技术方案所述中国被毛孢多糖的制备方法，包括以下步骤：
[0012]将中国被毛孢菌粉与水混合，进行提取，将所得提取液浓缩后，得到浓缩提取液；
[0013]将所述浓缩提取液与乙醇溶液混合，进行醇沉，得到中国被毛孢粗多糖；
[0014]将所述中国被毛孢粗多糖的水溶液进行阴离子交换柱层析分离，将所得分离产物依次进行第一洗脱、第一透析和第一干燥，得到中国被毛孢上级多糖；
[0015]将所述中国被毛孢上级多糖与氯化钠水溶液混合，将所得混合液采用凝胶过滤柱层析进行纯化，将所得纯化物依次进行第二洗脱、第二透析和第二干燥，得到中国被毛孢多糖。
[0016]优选的，所述中国被毛孢菌粉与水的用量比为1g:(5～20)mL。
[0017]优选的，所述提取的次数为1～4次，每次提取的温度独立为80～100℃，时间独立为1～3h；所述浓缩的温度为80～100℃。
[0018]优选的，所述乙醇溶液的质量浓度为95～100％；所述浓缩提取液与乙醇溶液混合所得混合液中乙醇的质量浓度为70～90％。
[0019]优选的，所述醇沉的温度为4～30℃，时间为12～36h。
[0020]优选的，所述中国被毛孢粗多糖的水溶液的浓度为1～20mg/mL；所述阴离子交换柱层析所用阴离子交换剂为DEAE
‑
纤维素。
[0021]优选的，所述中国被毛孢上级多糖与氯化钠水溶液混合所得混合液中，所述中国被毛孢上级多糖的浓度为1～20mg/mL；所述凝胶过滤柱层析所用凝胶过滤填料为Sepharose CL
‑
6B。
[0022]本专利技术提供了上述技术方案所述中国被毛孢多糖或上述技术方案所述制备方法制备得到的中国被毛孢多糖在制备免疫增强药物中的应用。
[0023]本专利技术提供了一种中国被毛孢多糖，所述中国被毛孢多糖中糖残基的构型和糖苷键为：α
‑
(1
→
4)
‑
D
‑
葡聚糖，在O
‑
6、O
‑
3或O
‑
2连有单个α
‑
D
‑
Glcp分支，分子量(M
w
)为800～1000kDa。该中国被毛孢多糖结构明确，具有免疫调节活性，能够与巨噬细胞、淋巴细胞等免疫细胞表面受体相互作用，激活其免疫功能，显著增强巨噬细胞的免疫功能且作用机制明确，增加免疫因子NO、IL
‑
1β、IL
‑
6和TNF
‑
α的生成，作用机制为激活巨噬细胞内p38、JNK和
NF
‑
κB信号通路；而且，该中国被毛孢多糖能够显著增强淋巴细胞免疫功能，增加脾淋巴细胞(T/B淋巴细胞)增殖，且免疫活性强于中国被毛孢粗多糖和中国被毛孢菌粉。
[0024]本专利技术提供了所述中国被毛孢多糖的制备方法，本专利技术采用水提醇沉的方法得到中国被毛孢多糖，然后采用色谱分离技术(包括阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱分离技术)，对中国被毛孢多糖分离纯化，得到结构明确且具有活性的中国被毛孢多糖，对冬虫夏草野生资源的替代研究和发酵菌粉多糖类产品的深入开发奠定了基础。
附图说明
[0025]图1为实施例1制备的HSWP
‑
2a的1H
‑
NMR谱图；
[0026]图2为实施例1制备的HSWP
‑
2a的
13
C
‑
NMR谱图；
[0027]图3为实施例1制备的HSWP
‑
2a的COSY
‑
NMR谱图；
[0028]图4为实施例1制备的HSWP
‑
2a的HSQC
‑
NMR谱图；
[0029]图5为实施例1制备的HSWP
‑
2a的HMBC
‑
NMR谱图；
[0030]图6为实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种中国被毛孢多糖，其特征在于，具有式1所示结构：式1中，x+y+z＝80～90。2.根据权利要求1所述的中国被毛孢多糖，其特征在于，所述中国被毛孢多糖中糖残基的构型为α构型，糖苷键类型为(1
→
4)
‑
D
‑
葡聚糖，在O
‑
6、O
‑
3或O
‑
2连有单个α
‑
D
‑
Glcp分支；分子量M
w
为800～1000kDa。3.权利要求1或2所述中国被毛孢多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将中国被毛孢菌粉与水混合，进行提取，将所得提取液浓缩后，得到浓缩提取液；将所述浓缩提取液与乙醇溶液混合，进行醇沉，得到中国被毛孢粗多糖；将所述中国被毛孢粗多糖的水溶液进行阴离子交换柱层析分离，将所得分离产物依次进行第一洗脱、第一透析和第一干燥，得到中国被毛孢上级多糖；将所述中国被毛孢上级多糖与氯化钠水溶液混合，将所得混合液采用凝胶过滤柱层析进行纯化，将所得纯化物依次进行第二洗脱、第二透析和第二干燥，得到中国被毛孢多糖。4.根据权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕宏涛，魏立新，戎林，李国强，肖远灿，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：