一种基于CRISPR-Cas系统检测RBSDV病毒的试剂盒及检测方法技术方案

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR
‑
Cas系统检测RBSDV病毒的试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及分子检测
，更具体的说是涉及一种基于CRISPR
‑
Cas系统检测RBSDV病毒的试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]水稻黑条矮缩病毒(Rice black
‑
streaked dwarfvirus，RBSDV)，是一种跨多物种传播的病毒性病害，严重威胁水稻、小麦及玉米等重要农作物的产量。该病毒属于植物呼肠孤病毒科(Reoviruses)斐济病毒属(Fijivirus)，由10条双链RNA组成，命名为S1～S10，可引起水稻的矮缩病、玉米的粗缩病及小麦的绿矮病。该病症在田间主要表现为植株的矮缩、叶片颜色浓绿、同时在叶片、叶鞘等位置出现白色蜡状条纹突起，严重影响作物产量。该病毒由白背灰飞虱(small brown planthopper，SBPH)传播，能够在不同的作物中迁飞从而引起持续性病害。白背灰飞虱在春小麦上取食带病毒材料后，感染并扩繁病毒，带病毒的灰飞虱传播侵染夏玉米及早稻，最本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR
‑
Cas系统检测RBSDV病毒的试剂盒，其特征在于，包括CRISPR
‑
AsCas12a、CRISPR
‑
LbCas12a、CRISPR
‑
LwCas13a、CRISPR
‑
RfCas13d系统中的至少一种；所述CRISPR
‑
AsCas12a系统包括：引物对S5
‑
F/S5
‑
R或S10
‑
F/S10
‑
R；AsCas12a蛋白；ssDNA探针；As
‑
S5
‑
crRNA或As
‑
S10
‑
crRNA；所述CRISPR
‑
LbCas12a系统包括：引物对S5
‑
F/S5
‑
R或S10
‑
F/S10
‑
R；LbCas12a蛋白；ssDNA探针；Lb
‑
S5
‑
crRNA或Lb
‑
S10
‑
crRNA；所述CRISPR
‑
LwCas13a系统包括：引物对(T7)S5
‑
F/S5
‑
R或(T7)S10
‑
F/S10
‑
R；LwCas13a蛋白；ssRNA探针；Lw
‑
S5
‑
crRNA或Lw
‑
S10
‑
crRNA；所述CRISPR
‑
RfCas13d系统包括：引物对(T7)S5
‑
F/S5
‑
R或(T7)S10
‑
F/S10
‑
R；RfCas13d蛋白；ssRNA探针；Rf
‑
S5
‑
crRNA或Rf
‑
S10
‑
crRNA；所述crRNA的序列如下：As
‑
S5
‑
crRNA：UAAUUUCUACUCUUGUAGAUGCUUUUUGCCAUUUUAGCAA；SEQ ID NO.21；Lb
‑
S5
‑
crRNA：UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUGCUUUUUGCCAUUUUAGCAA；SEQ ID NO.22；Lw
‑
S5
‑
crRNA：GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACGUUAUCGGCUUGUUCGUGGUUGAGAAUUCU；SEQ ID NO.23；Rf
‑
S5
‑
crRNA：CAAGUAAACCCCUACCAACUGGUCGGGGUUUGAAACGUUAUCGGCUUGUUCGUGGUUGAGAAUUCU；SEQ ID NO.24；As
‑
S10
‑
crRNA：UAAUUUCUACUCUUGUAGAUUCAGACCCUAACGAACAACG；SEQ ID NO.25；Lb
‑
S10
‑
crRNA：UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUUCAGACCCUAACGAACAACG；SEQ ID NO.26；Lw
‑
S10
‑
crRNA：GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACCACGUUCUAUUUGUUCAGCAUCAAGUUUGG；SEQ ID NO.27；Rf
‑
S10
‑
crRNA：CAAGUAAACCCCUACCAACUGGUCGGGGUUUGAAACCACGUUCUAUUUGUUCAGCAUCAAGUUUGG；SEQ ID NO.28；所述引物序列如下：S5
‑
F：5
’‑
CGAAAGTGAAGATGACCACAGATCCTTCCG
‑3’
；SEQ ID NO.33；S5
‑
R：5
’‑
ACTGAATCAACAATCGAGTCAATTGTTTGG
‑3’
；SEQ ID NO.34；(T7)S5
‑
F：5
’‑
AATTCTAATACGACTCACTATAGGGCGAAAGTGAAGATGACCACAGATCCTTCCG
‑3’
；SEQ ID NO.35；S10
‑
F：5
’‑
CATGATAGACTACAAACCGTAGAAACTAGC
‑3’
；SEQ ID NO.36；S10
‑
R：5
’‑
GAGCAGGAACTTCACGACAACATTTATCTA
‑3’
；SEQ ID NO.37；(T7)S10
‑
F：5
’‑
AATTCTAATACGACTCACTATAGGGCATGATAGACTACAAACCGTAGAAACTAGC
‑3’
；SEQ ID NO.38；所述ssDNA探针的序列如下：Poly C：5
’‑
CCCCCCCC
‑3’
；SEQ ID NO.39；探针5
’
端标记荧光报告基团；3
’
端标记荧光淬灭集团；所述ssRNA探针的序列如下：Poly rU：5
’‑
rUrUrUrUrU
‑3’
；探针5
’
...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢传晓，朱金洁，李丽娜，刘昌林，祁显涛，徐孝洁，黄晶，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：