LncRNA-063及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种LncRNA

【技术实现步骤摘要】
LncRNA
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063及其用途


[0001]本专利技术涉及一种LncRNA
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063及其用途。

技术介绍

[0002]肥胖是机体能量代谢失调的一种生理状态，表现为多余能量以脂肪的形式在体内大量积累。肥胖严重威胁着人类健康，它会诱发多种代谢性疾病，如脂肪肝、2型糖尿病、心血管疾病、特定类型的癌症等。机体的脂肪组织主要分为两类，即白色脂肪组织和棕色脂肪组织。在能量代谢方面，白色脂肪细胞内含有大量甘油三酯，因此白色脂肪组织主要作为储存机体能量的器官；与此相反，棕色脂肪细胞内含有大量线粒体，并高表达解偶联蛋白UCP1，可通过解偶联作用将储存的能量转化成热能散发出去，因此BAT被认为是消耗能量的器官。因此可以合理推测，若通过某种方法使白色脂肪向棕色脂肪转化，消耗机体多余能量，无疑将可延缓体重增加，减轻肥胖症的发展，并对肥胖相关疾病(如2型糖尿病)具有治疗作用。
[0003]长链非编码RNA(long noncoding RNAs,LncRNAs)是指一类长度大于200bp，没有编码蛋白功能的RNA分子。早期认为这些LncRNAs只是基因转录的副产物，没有特定的生理功能。但是，最近研究发现，很多LncRNAs具有非常重要的生理功能，其水平异常可导致发育缺陷及多种疾病的发生与发展。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种效果确切的LncRNA
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063及其用途。
[0005]本专利技术的技术解决方案是：
[0006]一种LncRNA
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063在制备促进机体能量代谢、抵抗肥胖制剂中的应用。
[0007]所述促进机体能量代谢、抵抗肥胖制剂为促进米色脂肪细胞向棕色脂肪细胞分化的制剂。
[0008]所述促进机体能量代谢、抵抗肥胖制剂是降低血糖、提高胰岛素敏感性的制剂。
[0009]本专利技术效果确切，LncRNA
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063通过促进米色脂肪细胞向棕色脂肪细胞分化有效促进机体能量代谢、抵抗肥胖；而且具有降低血糖、提高胰岛素敏感性的作用。
附图说明
[0010]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。
[0011]图1是LncRNA
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063序列示意图。
[0012]图2是LncRNA
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063诱导前体脂肪细胞向棕色脂肪分化示意图。
[0013]其中：(A)脂肪细胞油红染色；(B)定量PCR检测UCP1基因表达水平。***p<0.001，Student's t test分析。
[0014]图3是LncRNA
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063处理促进小鼠腹股沟米色脂肪组织向棕色脂肪组织转变示意图。
[0015](A)脂肪形态图；(B)定量PCR检测UCP1基因表达水平。***p<0.001，Student's t test分析。
[0016]图4是LncRNA
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063对2型糖尿病小鼠血糖水平的影响示意图。**p<0.01，Student's t test分析。
[0017]图5是LncRNA
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063对2型糖尿病小鼠血清胰岛素水平的影响示意图。*p<0.05，Student's t test分析。
[0018]图6是LncRNA
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063对2型糖尿病小鼠葡萄糖耐受能力的影响示意图。**p<0.01，***p<0.001，Student's t test分析。
[0019]图7是LncRNA
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063对2型糖尿病小鼠胰岛素耐受能力的影响示意图。*p<0.05，***p<0.001，Student's t test分析。
具体实施方式
[0020]一种LncRNA
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063在制备促进机体能量代谢、抵抗肥胖制剂中的应用。
[0021]所述促进机体能量代谢、抵抗肥胖制剂为促进米色脂肪细胞向棕色脂肪细胞分化的制剂。
[0022]所述促进机体能量代谢、抵抗肥胖制剂是降低血糖、提高胰岛素敏感性的制剂。
[0023]LncRNA
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063序列如图1所示((http://feb2014.archive.ensembl.org/Mus_musculus/Transcript/Exons？db＝core；g＝ENSMUSG00000075391；r＝2:35340361
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35341316；t＝ENSMUST00000179063))。为研究LncRNA
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063对米色脂肪棕色化的诱导作用，我们构建了表达LncRNA
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063的腺病毒(Ad
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LncRNA
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063)，用所构建好的表达LncRNA的腺病毒转导前体脂肪细胞，然后进行棕色脂肪细胞定向诱导，油红染色及qRT
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PCR结果表明LncRNA
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063可显著诱导前体脂肪细胞向棕色脂肪细胞分化(图2A)，并且棕色脂肪细胞特异性基因UCP1也呈高表达趋势(图2B)。在活体动物水平上，我们将表达LncRNA
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063的腺病毒(Ad
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LncRNA
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063)直接注射于肥胖小鼠(2型糖尿病模型小鼠)腹股沟米色脂肪组织。病毒注射3周后，发现腹股沟米色脂肪组织向棕色脂肪组织转变(图3A)，UCP1的表达也显著升高(图3B)。另外，LncRNA
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063可以显著降低2型糖尿病模型小鼠血糖(图4)及血清胰岛素水平(图5)。LncRNA
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063还可以显著提高肥胖小鼠的葡萄糖耐受(图6)和胰岛素耐受能力(图7)，说明LncRNA
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063可提高2型糖尿病模型小鼠体内葡萄糖清除能力，并能提高其胰岛素敏感性。
[0024]实验步骤
[0025]1、LncRNA
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063过表达病毒构建
[0026]过表达病毒制备：本研究中基因敲除是采用Invitrogen公司的Gateway系列试剂盒，首先用PCR扩增出LncRNA的完整序列，然后连入中间载体pENTR3C
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Entry Vector后送往公司测序，测序正确的载体通过重组的方法(LR)连入到目标载体(pAd
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CMV
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DEST Vector)中，测序检测正确后，将阳性质粒中抽，并经核酸内切酶PacI单切后用Invitrogen公司的Lipofectamine2000脂质体转染293A细胞。一周左右观察病毒斑形成情况，待绝大部分病毒斑出现后收集293A细胞并进行
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80℃和37℃的反复冻融使细胞破碎，离心收集上清即获得第一代病毒，将第一代病毒继续感染本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种LncRNA
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063在制备促进机体能量代谢、抵抗肥胖制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的LncRNA
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063在制备促进机体能量代谢、抵抗肥胖制剂中的应用，其特征是：所述促进机体能量代谢、抵抗肥胖...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙诚，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：