基于Cre-Loxp条件性敲除基因建立脑早衰小鼠模型的打靶载体、试剂盒、方法及应用技术

本公开提供一种基于Cre

【技术实现步骤摘要】
基于Cre
‑
Loxp条件性敲除基因建立脑早衰小鼠模型的打靶载体、试剂盒、方法及应用


[0001]本公开涉及生物
，尤其涉及一种基于Cre
‑
Loxp条件性敲除基因建立脑早衰小鼠模型的打靶载体、试剂盒、方法及应用。

技术介绍

[0002]细胞衰老(Cellular Senescence)是细胞发生不可逆的细胞周期停滞、大分子损伤、形成分泌型表型和代谢失调的现象，涉及不同的生理和年龄相关疾病的多种特征。细胞衰老研究大多聚焦于高增殖的细胞，由于细胞增殖引起端粒缩短，进而引起细胞复制性衰老。近期以来，以终末分化细胞神经元为主的脑和视网膜等器官的衰老研究表明，终末分化细胞也可发生细胞衰老，其衰老机制与高增殖细胞不同，其具体机制才刚刚揭示冰山一角。同时，对于脑衰老的研究，尚缺乏通过敲除非端粒酶相关基因的脑早衰的小鼠模型。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本公开的目的在于提出一种基于Cre
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Loxp条件性敲除基因建立脑早衰小鼠模型的打靶载体、试剂盒、方法及应用。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于Cre
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Loxp条件性敲除基因建立脑早衰小鼠模型的打靶载体，其中，所述打靶载体包括部分GDF11基因序列和两个Loxp位点；其中，两个Loxp位点分别位于GDF11基因中第二外显子的上下游。2.根据权利要求1所述的打靶载体，其中，所述打靶载体的序列包括SEQ ID NO.3所示的序列。3.基于Cre
‑
Loxp条件性敲除基因建立脑早衰小鼠模型的的试剂盒，其中，所述试剂盒包括：Cas9 mRNA；打靶载体，所述打靶载体的序列包括如SEQ ID NO.3所示的序列；以及gRNA，所述gRNA的作用位点的DNA序列为ggggtgaaggtatcagttagTGG。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括如下引物：GDF11
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floxp
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F：5
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TGAAGGTATCAGTTACACTCGCTAT
‑
3；GDF11
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floxp
‑
R：5
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TGAGCACTTCTCTTGACATCTAGAC
‑
3；GDF11
‑
wt
‑
F：5
‑
GGGTGAAGGTATCAGTTAGTGGG
‑
3；GDF11
‑
wt
‑
R：5
‑
GCTCTCATGTCGCTCAGGTTG
‑
3；loxp1
‑
F:5
‑
CAGGTGCAGCAAAGAGCATTAG
‑
3；loxp2
‑
R:5
‑
GCTCTCATGTCGCTCAGGTTG
‑
3。5.基于Cre
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Loxp条件性敲除基因建立脑早衰小鼠模型的方法，其中，所述方法包括如下步骤：构建条件性敲除GDF11基因的打靶载体；所述打靶载体的序列包括如SEQ ID NO.3所示的序列；通过CRISPR/Cas9技术，利用所述打靶载体构建条件性敲除GDF11基因的floxp小鼠；采用条件性敲除GDF11基因的floxp小鼠和CaMKⅡα
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Cre工具鼠，构建特异性敲除GDF11基因的小鼠模型。6.根据权利要求5所述的方法，其中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵经纬，王迪仙，董昭君，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：