一种抗真菌多肽漱口水及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗真菌多肽漱口水，包含有多肽A和多肽B，其中多肽A的氨基酸序列为Lys

【技术实现步骤摘要】
一种抗真菌多肽漱口水及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种抗真菌多肽漱口水及其制备方法。

技术介绍

[0002]口腔黏膜疾病(OMD)，也称为软组织口腔疾病，被描述为一系列影响口腔黏膜和软组织的疾病或病症。口腔黏膜疾病中最为常见且难以根治的是以口腔念珠菌病(OC)感染引起的复发性口腔溃疡。迄今为止，众多文献和研究已经证实白色念珠菌是口腔念珠菌病感染引起复发性口腔溃疡的主要病原体。
[0003]目前针对白色念珠菌感染的治疗主要围绕抗生素的使用展开，而由于近些年抗生素的滥用，许多抗生素在抑制白色念珠菌的过程中还破坏了原本定植在口腔中或呼吸道中的其他有益菌群的生存，这种微生物动态平衡的打破使得机会性真菌感染的发病率不断上升，使白色念珠菌感染的治疗面临严峻的挑战。虽然不断有新的抗真菌药物问世，为抗真菌治疗提供了新的契机，抗白色念珠菌药物具有毒副作用大、不良反应多等弊端，同时耐药报道也逐渐增加。因此需要发展新的抗白色念珠菌预防和治疗方法，扩大现有的抗真菌药物储备池。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术中的漱口水类产品多为具有镇痛或者消炎的作用，很少具有预防作用的抗白色念珠菌的作用，本专利技术主要通过抑制白色念珠菌的存活率和增殖来达到预防口腔溃疡的作用。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0006]一种抗真菌多肽漱口水，包含有多肽A和多肽B，其中多肽A的氨基酸序列为Lys
‑
Arg
‑/>Leu
‑
Phe
‑
Lys
‑
Lys
‑
Leu；多肽B的氨基酸序列为Asp
‑
Leu
‑
Ile
‑
Trp
‑
Lys
‑
Leu
‑
Leu。
[0007]优先的，多肽A和多肽B的摩尔比为1:3
‑
1:6。
[0008]进一步的，还包含有L
‑
抗坏血酸和胆钙化固醇，L
‑
抗坏血酸和胆钙化固醇的摩尔比为1:2
‑
1:9。
[0009]本专利技术所达到的有益效果是：本专利技术的抗真菌多肽漱口水可以抑制白色念珠菌增殖同时具体一定的抑炎作用，而且无抗生素滥用的危险，不会破坏原本定植在口腔中或呼吸道中的其他有益菌群的生存，无毒副作用和不良反应，通过小分子多肽的方法预防和保护口腔，可以有效抑制口腔溃疡的发生。
附图说明
[0010]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0011]图1为白色念珠菌特异性噬菌体的鉴定结果；
[0012]图2为多肽A和多肽B噬菌体对不同浓度白色念珠菌结合结果；
[0013]图3为多肽组分抑菌效果检测；
[0014]图4多肽组分抑炎作用检测。
具体实施方式
[0015]以下对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0016]实施例
[0017]本专利技术主要试剂配方包括：
[0018](1)LB培养基：每升含10g蛋白胨，5g酵母提取物，5g NaCl，高压灭菌，室温贮存；
[0019](2)LB/IPTG/Xgal平板：LB培养基+15g/L琼脂粉。高压灭菌，冷却至低于70℃时，加入1mL IPTG/Xgal，混匀倒平板。平板4℃避光贮存；
[0020](3)顶层琼脂：每升含10g蛋白胨，5g酵母提取物，5g NaCl，7g琼脂粉。高压灭菌，分成50ml等份，固体培养基室温贮存，用时微波炉融化；
[0021](4)四环素贮液：以20mg/mL的浓度溶于70％乙醇中，
‑
20℃避光贮存，用前摇匀；
[0022](5)LB
‑
Tet平板：LB培养基+15g/L琼脂粉。高压灭菌，冷却至低于70℃时，加入1mL四环素贮液，混匀倒平板，平板4℃避光贮存；
[0023](6)PEG8000/NaCl：20％(w/v)PEG
‑
8000，2.5mol/L NaCl，高压灭菌，室温贮存；
[0024](7)IPTG/Xgal配方：将1.25g IPTG(isopropylβ
‑
D
‑
thiogalactoside)和1g Xgal溶于25mL二甲基甲酰胺中，
‑
20℃避光贮存；
[0025](8)TBS：50mmol/L Tris
‑
HCl(pH 7.5)，150mmol/L NaCl。高压灭菌，室温贮存；
[0026](9)PBST溶液：在PBS溶液中加入体积比为0.05％/0.02％的吐温20
[0027](10)碘化物缓冲液：10mmol/L Tris
‑
HCl(pH 8.0)，1mmol/L EDTA，4mol/LNaI。室温避光贮存；
[0028](11)0.2mol/L Glycine
‑
HCl(pH 2.2)，1mol/L Tris
‑
HCl(pH 9.1)，高压灭菌，室温贮存。
[0029]结合白色念珠菌的多肽的筛选
[0030]1、噬菌体文库的扩增及纯化
[0031]接种E.coli ER2738单菌落于5
‑
10mL LB液体培养基中，37℃、200rpm摇床孵育至对数中期(OD600≈0.5)；加入10μL噬菌体，37℃、200rpm摇床震荡4
‑
5h，10000g离心10min，取上清；再次10000g离心10min，取80％上清，加入1/6体积的PEG8000/NaCl，4℃静置过夜。次日取出，白色沉淀即为噬菌体。10000g离心15分钟，倒掉上清，瞬时离心后轻轻吸出残留溶液；加入1mL TBS溶液溶解白色沉淀。
[0032]2、噬菌体滴度测定
[0033]接种E.coli ER2738单菌落于5
‑
10mL LB液体培养基中，37℃、250rpm摇床孵育至对数中期(OD600≈0.5)；微波炉加热融化顶层琼脂糖培养基，分成3mL/份分装到灭菌试管中，每个噬菌体稀释度用一管，保存于45℃备用；37℃预温LB/IPTG/Xgal琼脂平板，每个噬菌体稀释梯度取一个平板备用；用LB培养液对噬菌体进行10倍比系列稀释(稀释范围：扩增的噬菌体培养物上清：108‑
10
11
；未扩增的淘选洗脱物：101‑
104)；每个稀释度换一新鲜吸头，使用带滤芯吸头以避免交叉污染；当大肠杆菌菌液达对数中期时，将菌液分成200μL等份于
微量离心管中，每个噬菌体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗真菌多肽漱口水，其特征在于，包含有多肽A和多肽B，其中多肽A的氨基酸序列为Lys
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Arg
‑
Leu
‑
Phe
‑
Lys
‑
Lys
‑
Leu；多肽B的氨基酸序列为Asp
‑
Leu
‑
Ile
‑
Trp

【专利技术属性】
技术研发人员：周学章，乔亚蕊，秦希曦，薛頔，林雪，
申请(专利权)人：宁夏大学，
类型：发明
国别省市：