米糠活性肽在干预秀丽隐杆线虫衰老或肌肉损伤中的应用制造技术

本发明专利技术公开了米糠活性肽的新用途。本发明专利技术采用秀丽隐杆线虫为模式生物，试验了米糠活性肽对干预秀丽隐杆线虫衰老和肌肉损伤的作用，结果发现多个浓度的米糠活性肽对秀丽隐杆线虫有恢复肌肉损伤和延长寿命的作用。本发明专利技术阐释了米糠活性肽新的药理机制，为米糠活性肽的抗衰老以及修复肌肉损伤的应用提供了新的思路和手段。路和手段。

【技术实现步骤摘要】
米糠活性肽在干预秀丽隐杆线虫衰老或肌肉损伤中的应用


[0001]本专利技术涉及蛋白领域，特别涉及米糠活性肽在干预秀秀丽隐杆线虫衰老或肌肉损伤上的应用。

技术介绍

[0002]米糠蛋白有优良的营养价值，但随着食物精细化，米糠成为了稻米加工过程的副产物。因此，对其进行深加工，对副产物进行增值再利用具有十分重要的意义。米糠活性肽是通过对米糠蛋白进行水解，从米糠中提取的具有一定生物活性的肽。米糠活性肽已经在清除体内活性氧、自由基及抗氧化方面取得了较好的效果。
[0003]秀丽隐杆线虫（C.elegans）是当今世界唯一一个身体中所有细胞都能被逐个盘点归类的生物，并且具有寿命短、身体透明易于观察、饲养成本低、容易获取大量同期化样本、可长期保存、实验可操作性强等优点，已经成为人们科研探索中常用的模式生物。
[0004]肌肉损伤是一种多见于老年人以及运动员的肌肉健康问题。它的特点是肌纤维横截面积、肌核数目的减少；蛋白质含量、肌肉强度的下降等，它也关联发病和死亡的风险增加。尽管进行了数十年的研究，但尚无有效的方法可预防肌肉质量下降。
[0005]经过查阅资料，未见我国有关于米糠活性肽对秀丽隐杆线虫衰老或肌肉损伤的相关文献研究，因此关于米糠活性肽在抗衰老或肌肉损伤方面的研究尚待探索。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供米糠活性肽在干预秀丽隐杆线虫衰老或肌肉损伤中的应用，为米糠活性肽的进一步开发利用与推广提供参考理论依据。
[0007]为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种米糠活性肽在干预秀丽隐杆线虫衰老或肌肉损伤上的应用，所述米糠活性肽序列为Lys
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His
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Asn
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Arg
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Gly
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Asp
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Glu
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Phe。
[0008]所述的米糠活性肽干预线虫肌肉损伤的具体技术方案如下：游泳主要是对秀丽隐杆线虫体壁肌肉进行表征，通过游泳来判断米糠活性肽对体壁肌肉损伤的恢复作用。
[0009]实验分空白组、米糠活性肽低剂量组（0.05mM）、米糠活性肽中剂量组（0.1mM）、米糠活性肽高剂量组（0.3mM），每组30条线虫。L4期秀丽隐杆线虫挑至含有10μM地塞米松的NGM平板中（control组不含地塞米松）。地塞米松属于一种糖皮质激素。在这里我们将地塞米松作为一种构建肌肉损伤模型的损伤物。地塞米松作为构建肌肉损伤相关模型的药物最常见应用于细胞模型上，在近年来发表的文献中也有在小鼠上进行应用的。在实验过程中，我们以线虫的运动能力发生变化来评价造模的效果，为了证明其效果，我们从多个不同行为学指标来进行综合的判定，确定造模的成功。在造模过程中，为了说明该物质是造成一个群体范围的普遍损伤，因此我们不会选择性地挑选个别线虫。在20度下培养36h后，将线虫按组挑至只加了M9缓冲液的NGM平板中，其中M9缓冲液的配方如下：以1L计算，其中含有5g
氯化钠、3g磷酸二氢钾、6g磷酸氢二钠、0.12g硫酸镁。每组30条，待线虫适应5min后，将皿放置在荧光倒置显微镜下，40倍镜下用设备自带的摄像功能录制30s的视频，期间手动控制载物台操纵杆跟踪秀丽隐杆线虫的游泳。记录线虫游泳的频率，数据分析后绘图。游泳的频率计次按照其身体前半部分从左边摇晃到右边再晃回左边记为一次。
[0010]咽泵主要是对秀丽隐杆线虫咽部肌肉进行表征，通过咽泵来判断米糠活性肽对肌肉损伤的恢复作用。
[0011]实验分空白组、米糠活性肽低剂量组（0.05mM）、米糠活性肽中剂量组（0.1mM）、米糠活性肽高剂量组（0.3mM），每组30条线虫。L4期秀丽隐杆线虫挑至含有10μM地塞米松的NGM平板中（control组不含地塞米松）。我们同样使用地塞米松来作为损伤造模物质，造模过程类似体壁肌肉损伤造模。咽部肌肉损伤与体壁肌肉损伤是本申请人从不同的部位去评价其损伤的作用以及使用米糠活性肽保护的效果。在20度下培养36h后，将造模成功的线虫按组挑无食物的NGM平板中，每组30条，待线虫适应5min后，将皿放置在荧光倒置显微镜下100倍镜下用设备自带的摄像功能录制10s的视频，期间手动控制载物台操纵杆跟踪秀丽隐杆线虫的运动。记录线虫咽部小球上下晃动的频率，数据分析后绘图。晃动频率按照其咽部小球从上到下再回上去记为一次。此处使用无食物的NGM平板，是因为线虫的食物op50会在NGM板上形成一层菌膜。在实验过程中，我们发现线虫在含有食物的NGM板上，针对它咽泵的观察会有一定的影响。因此，为了便于实验观察和实验结果的准确，均使用无食物的NGM板。
[0012]头部摆动主要是对秀丽隐杆线虫头部肌肉进行表征，通过头部摆动来判断米糠活性肽对肌肉损伤的恢复作用。
[0013]实验分空白组、米糠活性肽低剂量组（0.05mM）、米糠活性肽中剂量组（0.1mM）、米糠活性肽高剂量组（0.3mM），每组30条线虫。L4期秀丽隐杆线虫挑至含有10μM地塞米松的NGM平板中（control组不含地塞米松），在20度下培养36h后，将线虫按组挑无食物的NGM平板中，我们同样使用地塞米松来作为损伤造模物质，造模过程类似体壁肌肉损伤造模。咽部肌肉损伤与体壁肌肉损伤是本申请人从不同的部位去评价其损伤的作用以及使用米糠活性肽保护的效果。一方面，为了确保损伤和保护的时间在各组间一致，一定要将线虫转移到新的平板上。而另一方面，线虫在带有食物的板子上爬行会受到食物的影响。因此，为了保证实验尽可能控制单一变量，选择将其转移至无食物平板。每组30条，待线虫适应5min后，将皿放置在荧光倒置显微镜下100倍镜下用设备自带的摄像功能录制10s的视频，期间手动控制载物台操纵杆跟踪秀丽隐杆线虫的运动。记录线虫头部摆动的次数，数据分析后绘图。头部摆动按照线虫头部轻点一次计数一次。
[0014]所述的米糠活性肽干预线虫寿命的具体技术方案如下：实验分空白组、米糠活性肽低剂量组（0.01mM）、米糠活性肽中剂量组（0.03mM）、米糠活性肽高剂量组（0.1mM），每组90条线虫。L4期秀丽隐杆线虫挑至将秀丽隐杆线虫挑至含有150μM五氟尿嘧啶的NGM平板中（五氟尿嘧啶用来抑制线虫的产卵），在20度下培养。前5天，每天将线虫转移到对应给药的新皿中（产卵期线虫需要及时转移，避免由于幼虫成长为成虫影响最后实验结果）。从第6天开始，每隔一天将存活的线虫转移到对应标记的新皿上培养。上述的新皿依旧为NGM板，其成分按照1L总体积计量，含有3g氯化钠、2.5g胰蛋白胨、20g琼脂粉以及浓度为1M的磷酸钾缓冲液（pH=6.0）25mL。每天观察记录线虫存活、死亡和丢失数目，直到所有线虫死亡，结束实验。实验过程中，由于操作失误转移死亡的线虫以及爬
到皿壁上的线虫都以丢失计。在实验后期，线虫常常不动，用挑虫棒触碰线虫头部，以受到外界刺激后无反应判定为死亡计数。
[0015]本专利技术所提供的米糠活性肽在干预秀丽隐杆线虫衰老或肌肉损伤上的应用，可以作为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种米糠活性肽在干预秀丽隐杆线虫衰老或肌肉损伤的应用，其特征在于，所述米糠活性肽序列为Lys
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His
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Asn
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Arg
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Gly
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Asp
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Glu
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Phe。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述米糠活性肽在制备抗秀丽隐杆线虫衰老或肌肉损伤的食品、药品或保健品中的应用。3.一种米糠活性肽在制备抗衰老或抗肌肉损伤的药物、食品或保健品中的应用，其特征在于，所述米糠活性肽序列为Lys
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His
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Asn
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Arg
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【专利技术属性】
技术研发人员：梁盈，吴钇心，林亲录，陈忠旭，蔡洁，吴伟，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：