一种血清补体C4测定试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种补体C4测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：三羟甲基氨基甲烷

【技术实现步骤摘要】
一种血清补体C4测定试剂盒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生化试剂测定
，特别涉及一种补体C4测定试剂盒，还涉及所述补体C4测定试剂盒制备方法和应用。

技术介绍

[0002]补体C4是一种多功能β1
‑
球蛋白，存在于血浆中。在补体传统途径活化中，C4被C1s水解为C4a、C4b，它们在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和病毒等方面发挥作用。
[0003]C4是补体经典激活途径的一个重要组分，它的测定有助于SLE等自身免疫性疾病诊断，治疗和病因探讨。降低：见于免疫复合物引起的肾炎、系统性红斑狼疮、病毒性感染、狼疮性症候群、肝硬化、肝炎等。增高：见于各种传染病、急性炎症、组织损伤、多发性骨髓瘤等。C4含量升高常见于风湿热的急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、心肌梗塞、Reiter综合征和各种类型的多关节炎等；降低则常见于自身免疫性慢性活动性肝炎、SLE、多发性硬化症、类风湿性关节炎、IgA肾病、亚急性硬化性全脑炎等。在SLE，C4的降低常早于其他补体成分，且缓解时较其他成分回升迟。狼疮性肾炎较非狼疮性肾炎C4值显著低下。
[0004]目前检测补体C4的方法有法有胶乳免疫比浊法、双抗夹心免疫化学发光法(ILMA)、胶体金比色法。双抗夹心免疫化学发光法(ILMA)，准确性和灵敏度高，但是仪器设备昂贵，试剂保存不方便，价格高；胶体金比色法，操作简单，出结果快，但是只能定性研究，无法定量。胶乳免疫比浊法法具有特异性高，操作简单快捷、准确安全、可自动化分析、成本较低的优点，但现有技术中国产试剂盒存在检测值偏低，稳定性差等缺点，本专利技术针对现有补体C4试剂盒的缺点进行改进以满足临床检测以及化学分析的要求。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供一种补体C4测定试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒是一种稳定性强，灵敏度高，重复性好，成本低的液体试剂盒。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种补体C4测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：缓冲液
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
20
‑
80mmol/L；NaCl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
9g/L；表面活性剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1%
‑
2%；防腐剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.5
‑
1 g/L。
[0007]试剂R2中含有以下成分：缓冲液
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
20
‑
80mmol/L；鼠抗人C4抗体包被胶乳颗粒
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.20%
‑
0.35%；稳定剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
10
‑
20g/L；
表面活性剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1%
‑
2%；增悬剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
10
‑
40g/L；防腐剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.5
‑
1g/L。
[0008]其中所述百分比为体积比。
[0009]优选地，所述试剂R1的pH 为7.0
‑
7.5。
[0010]优选地，所述试剂R2 的pH为6.5
‑
7.5。
[0011]优选地，所述试剂 R1 和R2试剂中的表面活性剂选自吐温
‑
20、曲拉通x
‑
100和聚氧乙烯二油酸酯中的一种或多种。
[0012]优选地，所述试剂 R2试剂中的稳定剂为牛血清白蛋白（BSA）、山梨醇和聚乙二醇6000中的一种或多种。
[0013]优选地，所述试剂 R2试剂中增悬剂为甘氨酸、蔗糖、甘露醇和丙三醇中的一种或多种。
[0014]优选地，所述试剂R1 和R2试剂中的防腐剂为叠氮钠、proclin300、MIT和苯甲酸钠中的一种或多种。
[0015]优选地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为1～5:1。更优选地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为3:1。
[0016]上述所述的补体C4测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：鼠抗人补体C4抗体包被胶乳颗粒的制备方法为：首先取适量表面羧基化的聚苯乙烯胶乳颗粒，胶乳颗粒的粒径为100nm和150nm质量比例为1：1，加入到10ml缓冲液中，使胶乳颗粒终质量浓度为2.0%；加入0.01g的硝酸钠，0.02g的1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐及0.03g的N
‑
羟基丁二酰亚胺，配成胶乳液；其次，取2ml浓度为1mg/mL的鼠抗人补体C4抗体，加入到10ml缓冲液中，加入0.02g 的1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐及0.03g 的N
‑
羟基丁二酰亚胺，配成抗体液；胶乳液和抗体液室温下各孵育搅拌30min；最后，胶乳液和抗体液等比例混合，室温下孵育搅拌60min；反应完，12000 rpm离心20分钟，去除上清，所得沉淀即为鼠抗人补体C4抗体包被胶乳颗粒；再加入其他试剂，配制成补体C4测定试剂盒。
[0017]本专利技术还公开了补体C4测定试剂盒的应用，用于非疾病的诊断和治疗目的测定血清中补体C4的浓度。
[0018]本专利技术试剂盒采用胶乳免疫比浊法，其反应原理为样本中的C4可与吸附在胶乳颗粒上的抗C4抗体产生抗原抗体的凝集反应，形成免疫复合物，通过测定该免疫复合物吸光度的变化，可算出样本中C4的含量。反应具有特异性，使用全自动生化仪进行检测，操作简单、自动化程度高，可减少人为误差，适合大多数临床实验室应用。
[0019]有益效果1）本专利技术稳定的补体C4测定试剂盒为液体双试剂，无需复溶配制，开瓶可以直接使用。
[0020]2）胶乳颗粒与抗体结合前，首先胶乳颗粒与硝酸钠，EDC及NHS孵育，抗体与EDC及NHS孵育，然后再进行混合孵育，硝酸钠可以更好的提高胶乳颗粒中羧基的活性。EDC及NHS可以提高抗体中氨基的活性，进而提高结合浓度和效率。两种胶乳颗粒的选择可以更好的提高样本检测样本准确度和线性，节约成本，使该试剂在市场中进一步的推广。
[0021]3）通过采用新型表面活性剂聚氧乙烯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种补体C4测定试剂盒，其特征在于，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：缓冲液
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
20
‑
80mmol/L；NaCl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
9g/L；表面活性剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1%
‑
2%；防腐剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.5 ~1 g/L；试剂R2中含有以下成分：缓冲液
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
20
‑
80mmol/L；鼠抗人C4抗体包被胶乳颗粒
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.20%
‑
0.35%；稳定剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
10
‑
20g/L；表面活性剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1%
‑
2%；增悬剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
10
‑
40g/L；防腐剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.5
‑
1g/L；其中所述百分比为体积比。2.根据权利要求1所述的补体C4测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的缓冲液体系为三羟甲基氨基甲烷
‑
盐酸缓冲液、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、哌嗪
‑
1,4
‑
二乙磺酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、N
‑
氨基甲酰甲基乙磺酸缓冲液或2
‑
(N
‑
吗啉代)乙磺酸缓冲液中的一种。3.根据权利要求1所述的补体C4测定试剂盒，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：解苇生，庄学伟，刘安娜，
申请(专利权)人：中拓医学检验有限公司中科梅奥山东医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：