一种牙髓间充质干细胞的培养方法技术

本发明专利技术公开一种牙髓间充质干细胞的培养方法，步骤包括把掉落下的牙齿清洗后放在无菌取样瓶中，然后把无菌取样瓶放进医用冰袋中储存；使用生理盐水冲洗牙髓腔，使牙髓质被水流带出牙髓腔、进入生理盐水中；把带有牙髓质的生理盐水经过过滤得到固体的牙髓质，把粉碎后的牙髓质浸入生理盐水中，得到牙髓组织液；向牙髓组织液中加入胶原酶，消化30分钟，然后把终止消化的牙髓间干细胞培养基重悬，接种至培养瓶中扩增培养。本发明专利技术在取样时钻透牙本质然后冲洗取样能够避免在取样时污染牙釉质，并且冲洗能够避免取样时取到牙本质细胞层、乏细胞层和多细胞层的杂质，通过粉碎牙釉质再浸入生理盐水得到的牙髓组织液能够减少牙髓中的纤维、神经等杂质成分。维、神经等杂质成分。维、神经等杂质成分。

【技术实现步骤摘要】
一种牙髓间充质干细胞的培养方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养领域，特别是涉及一种牙髓间充质干细胞的培养方法。

技术介绍

[0002]牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内，是牙体组织中唯一的软组织。由牙髓组织中分离出的成纤维状细胞就称为牙髓干细胞，牙髓干细胞具有多向分化的潜能，它除了能形成矿化结节能力的细胞外，经过不同细胞因子的诱导，还能够分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、血管内皮、肝、神经等细胞系类型，现有牙髓干细胞培养过程中对牙髓质进行取样的时候，容易混入牙本质细胞层、乏细胞层和多细胞层等杂质，这些杂质会减低提取干细胞的效果，并且牙髓质中的纤维、神经等杂质成分会影响牙髓干细胞培养的成功率，所以需要能够提高牙髓质取样的纯度的一种牙髓间充质干细胞的培养方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的就在于为了解决上述问题而提供一种牙髓间充质干细胞的培养方法。
[0004]本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：一种牙髓间充质干细胞的培养方法，包括如下步骤：
[0005](1)牙齿保存：把掉落下的牙齿清洗后放在无菌取样瓶中；
[0006](2)牙髓质取样：从取样瓶中取出牙齿，钻头穿透牙本质，使牙髓质暴露出来，然后使用生理盐水冲洗牙髓腔，使牙髓质被水流带出牙髓腔、进入生理盐水中；
[0007](3)样品处理：把带有牙髓质的生理盐水经过过滤得到固体的牙髓质，然后把牙髓质进行粉碎，把粉碎后的牙髓质浸入生理盐水中，得到牙髓组织液；
[0008](4)提取干细胞：向牙髓组织液中加入胶原酶，将其转移至离心管中进行消化30分钟，把消化后的组织液加入培养基中终止消化，然后把培养基离心、牙髓间干细胞培养基重悬，接种至培养瓶中；
[0009](5)扩增培养：把步骤(4)中的培养瓶中的培养基转移到十二孔板中，在35℃
‑
37℃、4.5％
‑
5.5％CO2、饱和湿度条件下培养。
[0010]优选的：所述步骤(1)中的所述牙齿是没有牙髓组织病变的健康牙齿。
[0011]优选的：所述步骤(1)中清洗牙齿时，先用医用消毒液擦拭牙齿表面，然后浸泡入生理盐水中稀释表面的消毒液。
[0012]优选的：所述步骤(1)中进行擦拭牙齿表面后静置60s以上再把牙齿浸入生理盐水中。
[0013]优选的：所述步骤(2)中进行取样时，从牙齿的两侧钻孔，每一侧的钻头穿透牙本质后停止，使牙髓质的暴露出来。
[0014]优选的：所述步骤(2)中进行钻孔前，需要对牙齿擦干并且固定。
[0015]优选的：所述步骤(2)中使用生理盐水冲洗牙髓腔时，需要加压冲洗，并且冲洗牙
髓腔的生理盐水循环使用。
[0016]优选的：所述步骤(2)中进行冲洗时，生理盐水从牙齿一侧的孔中进入牙髓腔，并从另一侧的孔洞中流出牙髓腔。
[0017]优选的：所述步骤(2)中进行取样时在无菌环境下进行。
[0018]优选的：所述步骤(4)中的所述胶原酶是浓度为10mg/ml
‑
12mg/ml的Ⅰ型胶原酶。
[0019]优选的：所述步骤(4)中把消化后的组织液倒入培养基后，缓慢搅拌均匀。
[0020]优选的：所述上连杆与所述包围铰接，所述下连杆与所述包围铰接。
[0021]优选的：所述步骤(4)中进行离心时的温度是25℃，时间是10分钟，离心力是1100rpm/min
‑
1400rpm/min。
[0022]优选的：所述步骤(5)中在牙髓间充质干细胞进行扩充培养12h后，通过显微镜进行取样观察，筛选出干细胞。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
[0024]1、在取样时钻透牙本质然后冲洗取样能够避免在取样时污染牙釉质，并且冲洗能够避免取样时取到牙本质细胞层、乏细胞层和多细胞层的杂质；
[0025]2、通过粉碎牙釉质再浸入生理盐水得到的牙髓组织液能够减少牙髓中的纤维、神经等杂质成分。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]图1是本专利技术所述一种牙髓间充质干细胞的培养方法的步骤示意图。
具体实施方式
[0028]在本专利技术的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制。此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”等的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本专利技术的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
[0029]在本专利技术的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以通过具体情况理解上述术语在本专利技术中的具体含义。
[0030]下面结合附图对本专利技术作进一步说明：
[0031]实施例1
[0032]如图1所示，一种牙髓间充质干细胞的培养方法，包括如下步骤：
[0033](1)牙齿保存：把掉落下的牙齿清洗后放在无菌取样瓶中，然后把无菌取样瓶放进医用冰袋中储存24h内进行牙髓质的取样；
[0034](2)牙髓质取样：从取样瓶中取出牙齿，钻头穿透牙本质，使牙髓质暴露出来，然后使用生理盐水冲洗牙髓腔，使牙髓质被水流带出牙髓腔、进入生理盐水中；
[0035](3)样品处理：把带有牙髓质的生理盐水经过过滤得到固体的牙髓质，然后把牙髓质进行粉碎，把粉碎后的牙髓质浸入生理盐水中，得到牙髓组织液；
[0036](4)提取干细胞：向牙髓组织液中加入胶原酶，将其转移至离心管中进行消化30分钟，把消化后的组织液加入培养基中终止消化，然后把培养基离心、牙髓间干细胞培养基重悬，接种至培养瓶中；
[0037](5)扩增培养：把步骤(4)中的培养瓶中的培养基转移到十二孔板中，在36.5℃、5.2％CO2、饱和湿度条件下培养。
[0038]所述步骤(1)中的所述牙齿是没有牙髓组织病变的健康牙齿。所述步骤(1)中清洗牙齿时，先用医用消毒液擦拭牙齿表面，然后浸泡入生理盐水中稀释表面的消毒液。所述步骤(1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种牙髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)牙齿保存：把掉落下的牙齿清洗后放在无菌取样瓶中储存；(2)牙髓质取样：从取样瓶中取出牙齿，钻头穿透牙本质，使牙髓质暴露出来，然后使用生理盐水冲洗牙髓腔，使牙髓质被水流带出牙髓腔、进入生理盐水中；(3)样品处理：把带有牙髓质的生理盐水经过过滤得到固体的牙髓质，然后把牙髓质进行粉碎，把粉碎后的牙髓质浸入生理盐水中，得到牙髓组织液；(4)提取干细胞：向牙髓组织液中加入胶原酶，将其转移至离心管中进行消化30分钟，把消化后的组织液加入培养基中终止消化，然后把培养基离心、牙髓间干细胞培养基重悬，接种至培养瓶中；(5)扩增培养：把步骤(4)中的培养瓶中的培养基转移到十二孔板中，在35℃
‑
37℃、4.5％
‑
5.5％CO2、饱和湿度条件下培养。2.根据权利要求1所述的一种牙髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中的所述牙齿是没有牙髓组织病变的健康牙齿。3.根据权利要求1所述的一种牙髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中清洗牙齿时，先用医用消毒液擦拭牙齿表面，然后浸泡入生理盐水中稀释表面的消毒液。4.根据权利要求3所述的一种牙髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中进行擦拭牙齿表面后静置60s以上再把牙齿浸入生理盐水中。5.根据权利要求1所述的一种牙髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中进行取样时，从牙齿的两侧钻孔，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵辉，高萧芳，孙宪凯，崔兰云，段书娇，
申请(专利权)人：郑州源创吉因实业有限公司，
类型：发明
国别省市：