一种具有免疫抑制活性的细胞松弛素类化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术首先通过对Phomopsis asparagi DHS

【技术实现步骤摘要】
一种具有免疫抑制活性的细胞松弛素类化合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种具有免疫抑制活性的细胞松弛素类化合物 及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]细胞松弛素，又称植物抗毒素，是一大类真菌代谢产物，其典型特征是以高度可替的氢 化异吲哚环连接到一大环。由于结构的差异性，这类化合物表现出不同的生物活性，其中包 括免疫调节、细胞毒性、抑制肿瘤和杀线虫活性。目前该家族已分离得到至少300个化合物， 包括常见的细胞松弛素A～H，其中细胞松弛素B和细胞松弛素C是被广泛研究的两种。
[0003]目前，鲜见关于细胞松弛素类化合物在免疫抑制方面的研究。徐国波等在《球毛壳菌 CIB
‑
160次生代谢产物的分离鉴定及其免疫活性》中报道，对球毛壳菌CIB
‑
160的次生代谢 产物进行纯化，得到10个化合物。体外免疫活性检测显示化合物1～6细胞松弛素类化合物显 示较强的抑制活性，但同时在低浓度下对静息脾细胞具有杀伤作用。

技术实现思路

[0004]鉴于现有技术的不足，为了解决上述问题，本专利技术的目的在于提供一种具有免疫抑制活 性的细胞松弛素类化合物及其制备方法和应用。
[0005]本专利技术方案包括以下内容：
[0006]本专利技术首先提供一种细胞松弛素类化合物，结构式如下所示：
[0007][0008]另一方面，本专利技术还提供了所述的细胞松弛素类化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0009]将天门冬拟茎点霉Phomopsis asparagi发酵物用乙酸乙酯浸提，得提取物，将提取物浓 缩后加水混悬，得混悬物，混悬物用有机溶剂萃取，得到二氯甲烷提取物、乙酸乙酯提取物； 合并二氯甲烷提取物和乙酸乙酯提取物，然后在硅胶柱上使用CH2Cl2‑
MeOH进行梯度洗脱， 极性依次递增，得到组分Fr.1～Fr.8；组分Fr.2使用CH2Cl2‑
EtOAc进行硅胶梯度洗脱，极 性依次递增，得到组分Fr.2.1～2.6；组分Fr.2.5在硅胶柱上用MeOH
‑
H2O梯度洗脱得到权利 要求1所述化合物。
[0010]优选的，所述发酵物为将天门冬拟茎点霉接种至大米培养基中，避光静置发酵培
养所得 的发酵物。
[0011]优选的，MeOH
‑
H2O的体积比为1:1。
[0012]优选的，组分Fr.2.5在RP
‑
18硅胶柱上用MeOH
‑
H2O梯度洗脱得到目标化合物。
[0013]本专利技术还进一步提供了所述化合物在制备免疫抑制剂方面的应用，所述化合物的结构式 为：
[0014][0015]本专利技术还涉及一种产生所述细胞松弛素类化合物的真菌Phomopsis asparagi DHS
‑
48，该 真菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO:M2021318，保藏日2021年3月 31，保藏地址为中国
·
武汉
·
武汉大学。
[0016]本专利技术所取得的有益效果：
[0017]本专利技术首先通过对Phomopsis asparagi DHS
‑
48发酵物的进一步分离纯化，得到了具有新 颖结构的细胞松弛素类化合物。经过对该化合物的细胞毒性和免疫抑制活性进行的评估，证 明化合物对小鼠脾细胞有较低的细胞毒性且具有明显的免疫抑制活性。作用机制研究显示该 化合物是一种潜在的能抑制细胞内磷酸化的NFAT蛋白去磷酸化的免疫抑制剂，可用于制备 针对器官移植和自身免疫性疾病的免疫抑制药物。
附图说明
[0018]图1：化合物1、化合物2的COZY和HMBC相关性
[0019]图2：化合物1、化合物2的NOESY相关性
[0020]图3：实验和计算的化合物1～2电子圆二色性(ECD)光谱
[0021]图4：实施例3实验结果
[0022]图5：实施例5实验结果
[0023]图6：实施例6实验结果
[0024]图7：实施例7实验结果
[0025]图8：实施例8实验结果
[0026]图9：实施例8实验结果
[0027]图10：实施例9实验结果
[0028]图11：化合物1的1H
‑
NMR图谱
[0029]图12：化合物1的
13
C
‑
NMR图谱
[0030]图13：化合物1的DEPT图谱
[0031]图14：化合物1的1H
‑1H COSY图谱
[0032]图15：化合物1的HMQC图谱
[0033]图16：化合物1的HMBC图谱
[0034]图17：化合物1的NOESY图谱
[0035]图18：化合物1的HR
‑
ESI
‑
MS图谱
[0036]图19：化合物2的1H
‑
NMR图谱
[0037]图20：化合物2的
13
C
‑
NMR图谱
[0038]图21：化合物2的DEPT图谱
[0039]图22：化合物2的1H
‑1H COSY图谱
[0040]图23：化合物2的HMQC图谱
[0041]图24：化合物2的HMBC图谱
[0042]图25：化合物2的NOESY图谱
[0043]图26：化合物2的HR
‑
ESI
‑
MS图谱
具体实施方式
[0044]为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。
[0045]实施例1
‑
化合物的制备
[0046]将Phomopsis asparagi DHS
‑
48接种至大米培养基(大米100g、粗海盐3g、蛋白胨0.6g、 水100mL，置于500mL三角瓶)中，共100瓶，25℃下避光静置发酵培养28d，得发酵物；
[0047]将发酵物倒入适量的乙酸乙酯，首次超声提取三十分钟，然后浸泡提取24h，提取完成 后将残渣过滤掉，获得乙酸乙酯提取物，用旋转蒸发仪将乙酸乙酯提取物进行减压浓缩，总 共重复提取3次，最终得到目标菌株的总发酵产物，将总的发酵产物用适量的水进行溶解、 混悬，分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取之后获得石油醚提取物、 二氯甲烷提取物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物；合并二氯甲烷提取物和乙酸乙酯提取物 (30g)，然后在硅胶柱上使用CH2Cl2‑
MeOH进行梯度洗脱，极性依次递增(100：0～0：100， v/v)，得到组分Fr.1～Fr.8；将组分Fr.2使用CH2Cl2‑
EtOAc(4∶1～1∶1，v/v)进行硅 胶梯度洗脱，极性依次递增，得到组分Fr.2.1～2.6；组分Fr.2.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.细胞松弛素类化合物，其特征在于，结构式如下所示：2.权利要求1所述的细胞松弛素类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将天门冬拟茎点霉Phomopsis asparagi发酵物用乙酸乙酯浸提，得提取物，将提取物浓缩后加水混悬，得混悬物，混悬物用有机溶剂萃取，得到二氯甲烷提取物、乙酸乙酯提取物；合并二氯甲烷提取物和乙酸乙酯提取物，然后在硅胶柱上使用CH2Cl2‑
MeOH进行梯度洗脱，极性依次递增，得到组分Fr.1～Fr.8；组分Fr.2使用CH2Cl2‑
EtOAc进行硅胶梯度洗脱，极性依次递增，得到组分Fr.2.1～2.6；组分Fr.2.5在硅胶柱上用MeOH
‑
H2O梯度洗脱得到权利要求1所述化合物。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，MeOH
‑
H2O的体积比为1:1。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，组分Fr.2...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐静，张雪侠，冯昭，韦成文，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：