多特异性前趋化因子治疗蛋白（PARK）及其制备和使用方法技术

蛋白酶释放的趋化因子蛋白(PARK)包括前趋化因子部分，前趋化因子部分包括与趋化因子部分融合的前肽部分，其中趋化因子部分包括N端和C端；和与前趋化因子部分连接的靶向部分，其中靶向部分对肿瘤、纤维化或阿尔茨海默氏病相关抗原或受体具有结合特异性。相关抗原或受体具有结合特异性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多特异性前趋化因子治疗蛋白（PARK）及其制备和使用方法
[0001]相关申请案的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年1月11日根据35U.S.C.119(e)提交的美国临时申请序列 62/791,667号的申请日的权益，其全部公开内容通过引用并入本文。


[0003]本申请总体涉及重组蛋白和抗体的
，更具体地涉及治疗癌症、纤维化和神经退行性疾病的治疗性蛋白和抗体。

技术介绍

[0004]许多研究表明，低水平的肿瘤淋巴细胞浸润与不良预后相关(Jung 2014，Zhang 2003， Naito 1998)。增强肿瘤淋巴细胞浸润增加抗肿瘤免疫应答，减少肿瘤生长。例如，用趋化因子治疗可导致肿瘤完全消退或无肿瘤生长，表明单独施用趋化因子或与细胞因子组合施用趋化因子可为治疗性的(Homey 2002)。CCL21是C
‑
C趋化因子配体，也称为次级淋巴组织趋化因子(SLC)，并且可以通过与趋化因子受体CCR7结合而引起其作用。 CCL21由成纤维细胞网状细胞表达并从成纤维细胞网状细胞分泌，作为化学引诱物以将幼稚的表达CCR7的T细胞引导至人淋巴结内的T细胞区。已经证明，将SLC趋化因子注射到肝细胞癌(HCC)模型中增加了肿瘤部位处的CD8和CD4阳性T细胞群(Chen 2013)。SLC诱导树突细胞的成熟，增加IL
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12和IFN的水平，并抑制HCC生长和侵袭。其他研究显示，逆转TH1趋化因子、CXCL9和CXCL10(两者均为CXC趋化因子) 的肿瘤表观遗传沉默增加肿瘤淋巴细胞浸润，减缓肿瘤进展，并且提高PD
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L1阻断的疗效(Peng 2015)。
[0005]在许多癌症患者中，存在抗肿瘤免疫应答不足的证据，并且肿瘤中浸润的低水平免疫细胞指示不良预后。潜在机制可能与刺激和/或抑制肿瘤细胞引发的免疫应答不良有关。这些观察结果提供了通过增加肿瘤部位的免疫细胞来改善癌症治疗疗效的机会。

技术实现思路

[0006]以下概述仅是说明性的并且不旨在以任何方式进行限制。除了上述说明性方面、实施例和特征之外，通过参考附图和以下详细描述，其它方面、实施例和特征将变得显而易见。
[0007]本公开总体上提供了治疗性蛋白、编码此类蛋白或其片段的核酸序列或表达载体 (vector)、用于表达此类蛋白或其片段的细胞、制造此类蛋白的方法以及使用此类蛋白治疗疾病的方法。
[0008]在一个方面，本公开提供治疗性蛋白。蛋白可用于治疗疾病，包括癌症、纤维化或阿尔茨海默氏病。在一个实施方案中，蛋白包括前趋化因子部分和与前趋化因子部分连接的靶向部分。
[0009]前趋化因子部分包括与趋化因子部分融合的前肽部分，并且趋化因子部分包括N端和C端。在一个实施方案中，前肽部分与趋化因子部分的N端或C端融合。在一个实施方案
中，前肽部分与趋化因子部分的N端融合。在一个实施方案中，前肽部分包括约5 个至约20个氨基酸。在一个实施方案中，前肽部分包括约8个氨基酸。
[0010]靶向部分对肿瘤、纤维化或阿尔茨海默氏病相关抗原或受体具有结合特异性。
[0011]在一个实施方案中，前趋化因子部分进一步包括前导序列，并且前肽部分在一端与前导序列融合，在另一端与趋化因子部分融合。在一个实施方案中，前导序列包括具有约10个至约50个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方案中，前导序列包括具有约15个至约25个氨基酸的氨基酸序列。
[0012]在一个实施方案中，蛋白含有单个前趋化因子部分。在一个实施方案中，蛋白含有两个或更多个前趋化因子部分。在一个实施方案中，蛋白包括至少两个前趋化因子部分。在一个实施方案中，两个前趋化因子部分通过间隔区串联连接。在一个实施方案中，间隔区包括至少一个氨基酸残基。在一个实施方案中，氨基酸残基包括甘氨酸残基。在一个实施方案中，间隔区包括至少两个甘氨酸残基。在一个实施方案中，间隔区包括2至 8个甘氨酸残基。
[0013]在一个实施方案中，蛋白还包括融合在趋化因子部分C端的氨基酸序列，其中氨基酸序列包括fractalkine的粘蛋白区域。
[0014]在一个实施方案中，趋化因子部分包括与CC、CXC、CX3C、OR C家族趋化因子具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相似性的趋化因子氨基酸序列。在一个实施方案中，相似性为90％。在一个实施方案中，相似性为98％。在一个实施方案中，相似性为99％。
[0015]在一个实施方案中，趋化因子部分包括与CCL1、CCL3、CCL5、CCL7、CCL14、 CCL16、CCL19、CCL20、CCL21、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL12、CXCL16、 XCL1或CX3CL1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％，97％，98％，99％或100％相似性的趋化因子氨基酸序列。在一个实施方案中，相似性为90％。在一个实施方案中，相似性为98％。在一个实施方案中，相似性为99％。
[0016]在一个实施方案中，趋化因子部分包括与能够募集具有抗肿瘤、抗纤维化或抗阿尔茨海默氏病活性的细胞的趋化因子具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、 98％、99％或100％相似性的趋化因子氨基酸序列。在一个实施方案中，相似性为90％。在一个实施方案中，相似性为98％。在一个实施方案中，相似性为99％。
[0017]在一个实施方案中，靶向部分包括对肿瘤、纤维化或阿尔茨海默氏病相关抗原或受体具有结合亲和力的抗体、单链Fv(scFv)结构域、单一可变结构域或天然配体结构域。
[0018]在一个实施方案中，结合的K
d
不超过1、5、10、15、20、25、30、50、60、80、90、100、 150nM。在一个实施方案中，靶向部分配置成结合肿瘤细胞，肿瘤基质抗原，肌成纤维细胞抗原，淀粉样蛋白或τ蛋白。
[0019]在一个实施方案中，蛋白进一步包括蛋白标签。在一个实施方案中，蛋白标签与蛋白之一共价连接。在一个实施方案中，蛋白标签包括与包括约6至约10个组氨酸残基、 streptag
‑
2或免疫球蛋白Fc的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％，90％，95％， 97％，98％，99％或100％相似性的氨基酸序列。在一个实施方案中，相似性为90％。在一个实施方案中，相似性为98％。在一个实施方案中，相似性为99％。
[0020]在一个实施方案中，蛋白还包括免疫球蛋白(IgG)Fc结构域。在一个实施方案中，前趋化因子部分和靶向部分都与IgG Fc结构域融合。在一个实施方案中，靶向部分融合到
前趋化因子部分的一端，IgG Fc融合到前趋化因子结构域的相对端。在一个实施方案中，IgG Fc结构域包括两个免疫球蛋白CH2
‑
CH3结构域。在一个实施方案中，免疫球蛋白CH2
‑
CH3结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种蛋白，其包括：前趋化因子部分，其包括与趋化因子部分融合的前肽部分，其中所述趋化因子部分包括N端和C端，并且其中所述前肽部分与所述趋化因子部分的N端或C端融合；以及与所述前趋化因子部分连接的靶向部分，其中，所述靶向部分对肿瘤、纤维化或阿尔茨海默氏病相关抗原或受体具有结合特异性。2.根据权利要求1所述的蛋白，其中，所述前趋化因子部分还包括在一端与所述前肽部分融合和在相对端与趋化因子部分融合的前导序列。3.根据权利要求1所述的蛋白，其中，所述蛋白含有单一前趋化因子部分。4.根据权利要求1所述的蛋白，其中，所述蛋白包括至少两个前趋化因子部分。5.根据权利要求1所述的蛋白，其中，至少两个前趋化因子部分通过间隔区串联连接。6.根据权利要求5所述的蛋白，其中，所述间隔区包括至少一个甘氨酸残基。7.根据权利要求5所述的蛋白，其中，所述间隔区包括至少两个甘氨酸残基。8.根据权利要求1所述的蛋白，其中，进一步包括融合在所述趋化因子部分的所述C端的氨基酸序列，其中，所述氨基酸序列包括fractalkine的粘蛋白区。9.根据权利要求1所述的蛋白，其中，所述趋化因子部分包括与CC、CXC、CX3C或C家族趋化因子具有至少90％相似性的趋化因子氨基酸序列。10.根据权利要求9所述的蛋白，其中，所述趋化因子部分包括与CCL1、CCL3、CCL5、CCL7、CCL14、CCL16、CCL19、CCL20、CCL21、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL12、CXCL16、XCL1或CX3CL1具有至少90％相似性的趋化因子氨基酸序列。11.根据权利要求1所述的蛋白，其中，所述趋化因子部分包括趋化因子氨基酸序列，所述趋化因子氨基酸序列与能够募集具有抗肿瘤、抗纤维化或抗阿尔茨海默氏病活性的细胞的趋化因子具有至少90％的相似性。12.根据权利要求1所述的蛋白，其中，所述靶向部分包括抗体、单链Fv(scFv)结构域、单一可变结构域或天然配体结构域，其对肿瘤、纤维化或阿尔茨海默氏病相关抗原或受体具有结合特异性。13.根据权利要求1所述的蛋白，其中，所述靶向部分对肿瘤细胞、肿瘤基质抗原、肌成纤维细胞抗原、淀粉样蛋白或τ蛋白具有结合亲和力。14.根据权利要求1所述的蛋白，进一步包括共价连接到所述蛋白的至少一个末端的蛋白标签。15.根据权利要求14所述的蛋白，其中，所述蛋白标签包括与8
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10个组氨酸、streptag
...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐纳德，
申请(专利权)人：嘉立医疗科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：