一种豌豆CRISPR/Cas9基因编辑载体、基因编辑系统及基因编辑方法技术方案

本发明专利技术提供了一种豌豆CRISPR/Cas9基因编辑载体、基因编辑系统及基因编辑方法，涉及基因编辑技术领域。本发明专利技术对现有的水稻基因编辑用载体pHUC411进行改造，用en35s启动子、PsCas9的编码基因和PsU6.3分别替换掉pHUC411上原有的ZmUBI、OsCas9和OsU3。利用所述CRISPR/Cas9基因编辑载体构建CRISPR/Cas9基因编辑系统，并对豌豆进行基因编辑，在豌豆中的基因编辑效率可高达8.32％，并且产生了高达7种的突变类型，从而提高了豌豆基因编辑效率，为豌豆的基因功能研究以及遗传育种奠定良好的基础。的基础。的基础。

【技术实现步骤摘要】
一种豌豆CRISPR/Cas9基因编辑载体、基因编辑系统及基因编辑方法


[0001]本专利技术属于基因编辑
，具体涉及一种豌豆CRISPR/Cas9基因编辑载体、基因编辑系统及基因编辑方法。

技术介绍

[0002]豌豆(Pisum sativum L.)是世界四大食用豆类作物之一，种植国家已经超过90个。温带和亚热带地区的膳食蛋白质来源主要是豌豆。尽管豌豆的种植面积很大，但总产量仍然很低，在过去几十年里一直停滞不前。一些生物和非生物胁迫严重影响着豌豆的产量；此外，豌豆是自花授粉，遗传基础狭窄，而且豌豆一些性状的遗传变异有限，因此需要利用生物技术来实现对豌豆性状的改良。
[0003]基因组编辑技术是指通过核酸内切酶在基因组中特定位置产生DNA双链断裂(DSB)，诱导生物体通过非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HR)来修复断裂的双链DNA，因为这个修复过程容易出错，从而导致靶向突变。因此基因编辑技术，可以通过基因组的定点修饰调控基因的表达，作为研究基因功能的重要工具。
[0004]CRISPR/Cas系统是存在于细菌和古细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种豌豆CRISPR/Cas9基因编辑载体，所述载体以pHUC411为骨架载体，还包括豌豆偏好密码子优化的Cas9蛋白的编码基因、增强型的TM2
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pd35s
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dMac启动子和豌豆内源U6启动子。2.根据权利要求1所述CRISPR/Cas9基因编辑载体，其特征在于，所述豌豆偏好密码子优化的Cas9蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述CRISPR/Cas9基因编辑载体，其特征在于，所述增强型的TM2
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pd35s
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dMac启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.根据权利要求1所述CRISPR/Cas9基因编辑载体，其特征在于，所述豌豆内源U6启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。5.权利要求1～4任一项所述CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：用增强型的TM2
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pd35s
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dM...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨涛，李冠，宗绪晓，刘荣，魏鹏程，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：