一种基于荧光相关光谱检测有机溶剂诱导蛋白聚集的药物筛选方法技术

本发明专利技术涉及一种基于荧光相关光谱检测有机溶剂诱导蛋白聚集的药物筛选方法，荧光标记的蛋白在含有有机溶剂的水溶液中产生聚集现象，当待筛化合物与蛋白发生相互作用时，会抑制蛋白在含有有机溶剂的水溶液中产生聚集现象，通过荧光相关光谱检测荧光标记蛋白聚集体的特征扩散时间（扩散系数），获得蛋白与待筛化合物相互作用的强弱信息，从而实现基于有机溶剂诱导蛋白聚集的药物筛选，该方法检测体积小、灵敏度高。本发明专利技术可针对常见疾病与突发性疾病的临床药物进行筛选，大大减少药物筛选时间和成本，为药物研发提供了更加简单、快速和普适性强的方法。普适性强的方法。普适性强的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光相关光谱检测有机溶剂诱导蛋白聚集的药物筛选方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种基于荧光相关光谱检测有机溶剂诱导蛋白聚集的药物筛选方法。

技术介绍

[0002]新药的开发及其药理研究对改善人类健康至关重要。在药理学研究中，药物
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靶标蛋白相互作用分析是促进新药发现和发展精准药物的关键步骤。药物的治疗效果在很大程度上取决于其靶位的结合。目前，已经开发了多种研究药物
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靶标蛋白相互作用的方法。如质谱、核磁共振、毛细管电泳、全内反射荧光，荧光偏振和荧光共振能量转移等。然而，开发样品用量少、快速和高灵敏的方法用于研究未标记药物分子与靶标蛋白之间的相互作用仍然是一个巨大的挑战。
[0003]荧光相关光谱(fluorescence correlation spectroscopy，FCS)是一类具有超高灵敏度的单分子光学检测方法。荧光相关光谱系统通过对检测微区(<1fL)内的荧光分子由于布朗运动或者化学反应造成的荧光信号的涨落进行记录，然后对荧光涨落信号进行自相关本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光相关光谱检测有机溶剂诱导蛋白聚集的药物筛选方法，其特征在于包括以下步骤：(1)蛋白的荧光标记、纯化和表征：将荧光分子与靶标蛋白共价连接，用超滤膜纯化标记溶液，用荧光相关光谱对荧光分子
‑
蛋白标记物进行表征；(2)蛋白与待筛化合物相互作用：将不同浓度待筛化合物加入荧光标记的蛋白溶液中温育反应；(3)有机溶剂诱导蛋白聚集：在蛋白
‑
待筛化合物水溶液中加入有机溶剂诱导蛋白聚集；(4)荧光相关光谱监测蛋白与待筛化合物的相互作用：通过荧光相关光谱监测荧光标记的蛋白分子特征扩散时间τ
D
，计算待筛化合物相对抑制率和半抑制浓度(IC
50
)，获得不同待筛化合物与蛋白的相互作用强弱信息。2.如权利要求1所述的药物筛选方法，其特征在于，所述相对抑制率的计算公式为：其中τ
DS
为荧光标记蛋白在含有有机溶剂的水溶液特征扩散时间，τ
D1
为荧光标记蛋白在含有某一特定浓度待筛化合物和有机溶剂的水溶液中的特征扩散时间，τ
D0
为荧光标记蛋白在含有饱和浓度强待筛化合物和有机溶剂的水溶液中的特征扩散时间。3.如权利要求2所述的药物筛选方法，其特征在于，在筛选中设定实验组和对照组，通过计算相对抑制率即判定待筛化合物与蛋白相互作用的强弱，超过50％即判断具有较强的抑制作用。4.如权利要求1所述的药物筛选方法，其特征在于，所述诱导蛋白聚集的有机溶剂为乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和四氢呋喃中的一种或多种。5.如权利要求1所述的药物筛选方法，其特征在于，所述有机溶剂在水溶液中浓度为5％
‑
50％。6.如权利要求1所述的药物筛选方法，其特征在于，所述蛋白荧光标记试剂为氟化硼二吡咯(Dipyrromethene Boron Difluoride，BODIPY)、花菁(Cyanine，Cy)、罗丹明(Rhodamine)系列染料、绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和红色荧光蛋白。7.如权利要求1所述的药物筛选方法，其特征在于，所述蛋白为β
‑
淀粉样前体蛋白切割酶1(β
‑
site amyloid
‑
precursorprotein
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cleaving enzyme 1，BACE
‑
1)和二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase，DHFR)，浓度为1nM
‑
50nM。8.如权利要求1所述的药物筛选方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：任吉存，黄香宜，薛彩宁，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：