【技术实现步骤摘要】
利用巢式RPA技术检测SARS-CoV-2的引物对、探针、试剂盒及其应用
[0001]本专利技术属于生物工程
,尤其涉及一种基于巢式RPA技术检测SARS-CoV-2的引物对、探针、试剂盒及其应用。
技术介绍
[0002]新型冠状病毒感染性肺炎(COVID-19)的特点是潜伏期长、传染性强及死亡率高。该流行病传播迅速,造成巨大的社会危害。新冠肺炎COVID-19是由一种新型的冠状病毒 SARS-CoV-2感染所致。
[0003]冠状病毒(Coronavirus,CoV)是一种包膜的单链RNA病毒,在人类、及其它哺乳动物和鸟类中广泛传播,能引起呼吸系统、肠、肝及神经系统疾病。已知有7种冠状病毒使人类致病,其中4种如Cov-229E,Cov-OC43,Cov-NL63和Cov-HKU1在人群中流行,常引起普通感冒症状。另外3种冠状病毒SARS-CoV,MERS-CoV和SARS-CoV-2具有高度的危险性,会导致严重的肺炎甚至死亡。
[0004]新冠病毒的防控措施中,早诊断、早治疗是关键。病毒核酸检测是快速诊断COVID-19 的重要手段,目前的核酸检测方法主要是荧光定量PCR(RT-qPCR)技术。
[0005]但是,基于RT-qPCR的病毒核酸检测技术,在临床应用中遇到了一些疑难问题,在中国多个城市的诸多医院中均有“假阴性”结果的报道。而且,发现有些患者经过正规治疗后两次核酸检测阴性,然而在隔离和观察14天后,他们的核酸检测结果又重新阳性。这个假阴性结果大大增加COVID-19疫情防控的 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种以巢式RPA检测SARS-CoV-2新型冠状病毒的引物对,所述引物对是针对下述SARS-CoV-2新型冠状病毒全基因序列中的任意一个或两个以上基因设计的引物对:ORF1ab、S基因、ORF6、ORF7a、ORF7b、ORF8、N基因、ORF10。2.根据权利要求1所述的引物对,其特征在于,所述引物对是扩增SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:8中任一基因片段的引物对。3.根据权利要求2所述的引物对,其特征在于,所述扩增SEQ ID NO:1所示基因片段的引物对包含:外引物对SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11,内引物对SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13。4.根据权利要求2所述的引物对,其特征在于,所述扩增SEQ ID NO:2所示基因片段的引物对包含:外引物对SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16,内引物对SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18。5.根据权利要求2所述的引物对,其特征在于,所述扩增SEQ ID NO:3所示基因片段的引物对包含:外引物对SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21,内引物对SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23。6.根据权利要求2所述的引物对,其特征在于,所述扩增SEQ ID NO:4所示基因片段的引物对包含:外引物对SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26,内引物对SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28。7.根据权利要求2所述的引物对,其特征在于,所述扩增SEQ ID NO:5所示基因片段的引物对包含:外引物对SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31,内引物对SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33。8.根据权利要求2所述的引物对,其特征在于,所述扩增SEQ ID NO:6所示基因片段的引物对包含:外引物对SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36,内引物对SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38。9.根据权利要求2所述的引物对,其特征在于,所述扩增SEQ ID NO:7所示基因片段的引物对包含:外引物对SEQ ID NO:40和SEQ ID NO:41,内引物对SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43。10.根据权利要求2所述的引物对,其特征在于,所述扩增SEQ ID NO:8所示基因片段的引物对包含:外引物对SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46,内引物对SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48。11.一种以巢式RPA检测SARS-CoV-2新型冠状病毒的探针,所述探针是特异性针对下述SARS-CoV-2新型冠状病毒全基因序列中的任意一个或两个以上基因设计的探针:ORF1ab、S基因、ORF6、ORF7a、ORF7b、ORF8、N基因、ORF10。12.根据权利要求11所述的探针,其特征在于,所述探针与SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:...
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