温和还原剂酶解组织样本的酶解方法及其质谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种温和还原剂酶解组织样本的酶解方法及其质谱检测方法。本发明专利技术提供了一种裂解液，其包括：终浓度为质量分数1-4％的去污剂；所述的去污剂为脱氧胆酸钠和/或碳酸氢铵；终浓度为5-20μM的3-(2-羧基)膦盐酸盐；终浓度为20-60mM的5-氯-邻氨基苯甲酸；终浓度为50-200mM的三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸；终浓度为0.1-2mM的苯甲基磺酰氟；和水。组织样本经本发明专利技术的裂解液裂解后，能高得率得到组织蛋白和肽段。和肽段。

【技术实现步骤摘要】
温和还原剂酶解组织样本的酶解方法及其质谱检测方法


[0001]本专利技术涉及一种温和还原剂酶解组织样本的酶解方法及其质谱检测方法。

技术介绍

[0002]活检组织或者微量特殊组织样本获取，目前最常用的方法为显微切割，但是该方法适用范围受限，多用于冰冻组织的切割，且费时费力而又价格高昂。而，对于临床样本，尤其是微创手术后样本(如活检组织)，样本体积小，量少，可用于研究的和医学检测评估受限。现如今，人类对自身疾病早检早筛早诊的健康安全意识显著提高，微创也逐渐普及开来，因此微量样本的分割(区域切割)技术和检测水平十分关键且必要。
[0003]基于特殊组织样本，尤其是石蜡包埋组织样本，二硫键交联后的组织蛋白的提取较为困难。
[0004]另外，不同于基因组学、转录组学、代谢组学等的大样本量需求，LC-MS/MS质谱的更新换代和技术水平不断升级优化，可以检测更少细胞量和组织量的样本蛋白。
[0005]因此，综合微量样本的获取、蛋白提取以及质谱技术，活检组织或者微量特殊组织样本的蛋白检测的实现有助于加快疾病早筛、早查、早诊的实现。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种裂解液，其包括：终浓度为质量分数1-4％的去污剂；所述的去污剂为脱氧胆酸钠和/或碳酸氢铵；终浓度为5-20μM的3-(2-羧基)膦盐酸盐；终浓度为20-60mM的5-氯-邻氨基苯甲酸；终浓度为50-200mM的三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸；终浓度为0.1-2mM的苯甲基磺酰氟；和，水。2.如权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述的裂解液中，所述的去污剂为脱氧胆酸钠；和/或，所述的裂解液中，所述的去污剂的质量分数为1-3％；和/或，所述的裂解液中，所述的3-(2-羧基)膦盐酸盐的终浓度为10-20μM；和/或，所述的裂解液中，所述的5-氯-邻氨基苯甲酸的终浓度为20-40mM；和/或，所述的裂解液中，所述的三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸的终浓度为50-100mM；和/或，所述的裂解液中，所述的苯甲基磺酰氟的终浓度为1-2mM；和/或，所述的裂解液为用于裂解组织样本的裂解液；所述的组织样本可为活检组织样本或石蜡包埋组织样本；所述的石蜡包埋组织样本优选为人食管活检正常组织石蜡包埋组织样本、人结直肠活检组织石蜡包埋组织样本、人十二指肠活检组织石蜡包埋组织样本或人胃活检组织石蜡包埋组织样本；所述的人结直肠活检组织石蜡包埋样本优选为原位癌石蜡包埋组织样本；所述的人十二指肠活检组织石蜡包埋组织样本优选为微浸润癌组织石蜡包埋组织样本；所述的人胃活检组织石蜡包埋组织样本优选为低分化组织石蜡包埋组织样本。3.如权利要求1所述的裂解液，其特征在于，其包括质量分数为1-3％的去污剂、终浓度为10μM的3-(2-羧基)膦盐酸盐、终浓度为20mM的5-氯-邻氨基苯甲酸、终浓度为50mM的3-羟甲基甲烷-盐酸、终浓度为2mM的苯甲基磺酰氟和水；或者，其包括质量分数为1-3％的去污剂、终浓度为20μM的3-(2-羧基)膦盐酸盐、终浓度为40mM的5-氯-邻氨基苯甲酸、终浓度为100m M的3-羟甲基甲烷-盐酸、终浓度为2mM的苯甲基磺酰氟和水。4.如权利要求1-3中任一项所述的裂解液，其特征在于，所述的裂解液由所述的去污剂、所述的3-(2-羧基)膦盐酸盐、所述的5-氯-邻氨基苯甲酸、所述的三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸、所述的苯甲基磺酰氟和所述的水组成。5.一种如权利要求1-4任一项所述的裂解液的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：将所述的裂解液各组分混合、加热和冷却至室温，得到裂解液即可；所述的加热...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁琛，李玲玲，秦兆宇，王云之，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：