一种分离艾美尔球虫小配子的方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种分离艾美尔球虫小配子的方法和应用，涉及球虫分离和纯化技术领域。本发明专利技术首次采用基因组编辑技术将外源的荧光蛋白的基因序列与特异性基因进行融合，并将融合基因敲入艾美尔球虫基因组使其融合表达，随后根据荧光蛋白的发光情况来判定整合成功，获得具有荧光球虫。随后将荧光球虫感染鸡，收集富含配子的盲肠，通过进一步消化、过滤等获得混合物，随后根据荧光将大小配子进行分离。本发明专利技术还可以应用免疫荧光技术和现代成像分析技术，通过荧光观察球虫大小配子阶段的行为学变化，为球虫病的治疗提供有效的化学筛选模型，也为研究针对球虫小配子的药物和基于小配子的疫苗的研发奠定了基础。子的疫苗的研发奠定了基础。子的疫苗的研发奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种分离艾美尔球虫小配子的方法和应用


[0001]本专利技术属于球虫分离与纯化
，具体涉及一种分离艾美尔球虫小配子的方法和应用。

技术介绍

[0002]鸡球虫病是肉鸡养殖中的常见病，也是花费药物成本最高的疾病之一，而球虫病治疗药物也是污染环境、产生药物残留的主要原因，一只鸡从出生到出栏都会感染球虫，感染常常呈爆发性流行，被美国农业部列为对禽类危害最为严重的五大疾病之一，鸡球虫病发生后，影响鸡只的生产性能，降低饲料报酬，引起雏鸡生长受阻，严重的可造成大量鸡只死亡，一旦爆发就会造成无法弥补的经济损失，因此有必要对球虫的分子生物学、基因组学、蛋白质组学和免疫学进行研究。
[0003]球虫各阶段虫体的分离与纯化是研究球虫分子生物学、基因组学、蛋白质组学、免疫学和疫苗研发的基础。球虫生活史复杂，包括裂殖生殖、配子生殖和孢子生殖三个发育阶段。虫体又分为滋养体、裂殖体、裂殖子、配子体、大小配子、合子、卵囊和子孢子等不同发育状态，但是对于小配子的分离方法研究尚属空白，不能精细地解析相关发育阶段的蛋白组学和进行分别针对小配子的药物和疫苗的研发。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离艾美尔球虫小配子的方法，包括以下步骤：将编码荧光蛋白的基因序列与艾美尔球虫的特异性基因融合，敲入到艾美尔球虫的基因组中，筛选表达融合基因的目标球虫；利用所述目标球虫侵染鸡，收集感染后136h的配子阶段虫体，带有荧光的个体为艾美尔球虫小配子；所述特异性基因在小配子阶段和大配子阶段存在阶段差异性表达。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述艾美尔球虫的种类包括柔嫩艾美尔球虫、毒害艾美尔球虫、巨型艾美尔球虫、堆型艾美尔球虫、和缓艾美尔球虫、布氏艾美尔球虫或早熟艾美尔球虫。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述荧光蛋白包括mCherry或EYFP。4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述特异性基因包括生殖细胞特有基因GCS
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1。5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述敲入的方法包...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲自刚，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：