一种基于荧光成像系统高通量自动化计数大豆胞囊的方法技术方案

本发明专利技术公开一种基于荧光成像系统高通量自动化计数大豆胞囊的方法，包括如下步骤：利用冲洗装置分离着生在大豆根系上的胞囊；将分离的胞囊转移至培养皿；将盛有胞囊的培养皿置于配有汞灯和摄像头的荧光显微镜下拍照；计数软件根据胞囊形状、自发荧光强度对图片中的胞囊计数。本发明专利技术利用大豆胞囊自发荧光特性，在收到光源激发的荧光后，先用荧光显微镜拍照,再利用计数软件识别胞囊形状的前提下对荧光点计数，相比人工计数误差小，且可实现高通量计数，效率更高。本发明专利技术采用的荧光显微镜所有配置均为市售商品，获取容易，采用的冲洗装置简单且成本较低，本方法在大豆胞囊线虫研究领域具有推广应用前景。域具有推广应用前景。域具有推广应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光成像系统高通量自动化计数大豆胞囊的方法


[0001]本专利技术涉及农业生物
，特别涉及一种基于荧光成像系统高通量自动化计数大豆胞囊的方法。

技术介绍

[0002]大豆胞囊线虫病是大豆种植期常见的线虫病害，温度、湿度、土壤条件一旦适宜即可以引发这种病害的发生。这种病害可以导致大豆大面积减产，而且在中国东北和黄淮大豆主要产区都有发生，常年对大豆生产造成严重经济损失。而培育抗病品种是抵御大豆胞囊线虫病最经济、有效的方法，而筛选抗病资源是培育抗病品种的先决条件，但是，无论是抗性基因发掘、抗性品种筛选还是抗性机制研究都是以胞囊计数为基础。
[0003]大豆胞囊计数方法涉及到统计大豆根系上的胞囊数目，人们以雌性指数为指标，其成熟雌虫呈柠檬形，大小约为0.8mm
×
0.5mm，呈白色或黄白色，所鉴定的品种多为感病品种，室内鉴定每株根系上的胞囊数目在30
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800个不等，传统的大豆胞囊计数方法是待植株接种大豆胞囊线虫30天左右，胞囊处于显囊盛期时，完全取出大豆根部，进行人工计数，费时费力，尤其是连续本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光成像系统高通量自动化计数大豆胞囊的方法，其特征是：该方法包括如下步骤：
①
选取感染大豆胞囊线虫病且胞囊处于显囊盛期的大豆植株；
②
利用冲洗装置对大豆植株的根系进行冲洗，冲洗后将大豆植株根系上的胞囊分离下来，并收集胞囊；
③
将收集的胞囊转移至培养皿中；
④
将盛有胞囊的培养皿置于荧光显微镜下照相；
⑤
通过计数软件分析步骤
④
中拍摄的照片，计数软件根据大豆胞囊线虫胞囊的形状、自发荧光强度对其进行计数。2.根据权利要求1所述的基于荧光成像系统高通量自动化计数大豆胞囊的方法，其特征是：所述的荧光显微镜的物镜为0.3
×
的物镜，数值孔径≥0.045；工作距离≥141mm。3.根据权利要求1所述的基于荧光成像系统高通量自动化计数大豆胞囊的方法，其特征是：所述的荧光显微镜的微成像分析系统配置有Peltier制冷系统。4.根据权利要求1所述的基于荧光成像系统高通量自动化计数大豆胞囊的方法，其特征是：所述的荧光显微镜的光源采用100W汞灯光源。5.根据权利要求1所述的基于荧光成像系统高通量自动化计数大豆胞囊的方法，其特征是：步骤
②
中的冲洗装置包括移动架、筛网组和分级沉淀水箱；所述的移动架为长方体框架，设有上层操作台和下层操作台，移动架底部的四角位置均固定有万向轮甲，在上层操作台的拐角位置设有竖向贯通的圆形冲洗孔，上层操作台为中间低、四周高的斜坡形，且冲洗孔位于上层操作台的最低处，上层操作台的四周边沿设有向上凸出的挡水条甲，上层操作台的侧面固定有环形的悬挂铁圈，在冲洗孔的下方固定有与其同轴心的导流管，该导流管包括上端圆锥形的汇集管、下端圆筒形的连接管，连接管同轴固定在汇集管的小头端，汇集管的大头端固定在上层操作台的下表面，且导流管的最大内径不小于冲洗孔的直径，在连接管的外壁上同轴套装有圆筒形的延伸管，该延伸管的内径与连接管的外径相等，在延伸管的上端固定有若干根沿圆周方向均布的拉伸弹簧，每根拉伸弹簧的自由端均固定在汇集管的外壁上且使拉伸弹簧张紧，在延伸管下端的外壁上套装有圆筒状的橡胶软管，在下层操作台上设有竖向贯通的圆形沥水孔，下层操作台为中间低、四周高的斜坡形，且沥水孔位于下层操作台的最低处，下层操作台的四周边沿设有向上凸出的挡水条乙，该沥水孔与所述的冲洗孔同轴心，且沥水孔的直径不小于橡胶软管的外径，在沥水孔的下方固定有牛角形的引流管，该引流管的上端固定在下层操作台的下表面且与沥水孔对应；所述的筛网组包括一级圆筛、二级圆筛和收集圆筛，所述的一级圆筛包括圆筒状的边框甲，覆盖...

【专利技术属性】
技术研发人员：王金社，练云，李金英，魏荷，张辉，雷晨芳，周扬，胡冠军，卢为国，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：