一种基于CRISPR-nCas3系统的高效基因组大片段删除方法及应用技术方案

本发明专利技术属于生物技术领域，尤其涉及一种基于CRISPR

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR
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nCas3系统的高效基因组大片段删除方法及应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种基于CRISPR
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nCas3系统的高效基因组大片段删除方法及应用。

技术介绍

[0002]近年来，利用微生物进行代谢工程、系统生物学及合成生物学等方面的研究取得了良好的进展，为理性化设计、构建微生物细胞工厂，利用生物体活细胞或酶对可再生生物质，如纤维素等进行物质转化，生产生物能源，实现生物冶炼的工业化提供了重要的理论基础。生物能源再生化是解决人类目前面临的资源、能源短缺及环境污染严重等问题的有效手段之一。
[0003]CRISPR
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Cas是一种广泛存在于大多数细菌和古菌中的原核适应性免疫系统，用于防止病毒或质粒等外源性遗传物质的入侵。该系统由RNA引导，CRISPR序列内储存的遗传信息会转录出具有特异性RNA，与Cas核酸酶结合后会在外源入侵遗传物质的位点特异性结合，产生双链断裂并刺激宿主的修复机制，包括同源重组修复(HDR)和非同源末端连接(NHEJ)。这本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于运动发酵单胞菌的CRISPR
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nCas3基因编辑系统，其特征在于：包括序列如SEQ ID NO.16所示的人工CRISPR簇、编辑质粒载体和含nCas3单链核酸内切酶的工程菌；所述nCas3单链核酸内切酶为在野生型Cas3蛋白的解旋酶功能域上引发突变，使野生型Cas3蛋白丧失解旋酶活性，只具备单链核酸酶活性的nCas3蛋白。2.根据权利要求1所述的一种基于运动发酵单胞菌的CRISPR
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nCas3基因编辑系统，其特征在于：所述野生型Cas3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述nCas3单链核酸内切酶为K458A、或D608A、或R887A；所述K458A的氨基酸序列与SEQ ID NO.1相比，区别仅在于将第458位的“K”替换为“A”；所述D608A的氨基酸序列与SEQ ID NO.1相比，区别仅在于将第608位的“D”替换为“A”；所述R887A的氨基酸序列与SEQ ID NO.1相比，区别仅在于将第887位的“R”替换为“A”。3.根据权利要求1所述的一种基于运动发酵单胞菌的CRISPR
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nCas3基因编辑系统，其特征在于：所述含nCas3单链核酸内切酶的工程菌为运动发酵单胞菌。4.根据权利要求1所述的一种基于运动发酵单胞菌的CRISPR
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nCas3基因编辑系统，其特征在于：所述工程菌以运动发...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭文舫，郝怡乐，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：