本发明专利技术属于食品安全检测领域，具体涉及一种用于测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法。本发明专利技术主要采用6-苄基腺嘌呤对应的稳定同位素内标物6-苄基腺嘌呤-D5进行定量，有机溶剂对试样中6-苄基腺嘌呤进行提取，QuEChERS法进行净化，最后采用超高效液相色谱-串联质谱仪进行检测。本方法具有操作简单、结果稳定、检出限低、抗干扰能力强等特点，能快速实现食品中6-苄基腺嘌呤的定性定量检测，为食品安全监管尤其是豆芽的安全监管提供技术支持，具有较好的推广价值。推广价值。推广价值。
【技术实现步骤摘要】
一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法
[0001]本专利技术属于食品安全检测领域，具体涉及一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法。
技术介绍
[0002]6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine，6-BA)是人工合成的细胞分裂素，分子式为C
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N5， 它能够抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老；还具有将氨基酸、生长素、 无机盐等向处理部位调运等多种效能，对植物的生长、发育有着促进与调节作用，其广泛用 于植物组织的培养、果实生长及蔬菜保鲜等。然而人体摄入过多会刺激皮肤、粘膜、食道或 造成胃黏膜损伤，出现恶心、呕吐等现象,甚至致癌、致畸。欧洲食品安全局(EFSA)规定 植物来源的食品中6-苄基腺嘌呤最大残留量(MRL)为0.01mg/kg。目前我国的标准GB 2760 已经禁止6-苄基腺嘌呤作为食品加工助剂生产经营和使用。
[0003]目前，食品中的6-苄基腺嘌呤残留量的检测常用的净化方法主要有液液萃取、固液萃 取、固相萃取法等。相较于以上前处理方法，QuEChERS法因操作简便，所需溶剂少，提取 效率高等优点得到广泛应用。检测方法主要以高效液相色谱、液相色谱串联质谱法为主。现 阶段运用较为广泛的是高效液相色谱法，我国现行国标GB/T 23381-2009《食品中6-苄基腺嘌 呤的测定-高效液相色谱法》规定的检测方法为液相色谱法。液相色谱法存在以下不足：(1) 对前处理要求高，主要通过固相萃取法进行净化。固相萃取净化时，SPE小柱容易堵塞，操 作复杂，且消耗有机试剂多，对环境造成极大污染，检测成本高，且对专业要求高。(2)液 相色谱法因抗干扰能力差容易出现假阳性。(3)液相色谱法检出限高。液相色谱串联质谱法 由于其灵敏度高，专属性强等特点，逐渐取代液相色谱法而被广泛用于复杂基质中的目标物 检测。但是6-苄基腺嘌呤受基质影响较大，需要采用基质匹配工作曲线才能准确定量。但阴 性样品一般不易获得，需提前准备，同时整个实验过程回收率低、操作繁琐，结果稳定性差， 对仪器污染大。因此，开发一种简单、快速、实用的检测方法，对于控制食品，尤其是豆芽 中6-苄基腺嘌呤的残留量，保障食品安全和人身健康，具有重要意义。
技术实现思路
[0004]本专利技术目的就是为了解决上述背景问题中提出的问题，开发一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中的6-苄基腺嘌呤残留量的方法，该方法具有简单、快速、抗干扰能力强、检出限低等特点。
[0005]为实现上述专利技术目的，本方法采用以下技术方案：一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中的6-苄基腺嘌呤残留量的方法；步骤一： 准确称取2.00~5.00 g充分均质的试样，置于50 mL聚乙烯离心管中；步骤二：加入10~100 μL的100 ng/mL的内标使用液，移入10~20 mL有机溶剂，匀浆，超声或振荡提取5~20 min，加入适量的无机盐进行盐析，涡旋1 min，以4000~9000 r/min 的
转速离心5~10 min，将上清液转移至塑料离心管中，待净化；步骤三：上述上清液移入加有适量净化粉的离心管中净化，涡旋1~5 min，放置澄清，取5~20 mL上清液于另一10 mL塑料离心管中，在35~45 ℃条件下氮吹至干，用合适溶剂复溶至1.0 mL，涡旋复溶后过0.18~0.22 μm滤膜，供超高效液相色谱串联质谱仪测定。相同方法制备空白试液。
[0006]所述的食品为绿豆芽、黄豆芽、黄瓜、西红柿、菠菜、葡萄、樱桃中的一种。
[0007]所述的步骤二中内标物为6-苄基腺嘌呤-D5。
[0008]所述的步骤二中提取用的有机溶剂为甲醇、1%(体积分数)乙酸-甲醇溶液、乙腈、1%(体积分数)乙酸-乙腈溶液、乙酸乙酯中的一种或几种。
[0009]所述的步骤二中无机盐为氯化钠、无水硫酸镁、无水硫酸钠、柠檬酸二氢钠中的一种或几种。
[0010]所述的步骤二中适量无机盐为1 g~5 g。
[0011]所述的步骤三中净化粉为无水硫酸镁、乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）、石墨化碳黑（GCB）、C18的一种或几种。
[0012]所述的步骤三中适量的净化粉为10 mg~1.2 g。
[0013]所述的步骤三中合适溶剂为10%甲醇-水（V/V，含0.1%甲酸）。
[0014]所述的步骤三中高效液相色谱串联质谱分析采用Waters ACQUITY BEH C18 (50 mm
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2.1 mm,1.7 μm)柱，以0.1%甲酸-水溶液（V/V）（A）和乙腈（B）为流动相梯度洗脱，流速为0.2~0.5 mL/min，柱温为20~40 ℃，样品室温度：8~10 ℃，进样体积为3~5 μL，检测时间5~10 min。梯度洗脱条件为0~0.2 min：5% (B相)，0.2~2 min：5%~80% (B相)，2~2.1 min：80%~90% (B相)，2.1~3 min：90% (B相)，3~3.1 min：90%~5% (B相)，3.1~5 min：5%(B相)。离子源：电喷雾电离（ESI）；扫描方式：正离子；定量方式：多反应监测模式(multi reaction monitor, MRM)；同位素内标法；离子源温度：500 ℃；毛细管电压：1.0 kV；锥孔电压：3.5 kV；去溶剂气(高纯氮气)流速：800 L/h。6-BA定量离子对（M/Z）：226.2>91.1，定性离子对（M/Z）：226.2>148.0；6-BA-D5定量离子对（M/Z）：231.2>96.1。
[0015]本专利技术的优点与有益效果是：（1）、现有技术主要是用甲醇提取，但在甲醇-水溶液体系中，甲醇与水极易互溶，增大水溶性干扰物质的含量，从而一定程度上降低了甲醇对目标物的提取效率，基质干扰大。本专利技术采用乙腈提取，在乙腈-水溶液体系中，盐的加入能够明显除去试样中的水分促进乙腈与水的分层，去除部分水溶性杂质干扰，基质干净，提取效率提高。（2）QuEChERS净化技术代替固相萃取，操作简单快捷，回收率高，还节约检测成本。（3）使用同位素内标进行定量，无需基质匹配定量，检测结果更加准确、稳定，操作更加方便。（4）超高效液相色谱串联质谱法代替液相色谱法，检出限更低、定量定性更加准确、检测效率更高。
[0016]本专利技术操作方便快捷，回收率高，具有良好的检测灵敏度和精密度，适合于食品中6-苄基腺嘌呤残留量分析，对于控制豆芽以及其他食品中6-苄基腺嘌呤的残留量，保证食品安全和人身健康，具有重要的意义。
附图说明
[0017]图1为6-BA的标准曲线图；图2为标准溶液中6-BA以及6-BA-D5的MRM图（6-BA以及
6-BA-D5浓度均为10ng/mL）；图3为绿豆芽阳性样品中的6-BA以及6-BA-D5的MR本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤一： 准确称取2.00~5.00 g充分均质的试样，置于50 mL聚乙烯离心管中；步骤二：加入10~100 μL的100 ng/mL的内标使用液，移入10~20 mL有机溶剂，匀浆，超声或振荡提取5~20 min，加入适量的无机盐进行盐析，涡旋1 min，以4000~9000 r/min 的转速离心5~10 min，将上清液转移至塑料离心管中，待净化；步骤三：上述上清液移入加有适量净化粉的离心管中净化，涡旋1~5 min，放置澄清，取5~20 mL上清液于另一10 mL塑料离心管中，在35~45 ℃条件下氮吹至干，用合适溶剂复溶至1.0 mL，涡旋复溶后过0.18~0.22 μm滤膜，供超高效液相色谱串联质谱仪测定；相同方法制备空白试液。2.根据权利要求1的一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：所述的步骤二中内标物为6-苄基腺嘌呤-D5。3.根据权利要求1的一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：所述的步骤二中提取用的有机溶剂为甲醇、1%(体积分数)乙酸-甲醇溶液、乙腈、1%(体积分数)乙酸-乙腈溶液、乙酸乙酯中的一种或几种。4.根据权利要求1的一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：所述的步骤二中无机盐为氯化钠、无水硫酸镁、无水硫酸钠、柠檬酸二氢钠中的一种或几种；适量无机盐为1 g~5 g。5.根据权利要求1的一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：所述的步骤三中净化粉为无水...
【专利技术属性】
技术研发人员：夏宝林，汪仕韬，杨娜，殷晶晶，张维益，胡贤伟，蒋超，
申请(专利权)人：江阴市食品安全检测中心，
类型：发明
国别省市：
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