抗猪GasderminD蛋白单克隆抗体、分泌该单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体、分泌该单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。本发明专利技术所述的一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC No.22321的杂交瘤细胞株分泌产生。实验证明，所述的单克隆抗体对猪Gasdermin D蛋白具有反应特异性，所述的单克隆抗体不仅能够检测猪GSDMD全蛋白，还能够检测活化切割后的猪GSDMD蛋白羧基端节段。本发明专利技术的提出对猪GSDMD生物学功能的研究具有重要意义。具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体、分泌该单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术涉及一种单克隆抗体、分泌该单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，具体涉及一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体、产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，本专利技术还涉及上述单克隆抗体用于检测猪的组织和细胞培养物中猪Gasdermin D蛋白表达和切割情况检测的方法。本专利技术属于生物


技术介绍

[0002]细胞焦亡(pyroptosis)是一种重要的程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)形式。与细胞凋亡不同，细胞焦亡是一种具有促炎特性的PCD形式。早期的研究发现，细胞焦亡发生的过程中，细胞中的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
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1(caspase
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1)、人的caspase
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4/5和小鼠的caspase
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11被活化。同时，细胞焦亡发生的过程中会增加IL
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1β和IL
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18等主要促炎性细胞因子以及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)等炎性介质的释放。Gasdermin D(GSDMD)是介导细胞焦亡的效应分子之一。全长GSDMD蛋白具有氨基酸结构域(GSDMD
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N)和羧基端结构域(GSDMD
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C)两个结构域，两个结构域之间通过柔性结构相连，柔性结构中有高度保守的caspases的酶切位点。完整的GSDMD分子，GSDMD
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N和GSDMD
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C相互结合，呈现自抑制状态。当细胞中的caspase
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1、caspase
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4/5以及caspase
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11被激活时，可以在GSDMD
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N和GSDMD
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C之间对GSDMD进行切割。产生分子量30kDa左右的GSDMD
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N和20kDa左右的GSDMD
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C。GSDMD
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N可以在细胞膜和线粒体膜上形成穿膜孔道。GSDMD
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N在细胞膜上形成的穿膜孔道是IL
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1β和IL
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18以及IL
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33等细胞因子向细胞外释放的主要途径。当GSDMD
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N形成的穿膜孔道对细胞膜破坏严重时，细胞发生焦亡性裂解，大量内容物释放，加剧炎症反应。GSDMD除了可以被caspase
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1、caspase
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4/5和caspase
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11切割为GSDMD
‑
N和GSDMD
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C两段外，还可以被caspase
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3切割，切割产物为一个10kDa左右的肽段和一个43kDa左右的肽段。GSDMD被caspase
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3切割产生的两段多肽均不表现生物学功能。GSDMD被caspase
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3的切割被认为是细胞调控自身发生程序性死亡方式的重要机制之一。GSDMD的活化已被证实与多种疾病(如肿瘤、自身免疫性疾病以及传染性疾病等)的发生有密切关联，并且被认为是一个新的疾病治疗靶点。
[0003]目前，市售的GSDMD抗体均是针对人和小鼠GSDMD特异性的抗体，而缺少针对其他生物GSDMD具有特异性的抗体，这对于在其他生物中探讨GSDMD功能的工作来说是不利的。特异性抗体是研究蛋白质功能的重要工具之一，本专利技术旨在提供一种小鼠抗猪GSDMD蛋白单克隆抗体，以及运用该单克隆抗体对猪源细胞和猪组织中GSDMD表达和切割情况进行免疫印迹检测的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的之一是提供一种分泌抗猪GSDMD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
[0005]本专利技术的目的之二是提供由所述杂交瘤细胞株分泌产生的抗猪GSDMD蛋白单克隆
抗体；
[0006]本专利技术的目的之三是提供所述单克隆抗体的用途。
[0007]为了达到以上目的，本专利技术所采用的技术方案为：
[0008]本专利技术的一株分泌抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述的杂交瘤细胞株命名为4G7
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D7，分类命名为抗猪Gasdermin D单克隆抗体杂交瘤细胞株，保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，其菌种保藏编号为：CGMCC No.22321，保藏时间为2021年05月10日。
[0009]上述杂交瘤细胞株通过以下途径制备得到：
[0010]将重组质粒pET
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30a(+)
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pgsdmd转化大肠杆菌，IPTG诱导下获得包涵体形式表达的重组猪GSDMD蛋白(pGSDMD)，对该蛋白进行纯化；将纯化的pGSDMD蛋白作为免疫原，皮下接种5周龄BALB/c小鼠。按照常规杂交瘤细胞融合技术将免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合。用纯化的pGSDMD蛋白为筛选抗原，建立间接ELISA方法，最终筛选出1株持续分泌抗猪GSDMD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株4G7
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D7。本专利技术进一步从杂交瘤细胞上清液中或从注射杂交瘤细胞的动物腹水中，获得抗猪GSDMD蛋白的单克隆抗体。
[0011]进一步的，本专利技术还提出了一种抗猪GSDMD蛋白单克隆抗体，所述的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.11188的杂交瘤细胞株分泌产生。
[0012]更进一步的，本专利技术还提供了所述的抗猪GSDMD蛋白单克隆抗体在制备检测猪Gasdermin D蛋白试剂中的应用。
[0013]其中，优选的，所述的试剂为用于免疫印迹法检测的试剂。更优选的，所述的试剂为用于ELISA方法检测的试剂。
[0014]其中，优选的，所述的试剂能够用于GSDMD表达和切割情况的检测。
[0015]相较于现有技术，本专利技术的有益效果是：
[0016]本专利技术提供了一种小鼠抗猪GSDMD蛋白单克隆抗体，并且建立了运用该单克隆抗体对猪源细胞和猪组织中GSDMD表达和切割情况进行免疫印迹检测的方法。实验证明，该单克隆抗体对猪Gasdermin D蛋白具有反应特异性，所述的单克隆抗体不仅能够检测猪GSDMD全蛋白，还能够检测活化切割后的猪GSDMD蛋白羧基端节段。本专利技术的提出对猪GSDMD生物学功能的研究具有重要意义。
附图说明
[0017]图1为抗猪GSDMD单克隆抗体用于免疫印迹方法检测猪肠组织中GSDMD蛋白表达及切割情况的结果图；
[0018]图2为抗猪GSDMD单克隆抗体用于免疫印迹方法检测猪IPEC
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J2细胞中GSDMD表达情况的结果图。
具体实施方式
[0019]下面通过实验并结合实施例对本专利技术做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株分泌抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述的杂交瘤细胞株命名为4G7
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D7，保藏在中国典型培养物保藏中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.22321。2.一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体由权利要求1所述的杂...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文龙，宋佳梦，王君伟，马波，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：