用于治疗乙肝感染及相关疾病的抗体制造技术

本发明专利技术涉及抗乙肝表面抗原(HBsAg)的抗体(特别是人源化抗体)，编码它们的核酸分子，制备它们的方法，以及包含它们的药物组合物。此外，本发明专利技术还涉及所述抗体和药物组合物的用途。本发明专利技术的抗体和药物组合物可用于预防和/或治疗HBV感染或与HBV感染相关的疾病(例如乙肝)，用于在受试者(例如人)体内中和HBV的毒力，或用于在受试者体内降低HBVDNA和/或HBsAg的血清水平。的血清水平。的血清水平。

【技术实现步骤摘要】
用于治疗乙肝感染及相关疾病的抗体
[0001]本申请是申请号为201810307136.5、申请日为2018年4月8日、专利技术名称为“用于治疗乙肝感染及相关疾病的抗体”的专利技术申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及分子病毒学和免疫学领域，特别是治疗乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染的领域。具体而言，本专利技术涉及抗乙肝表面抗原(HBsAg)的抗体，编码它们的核酸分子，制备它们的方法，以及包含它们的药物组合物。所述药物组合物可用于预防和/或治疗HBV感染或与HBV感染相关的疾病(例如乙肝)，用于在受试者(例如人)体内中和HBV的毒力，或用于在受试者体内降低HBV DNA和/或HBsAg的血清水平。因此，本专利技术进一步涉及，所述抗体(特别是人源化抗体)及其变体在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于预防和/或治疗HBV感染或与HBV感染相关的疾病(例如乙肝)，用于在受试者(例如人)体内中和HBV的毒力，或用于在受试者体内降低HBV DNA和/或HBsAg的血清水平。

技术介绍

[0003]乙型肝炎病毒感染，尤其是慢性HBV感染是全球最为重要的公共卫生问题之一(Dienstag JL.Hepatitis B virus infection.N Engl J Med 2008Oct 2；359(14):1486
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1500)。慢性HBV感染可导致慢性乙型病毒性肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)、肝硬化(Liver cirrhosis,LC)和原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)等一系列肝脏疾病(Liaw YF,Chu CM.Hepatitis B virus infection.Lancet 2009Feb 14；373(9663):582
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592)。据报道，目前全球约有20亿人曾经感染过HBV，现约有3.5亿的慢性乙型肝炎病毒感染者，这些感染者最终死于HBV感染相关肝脏疾病的风险可达15％
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25％，全球每年超过100万人死于此类疾病(Dienstag JL.，同上；和Liaw YF等，同上)。
[0004]当前针对慢性HBV感染的治疗药物主要可分为干扰素类(Interferon，IFNs)和核苷/核苷酸类似物(nucleoside or nucleotide,NAs)(Dienstag JL.，同上；Kwon H,Lok AS.Hepatitis B therapy.Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2011May；8(5):275
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284；和Liaw YF等，同上)。前者包括普通干扰素(IFN)和聚乙二醇干扰素(Peg
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interferon,Peg
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IFN，又称为长效干扰素)，主要通过整体增强患者免疫能力来达到抑制HBV和治疗CHB的效果；后者主要包括拉米夫定(lamivudine，LMV)、阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)、恩替卡韦(Entecavir,ETV)、替比夫定(Telbivudine,LdT)、替诺福韦(Tenofovir)等5种，主要通过直接抑制HBV的聚合酶活性来抑制HBV复制。对于HBV感染者(例如CHB患者)来说，上述药物的单独或联合治疗，已能较为有效地抑制体内病毒复制，大幅降低HBV DNA水平；特别地，52周或延长的此类治疗后，患者体内HBV DNA水平低于检测下限(病毒学应答)的应答率可达40
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80％(Kwon H等，同上)。然而，上述药物的单独或联合治疗均不能完全清除感染者体内的HBV病毒，其导致的HBsAg阴转或HBsAg血清学转换(感染者体内HBV病毒彻底清除的标志)的应答率通常小于5％(Kwon H等，同上)。因此，针对HBV感染者发展创新的、能更为有效地清除HBV病毒、尤其是清除HBsAg的治疗方法和药物是迫切而必要的。
[0005]基于免疫学手段发展新的治疗慢性HBV感染的药物是此领域的重要研究方向之一。慢性HBV感染的免疫治疗通常通过主动免疫治疗(其对应药物形式如疫苗等)和被动免疫治疗(其对应药物形式如抗体等)等两种方式来进行。主动免疫治疗则是指，通过施用治疗性疫苗(包括蛋白疫苗、多肽疫苗和核酸疫苗等)，刺激慢性HBV感染者机体主动产生针对HBV的细胞免疫应答(CTL效应等)或/和体液免疫应答(抗体等)，从而达到抑制或清除HBV的目的。目前尚无明确显著有效的、可用于治疗慢性HBV感染的主动免疫治疗药物/疫苗。被动免疫治疗(以抗体为例)是指，向HBV感染者被动施用具治疗特性的抗体，并利用抗体介导的病毒中和作用阻断HBV感染新生肝细胞，或利用抗体介导的免疫清除作用清除体内病毒和被感染的肝细胞，从而起到治疗的效果。目前，从预防性乙型肝炎疫苗免疫应答者或HBV感染恢复者血清/血浆中纯化获得的Anti
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HBs多克隆抗体，即高效价的乙肝免疫球蛋白(HBIG)已广泛应用于阻断HBV的母婴垂直传播、预防慢性HBV感染者肝移植后的HBV再感染、以及预防意外暴露于HBV的人群的感染。然而，将HBIG直接用于HBV感染者(例如CHB患者)的治疗无明显疗效，且其存在例如高效价血浆来源较少、价格昂贵、性质不稳定、潜在的安全性问题等诸多局限性。
[0006]因此，针对HBV感染者发展创新的、能更为有效地治疗HBV感染的治疗方法和药物是迫切而必要的。
[0007]专利技术概述
[0008]在一个方面，本专利技术提供了一种能够特异性结合HBsAg的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
[0009](a)选自下列的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)中的一个或多个(例如1个，2个或3个)：
[0010](i)VH CDR1，其由下述序列组成：SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:18或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个或3个氨基酸置换、缺失或添加)的序列；
[0011](ii)VH CDR2，其由下述序列组成：SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:19或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个或3个氨基酸置换、缺失或添加)的序列，和
[0012](iii)VH CDR3，其由下述序列组成：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:20，或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个或3个氨基酸置换、缺失或添加)的序列；
[0013]和/或
[0014](b)选自下列的轻链可变区(VL)CDR中的一个或多个(例如1个，2个或3个):
[0015](iv)VL CDR1，其由下述序列组成：SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:15或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.能够特异性结合HBsAg的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(VH)，所述VH包含：(i)VH CDR1，其由下述序列组成：SEQ ID NO:12，或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个或3个氨基酸置换、缺失或添加)的序列，(ii)VH CDR3，其由下述序列组成：SEQ ID NO:14，或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个或3个氨基酸置换、缺失或添加)的序列，以及(iii)VH CDR2，其由下述序列组成：任意免疫球蛋白的重链可变区中所包含的VH CDR2的序列；和/或(b)轻链可变区(VL)，所述VL包含：(iv)VL CDR1，其由下述序列组成：SEQ ID NO:15，或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个或3个氨基酸置换、缺失或添加)的序列，(v)VL CDR3，其由下述序列组成：SEQ ID NO:17，或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个或3个氨基酸置换、缺失或添加)的序列，以及(vi)VL CDR2，其由下述序列组成：任意免疫球蛋白的轻链可变区(例如，κ轻链可变区)中所包含的VL CDR2的序列；优选地，所述VH CDR2为人免疫球蛋白的重链可变区中所包含的VH CDR2的序列；优选地，所述VH CDR2由下述序列组成：(a)SEQ ID NO:13，或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个或3个氨基酸置换、缺失或添加)的序列；或，(b)人重链胚系基因所编码的氨基酸序列中所包含的VH CDR2的序列；优选地，所述人重链胚系基因选自IGHV4
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30
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4*07和IGHV4
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4*01；优选地，所述VH包含：(a)如SEQ ID NO:12所示的VH CDR1；如SEQ ID NO:14所示的VH CDR3；以及，具有选自下列的氨基酸序列的VH CDR2：SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:141或SEQ ID NO:142；优选地，所述VL CDR2为人免疫球蛋白的轻链可变区中所包含的VL CDR2的序列；优选地，所述VL CDR2由下述序列组成：(a)SEQ ID NO:16，或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加的序列；或，(b)人轻链胚系基因所编码的氨基酸序列中所包含的VL CDR2的序列；优选地，所述人轻链胚系基因选自IGKV2
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28*01和IGKV3
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15*01；优选地，所述VL包含：如SEQ ID NO:15所示的VL CDR1；如SEQ ID NO:17所示的VL CDR3；以及，具有选自下列的氨基酸序列的VL CDR2：SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:144；优选地，所述抗体或其抗原结合片段的VH包含：如SEQ ID NO:12所示的VH CDR1，如SEQ ID NO:14所示的VH CDR3，以及具有选自下列的氨基酸序列的VH CDR2：SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:141或SEQ ID NO:142；并且，该抗体或其抗原结合片段的VL包含：如SEQ ID NO:15所示的VL CDR1，如SEQ ID NO:17所示的VL CDR3，以及具有选自下列的氨基酸序列的VL CDR2：SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:144。2.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)如SEQ ID NO:12所示的VH CDR1，如SEQ ID NO:14所示的VH CDR3，以及VH CDR2，其
由下述序列组成：任意免疫球蛋白的重链可变区中所包含的VH CDR2的序列(例如，SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:141或SEQ ID NO:142)；和，如SEQ ID NO:15所示的VL CDR1，如SEQ ID NO:17所示的VL CDR3，以及如SEQ ID NO:16所示的VL CDR2；或(ii)如SEQ ID NO:12所示的VH CDR1；如SEQ ID NO:14所示的VH CDR3；以及如SEQ ID NO:13所示的VH CDR2；和，如SEQ ID NO:15所示的VL CDR1，如SEQ ID NO:17所示的VL CDR3，以及VL CDR2，其由下述序列组成：任意免疫球蛋白的轻链可变区中所包含的VL CDR2的序列(例如，SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:144)；优选地，所述VH CDR2为人免疫球蛋白的重链可变区中所包含的VH CDR2的序列；优选地，所述VL CDR2为人免疫球蛋白的轻链可变区(例如，κ轻链可变区)中所包含的VL CDR2的序列；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：(1)如SEQ ID NO:12所示的VH CDR1、如SEQ ID NO:13所示的VH CDR2、和如SEQ ID NO:14所示的VH CDR3；以及，如SEQ ID NO:15所示的VL CDR1、如SEQ ID NO:16所示的VL CDR2、和如SEQ ID NO:17所示的VL CDR3；(2)如SEQ ID NO:12所示的VH CDR1、如SEQ ID NO:141所示的VH CDR2、和如SEQ ID NO:14所示的VH CDR3；以及，如SEQ ID NO:15所示的VL CDR1、如SEQ ID NO:16所示的VL CDR2、和如SEQ ID NO:17所示的VL CDR3；(3)如SEQ ID NO:12所示的VH CDR1、如SEQ ID NO:142所示的VH CDR2、和如SEQ ID NO:14所示的VH CDR3；以及，如SEQ ID NO:15所示的VL CDR1、如SEQ ID NO:16所示的VL CDR2、和如SEQ ID NO:17所示的VL CDR3；(4)如SEQ ID NO:12所示的VH CDR1、如SEQ ID NO:13所示的VH CDR2、和如SEQ ID NO:14所示的VH CDR3；以及，如SEQ ID NO:15所示的VL CDR1、如SEQ ID NO:143所示的VL CDR2、和如SEQ ID NO:17所示的VL CDR3；或(5)如SEQ ID NO:12所示的VH CDR1、如SEQ ID NO:13所示的VH CDR2、和如SEQ ID NO:14所示的VH CDR3；以及，如SEQ ID NO:15所示的VL CDR1、如SEQ ID NO:144所示的VL CDR2、和如SEQ ID NO:17所示的VL CDR3。3.能够特异性结合HBsAg的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(VH)，所述VH包含：(i)VH CDR1，其由下述序列组成：SEQ ID NO:18，或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个或3个氨基酸置换、缺失或添加)的序列；(ii)VH CDR2，其由下述序列组成：SEQ ID NO:19，或者与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个或3个氨基酸置换、缺失或添加)的序列，和(iii)VH CDR3，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗文新，王一文，康赐明，袁权，张天英，夏宁邵，
申请(专利权)人：养生堂有限公司，
类型：发明
国别省市：