一种蛋白的核酸适配体、其衍生物及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种蛋白的核酸适配体，所述核酸适配体为特异性结合NTRK1蛋白的核酸适配体。优选所述核酸适配体的序列包含SEQ ID No.1和SEQ ID No.2中的至少一种。本发明专利技术提供的核酸适配体或其截断核酸适配体、核酸适配体衍生物可以高度特异性结合NTRK1蛋白，是一种新型的靶向小分子，与抗体相比具有分子量小、灵敏度高、稳定性好、易于合成与改造等优点，本发明专利技术通过磁珠SELEX技术筛选出第一个可与NTRK1蛋白结合的核酸适配体，为人类慢性疼痛的治疗提供一种新型的潜在靶向药物。的治疗提供一种新型的潜在靶向药物。的治疗提供一种新型的潜在靶向药物。

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白的核酸适配体、其衍生物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医学与分析化学领域，尤其涉及一种蛋白的核酸适配体、其衍生物及其应用。

技术介绍

[0002]慢性疼痛是指持续一个月以上的疼痛，也有人把慢性疼痛比喻为一种不死的癌症，目前，中国至少有一亿以上的慢性疼痛患者。NTRK1基因属于神经生长因子受体家族，编码单个跨膜受体酪氨酸激酶蛋白TrkA。神经生长因子(NGF)是它主要的高亲和力配体，TrkA与二聚体NGF配体结合后二聚，自身磷酸化并激活下游信号传导，从而调节细胞分化和存活。TrkA在各种组织和器官中都有表达，例如周围神经系统，中枢神经系统，消化道，肾上腺皮质等。NGF
‑
TrkA途径信号传导诱导伤害感受器致敏被认为是慢性疼痛的关键机制。目前NGF/TrkA抑制剂大致分为三类：(1)药物捕获NGF；(2)抑制NGF和TrkA结合的药物；(3)直接抑制TrkA酶活性的药物。虽然已经报道了多种TrkA激酶抑制剂对疼痛状况的临床前评估，但很少有关于NGF/TrkA抑制剂用于疼痛相关疾病的临床经验的报道，然而靶向该途径的药物治疗仍然是治疗慢性疼痛病症的一种有前景的策略。
[0003]核酸适配体是单链核酸分子(ssDNA或RNA)，可以形成一定的三维结构识别特定的靶标。核酸适配体，也被称为“化学抗体”，具有较高的特异性和亲和力，与传统抗体相比，它具有分子量小，空间限制少，结合表位多；易于合成，成本低，批次间差异小；免疫原性低；易于修饰和编辑等优势，通常是在体外利用指数富集的配体系统进化技术(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)从核酸分子文库中得到的寡核苷酸片段。核酸适配体已被广泛应用于各个领域，包括体外诊断、生物传感技术、生物标志物的检测和分析，用作治疗性药物或形成适配体
‑
药物结合物。
[0004]治疗性适配体可用作激动剂、拮抗剂和抑制剂或用作靶向载体，临床试验中的许多核酸适配体是拮抗的或抑制性的。目前国内外未见有关于NTRK1蛋白核酸适配体的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术拟申请NTRK1蛋白的首个核酸适配体，以期通过核算适配体作为拮抗剂来阻断TrkA受体蛋白与NGF的结合，为治疗慢性疼痛提供新的思路。
[0006]因此，本专利技术首先提供一种蛋白的核酸适配体，所述核酸适配体为特异性结合NTRK1蛋白的核酸适配体。
[0007]在一种具体的实施方式中，所述核酸适配体通过文库反筛、文库正筛、单链文库制备、荧光定量PCR监测各轮筛选文库富集程度、多轮筛选及高通量测序中的一个或多个步骤制备得到。
[0008]在一种具体的实施方式中，所述核酸适配体包括10～200个核苷酸，优选包括30～80个核苷酸。
[0009]在一种具体的实施方式中，所述核酸适配体的序列包含以下核苷酸序列中的至少
一种：
[0010]1)如SEQ ID No.1
‑
2所示的任意一个DNA序列；
[0011]SEQ ID No.1为：
[0012]5'
‑
CGCATAGCAGTGGTCAAGGGTCTCTTTCGTTACAGAAAAGTCTGCCTATGCG
‑
3'，
[0013]SEQ ID No.2为：
[0014]5'
‑
CGCATAGCTTTTCGGGGGCCTGCTCGGGATTGCGGATACGATGCCCTATGCG
‑
3'，
[0015]2)与SEQ ID No.1
‑
2所示的任意一个DNA序列具有60％以上同源性的DNA序列；
[0016]3)将SEQ ID No.1
‑
2所示的任意一个DNA序列删除、增加或替换一个或多个碱基，所得的具有相同或类似功能的DNA序列；
[0017]4)由SEQ ID No.1
‑
2所示的任意一个DNA序列转录的RNA序列。
[0018]本专利技术还提供如上任意一项所述核酸适配体的衍生物，所述衍生物为将所述核酸适配体的核苷酸序列进行包括氨基化、磷酸化、羧基化、硫代修饰、巯基修饰、2
‑
甲氧基修饰、3'端倒置dT/dG修饰、甲基/去甲基化、或同位素化的修饰，得到与所述核酸适配体具有相同功能的衍生物。
[0019]本专利技术还提供如上任意一项所述核酸适配体的衍生物，所述衍生物为将所述核酸适配体的核苷酸序列连接信号分子或活性分子或功能基团而得到具有相同功能的核酸适配体的衍生物。
[0020]在一种具体的实施方式中，所述信号分子或活性分子或功能基团包括荧光或淬灭基团、放射性物质、治疗性物质、蛋白、抗体、siRNA、纳米发光材料、生物素、地高辛和胆固醇中的一种或多种。
[0021]本专利技术还提供如上任意一项所述核酸适配体的衍生物，所述衍生物为将所述核酸适配体的核苷酸序列改造的肽核酸。
[0022]本专利技术还提供如上任意一项所述核酸适配体或任意一项所述核酸适配体的衍生物的应用，所述核酸适配体或核酸适配体衍生物在特异性识别NTRK1蛋白或检测NTRK1蛋白中的应用，或者所述核酸适配体或核酸适配体衍生物在制备检测NTRK1蛋白的试剂盒或检测NTRK1蛋白的分子探针中的应用。
[0023]本专利技术还提供如上任意一项所述核酸适配体或任意一项所述核酸适配体的衍生物的应用，所述核酸适配体或核酸适配体衍生物在治疗或辅助治疗慢性疼痛中的应用。
[0024]具体地，本专利技术采用磁珠SELEX筛选方法，经过六轮筛选得到特异性结合NTRK1蛋白的核酸适配体，将其分别命名为Apt
‑
TRK
‑
1和Apt
‑
TRK
‑
2，并通过两种经济适用的检测方法：酶联核酸适体吸附法(ELASA)和磁珠荧光定量PCR法测得筛到的核酸适配体与NTRK1蛋白的亲和力常数KD，均达到nM级别。
[0025]Apt
‑
TRK
‑
1的序列如SEQ ID No.1所示，其序列为：
[0026]SEQ ID No.1：
[0027]5'
‑
CGCATAGCAGTGGTCAAGGGTCTCTTTCGTTACAGAAAAGTCTGCCTATGCG
‑
3'，
[0028]Apt
‑
TRK
‑
2的序列如SEQ ID No.2所示，其序列为：
[0029]SEQ ID No.2：
[0030]5'
‑
CGCATAGCTTTTCGGGGGCCTGCTCGGGATTGCGGATACGATGCCCTATGCG
‑
3'。
[0031]本专利技术提供的核酸适配体或其截断核酸适配体、核酸适配体衍生物可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白的核酸适配体，所述核酸适配体为特异性结合NTRK1蛋白的核酸适配体。2.根据权利要求1所述的蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体通过磁珠SELEX技术筛选得到，优选所述核酸适配体通过文库反筛、文库正筛、单链文库制备、荧光定量PCR监测各轮筛选文库富集程度、多轮筛选及高通量测序中的一个或多个步骤制备得到。3.根据权利要求1所述的蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体包括10～200个核苷酸，优选包括30～80个核苷酸。4.根据权利要求1所述的蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列包含以下核苷酸序列中的至少一种：1)如SEQ ID No.1
‑
2所示的任意一个DNA序列；SEQ ID No.1为：5'
‑
CGCATAGCAGTGGTCAAGGGTCTCTTTCGTTACAGAAAAGTCTGCCTATGCG
‑
3'，SEQ ID No.2为：5'
‑
CGCATAGCTTTTCGGGGGCCTGCTCGGGATTGCGGATACGATGCCCTATGCG
‑
3'，2)与SEQ ID No.1
‑
2所示的任意一个DNA序列具有60％以上同源性的DNA序列；3)将SEQ ID No.1
‑
2所示的任意一个DNA序列删除、增加或替换一个或多个碱基，所得的具有相同或类似功能的DNA序列；4)由SEQ ID No.1
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡娜，李柱，
申请(专利权)人：湖南赛奥维生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：