包含两种蛋白酶的洗涤剂组合物制造技术

本发明专利技术涉及包含具有不同净电荷特性的第一蛋白酶和第二蛋白酶的洗涤剂组合物、以及新颖的蛋白酶变体。颖的蛋白酶变体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含两种蛋白酶的洗涤剂组合物
[0001]序列表的引用
[0002]本申请含有计算机可读形式的序列表，将其通过援引并入本文。


[0003]本专利技术涉及包含具有不同净电荷特性的至少第一蛋白酶和第二蛋白酶的洗涤剂组合物，该第一蛋白酶和该第二蛋白酶共同提供相对于单独的酶的提高的清洁性能；该组合物在清洁过程中的用途，特别是用于洗衣的用途；以及新颖的蛋白酶变体。

技术介绍

[0004]枯草杆菌蛋白酶是来自S8家族、特别是来自S8A亚家族的丝氨酸蛋白酶，如MEROPS数据库(https://www.ebi.ac.uk/merops/index.shtml)所定义的。在S8A亚家族中，关键活性位点残基Asp、His和Ser典型地是在不同于S8B亚家族的那些基序的基序中发现。
[0005]在洗涤剂工业中，酶已在用于洗衣或硬表面清洁(诸如餐具洗涤)的洗涤剂组合物中应用了数十年。此类组合物中使用的酶包含蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、甘露糖苷酶、以及其他酶、或其混合物。商业上，最重要的酶是蛋白酶。
[0006]已知不同的蛋白酶对不同类型的污渍可能有不同的表现。已经尝试通过在单一洗涤剂组合物中包含两种不同的蛋白酶来解决这个问题并提高洗涤性能。此类组合物披露于例如WO 2009/021867、WO 2014/177430、WO 2016/000970和WO 2016/000971中。
[0007]然而，尽管专利文献中披露了一些包含两种不同蛋白酶的此类组合物，但实际上，包含两种不同蛋白酶的洗涤剂组合物尚未获得任何广泛的商业成功。
[0008]进一步地，专利文献中描述的相对较少的包含两种蛋白酶的组合物披露在自动餐具洗涤的上下文中。相比之下，尚未关注开发适应洗衣条件和要求的具有两种不同蛋白酶的洗涤剂组合物。
[0009]因此，考虑到当前可用的洗涤剂组合物中使用的单独的蛋白酶不能有效去除任何给定环境中(特别是在洗衣环境中)所有相关的基于蛋白质的污渍，仍然需要具有提高的蛋白质污渍去除性质的洗涤剂组合物。
[0010]本专利技术通过提供包含具有不同净形式电荷特性的至少两种不同蛋白酶的洗涤剂组合物满足这一需求，其中，与单独的酶相比，这两种蛋白酶的组合导致对单独的污渍的提高的洗涤性能和/或覆盖更广泛的污渍。设想到了本专利技术的组合物将特别地用作衣物洗涤剂组合物，尤其是液体衣物洗涤剂组合物。

技术实现思路

[0011]本专利技术涉及一种洗涤剂组合物，其包含具有不同净电荷特性的至少第一蛋白酶和第二蛋白酶。
[0012]在一个实施例中，本专利技术涉及包含第一蛋白酶和第二蛋白酶的洗涤剂组合物，其中：
[0013]1)该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1、
‑
3、或
‑
4的净形式电荷，并且该第二蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
2的净形式电荷；或
[0014]2)该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
3、
‑
4、或
‑
5的净形式电荷，并且该第二蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1、0、或+1的净形式电荷。
[0015]在其他实施例中，洗涤剂组合物可以包含第一蛋白酶和第二蛋白酶，其中：该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有0、1、2、3、4、或
‑
5的净形式电荷，并且该第二蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有+5、+4、+3、+2、+1、0、或
‑
1的净形式电荷；该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
3、
‑
4、或
‑
5的净形式电荷，并且该第二蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有+2的净形式电荷；或者该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有0、
‑
1、或
‑
2的净形式电荷，并且该第二蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有+2、+3、+4、或+5的净形式电荷。
[0016]本专利技术还涉及本文披露的组合物在清洁过程中的用途，例如用于洗衣或硬表面清洁(诸如餐具洗涤)的用途，特别是用于洗衣的用途；以及涉及使用该组合物进行清洁的方法。
[0017]在另一方面，本专利技术涉及新颖的蛋白酶变体，该蛋白酶变体具有有利的性质，例如，当此类蛋白酶作为单一蛋白酶单独使用或与另一种蛋白酶一起用于洗涤剂组合物时，洗涤性能得到提高，其中该蛋白酶是在位置97、209和215处包含取代的SEQ ID NO:1的变体。
[0018]序列综述
[0019]SEQ ID NO:1是来自迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)的蛋白酶多肽的序列。
[0020]SEQ ID NO:2是来自解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的BPN
’
蛋白酶多肽的序列。
附图说明
[0021]图1是枯草杆菌蛋白酶309(SEQ ID NO:1)和枯草杆菌蛋白酶BPN
’
(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列的比对。
[0022]定义
[0023]枯草杆菌酶/蛋白酶：术语“枯草杆菌酶”和“蛋白酶”在本文中可以互换地使用，并且是指水解蛋白质中的肽键的酶。这包括属于EC 3.4酶组(包括其13个亚类中的每一个)的任何酶，并且特别是内肽酶(EC 3.4.21)。EC编号是指来自NC
‑
IUBMB,Academic Press[学术出版社],圣地亚哥,加利福尼亚的Enzyme Nomenclature 1992[酶命名法1992]，包括分别在Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]1994,223,1
‑
5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]1995,232,1
‑
6；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]1996,237,1
‑
5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]1997,250,1
‑
6；以及Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]1999,264,610
‑
650中公开的增刊1
‑
5。
[0024]蛋白酶活性：术语“蛋白酶活性”意指蛋白水解活性(EC 3.4)，特别是内肽酶活性(EC 3.4.21)。存在若干种蛋白酶活性类型，三种主要的活性类型是：胰蛋白酶样(其中在P1处在Arg或Lys后面存在酰胺底物的裂解)、胰凝乳蛋白酶样(其中在P1处在一个疏水性氨基
酸后面发生裂解)、以及弹性蛋白酶样(在P1处在Ala后面裂解)。蛋白酶活性可根据WO 2016/087619中描述的程序确定。
[0025]序列同一性：两个氨基酸序本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种洗涤剂组合物，其包含第一蛋白酶和第二蛋白酶，其中1)该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1、
‑
3或
‑
4的净形式电荷，并且该第二蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
2的净形式电荷；或2)该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
3、
‑
4或
‑
5的净形式电荷，并且该第二蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1、0或+1的净形式电荷。2.如权利要求1所述的洗涤剂组合物，其中该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1、
‑
3或
‑
4的净形式电荷，并且该第二蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
2的净形式电荷，例如其中该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
3或
‑
4的净形式电荷。3.如权利要求1所述的洗涤剂组合物，其中该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
3、
‑
4或
‑
5的净形式电荷，并且该第二蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1、0或+1的净形式电荷，例如其中该第一蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
3的净形式电荷，并且该第二蛋白酶相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1的净形式电荷。4.如前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其包含第一蛋白酶和第二蛋白酶，该第一蛋白酶和该第二蛋白酶各自相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1、
‑
2、
‑
3或
‑
4的净形式电荷，并且其中该第一蛋白酶和该第二蛋白酶的净形式电荷彼此相差1或2。5.如权利要求4所述的洗涤剂组合物，其中该组合物包含：a)相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶，净形式电荷为
‑
4的第一蛋白酶和净形式电荷为
‑
2的第二蛋白酶；b)相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶，净形式电荷为
‑
3的第一蛋白酶和净形式电荷为
‑
2的第二蛋白酶；或c)相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶，净形式电荷为
‑
3的第一蛋白酶和净形式电荷为
‑
1的第二蛋白酶。6.如权利要求1
‑
2或4
‑
5中任一项所述的洗涤剂组合物，其包含相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1、
‑
3或
‑
4的净形式电荷的第一蛋白酶和相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
2的净形式电荷的第二蛋白酶，其中该第二蛋白酶是包含取代G97D+S156D+Y209W+A215K+L262E或S9R+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+Q245R+L262E的SEQ ID NO:1的变体，其中位置编号基于SEQ ID NO:2的编号。7.如权利要求1
‑
2或4
‑
6中任一项所述的洗涤剂组合物，其包含相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1、
‑
3或
‑
4的净形式电荷的第一蛋白酶和相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
2的净形式电荷的第二蛋白酶，其中该第一蛋白酶是具有一组突变的SEQ ID NO:1的变体，该突变选自由以下组成的组：
·
K27M；
·
S99AD；
·
G97D+S156D+Y209W+A215K；
·
G97D+Y209W+A215K+L262E；
·
S9R+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+K235M+Q245R+L262E；
·
S9R+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262E；
·
S9E+N43R+N76D+V205I+Q206L+Y209W+S259D+N261W+L262E；
·
N62D+N76D+G97D+Y209W+A215K+L262E；
·
N62D+G97D+S101E+V177I+Y209W+A215K+L262E；
·
N62D+G97D+S101E+Y209W+A215K+L262E；
·
G97D+S101E+S156D+A172V+Y209W+A215K+L262E；
·
S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262E；
·
K27H+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+Q245R+L262E；
·
S9R+K27M+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+K237M+Q245R+L262E；
·
N76D+G97D+N140D+S156D+Y209W+A215K+L262E；以及
·
K27M+N77D+G97D+S156D+Y209W+A215K+L262E；其中位置编号基于SEQ ID NO:2的编号。8.如权利要求1或3
‑
5中任一项所述的洗涤剂组合物，其包含相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
3、
‑
4或
‑
5的净形式电荷的第一蛋白酶和相对于SEQ ID NO:1的蛋白酶具有
‑
1、0或+1的净形式电荷的第二蛋白酶，其中该第一蛋白酶是包含一组突变的SEQ ID NO:1的变体，该突变选自由以下组成的组：
·
S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262E；
·
K27H+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+Q245R+L262E；
·
S9R+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+K235M+Q245R+L262E；
·
S9R+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262E；
·
S9R+K27M+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+K237M+Q245R+L262E；
·
S9E+N43R+N76D+V205I+Q206L+Y209W+S259D+N261W+L262E；
·
S9E+N43R+N76D+N185E+S188E+Q191N+A194P+Q206L+Y209W+S259D+L262E；
·
*36D+N76D+H120D+G195E+K235L；
·
S9R+K27M+S99A+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+K237M+Q245R+L262E；
·
S9R+K27M+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+K237M+Q245R+L262E；
·
S9R+K27M+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+A215K+K237M+Q245R+L262E；
·
S9R+K27M+N43R+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+K237M+Q245R+L262E；
·
S9R+N43R+S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+N173D+K235M+Q245R+L262E；
·
S9E+G97D+S156D+Y209W+A215K+L262E；
·
G97D+S101E+S156D+A172V+Y209W+A215K+L262E；
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N76D+G97D+N140D+S156D+Y209W+A215K+L262E；
·
N76D+G97D+S101E+T180A+Y209W+A215K+L262E；
·
N76D+G97D+S101E+Y209W+A215K+L262E；
·
N62D+G97D+S101E+Y209W+A215K+L262E；
·
N62D+G97D+S101E+V177I+Y209W+A215K+L262E；
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N62D+N76D+G97D+Y209W+A215K+L262E；
·
K27M+G97D+S156D+Y209W+A215K+L262E；
·
K27M+N77D+G97D+S156D+Y209W+A215K+...

【专利技术属性】
技术研发人员：JCF克诺策尔，BM卢埃，K詹森，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：