描述了包含人源化抗体，其片段、变体和衍生物的新型结合分子，包含其的组合物、方法和试剂盒，其中该结合分子与FX1和FX1a特异性结合。该结合分子能够与因子X1A2结构域结合并形成免疫复合物，并由此破坏接触活化分子复合物而不影响止血因子XI活性或活化。本公开的结合分子适用于安全抑制血栓形成和炎症而不损害止血功能。因此，本文提供的结合分子、组合物、方法和试剂盒旨在治疗尤其是血栓形成和炎症相关的疾病和病症。此外，还提供了编码本公开的结合分子的多核苷酸、包含该多核苷酸的载体和用于产生多核苷酸的宿主细胞。和用于产生多核苷酸的宿主细胞。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有抗血栓形成和抗炎作用的新型抗因子XI人源化抗体及其用途
[0001]相关申请
[0002]本申请要求享有2019年1月21日提交的美国临时专利申请号62/794,987的优先权，其公开内容通过引用以其全部内容结合于本文中。
[0003]序列表
[0004]本申请包含序列表，其已以ASCII格式以电子方式提交，并通过引用以其整体结合于本文中。ASCII副本创建于2020年1月15日，命名为ARB002PCT_SL.txt，大小为18,337字节。
[0005]政府支持
[0006]本公开中描述的本专利技术至少部分得到美国卫生与公众服务部(United States Department of Health and Human Services)(HHS)、国立卫生研究院(National Institutes of Health)的美国政府资助项目编号R44AI088937、R44HL128016、R43NS077600和R44HL106919的支持。美国政府对因本公开而产生的专利技术拥有某些权利。
[0007]本公开一般涉及抗体，更具体涉及能够结合因子XI的人源化单克隆抗体及其使用方法，包括用作不损害止血功能的抗血栓形成剂和抗炎剂的方法。
技术介绍
[0008]血栓栓塞性疾病，包括静脉和动脉血栓形成，是全球发达国家严重慢性发病率和死亡率的主要原因。这些疾病是由纤维蛋白、血小板和其他血细胞在血管内积聚引起的异常血凝块(血栓)形成引起的，通常导致血管闭塞、组织缺血，并且在某些情况下，由于血栓的凝块碎片移位和迁移而导致栓塞。
[0009]在正常情况下，血液凝固导致止血，这是通过诱导血小板活化和纤维蛋白形成而防止血管损伤部位失血的重要机制。在机械层面上，止血在两个同时过程中进行。在初级止血期间，与腔外环境接触的血液会被必需的止血蛋白组织因子(TF)激活，从而立即产生凝血酶。转而凝血酶会激活其他凝血因子(F)，如纤维蛋白原(FI)、FXIII、FV等。而且，血小板粘附于创伤部位并且也被激活，主要是由凝血酶激活，并最终通过相互结合形成血小板栓塞而聚集。在二次止血期间，血小板栓塞的形成得到增强和稳定化，这是由一系列持续的血小板活化和酶促反应引起的，这涉及凝血蛋白FXI、FIX、FX、FVIII、FVII、FV、FXIII、FII(凝血酶原)和FI，这由此导致更稳定的止血栓塞，最终密封血管壁的裂口，防止失血和死亡。
[0010]自1964年Macfarlane(Nature.1964May 2；202:498
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9)为凝血过程引入级联瀑布模型以来，围绕体内凝血机制和功能的知识不断增长。在过去的几十年中，两种不同的途径，即所谓的外在途径和内在途径，启动凝血并汇聚成最终导致凝血酶生成和纤维蛋白沉积的共同途径的理论已经被部分修改和挑战。
[0011]在相关医学领域内的许多人普遍接受的一种模型中，当循环血浆蛋白酶激活因子
VII(FVIIa)接触并由此与辅因子TF形成复合物时，会发生止血过程期间的凝血酶生成的启动。这种TF
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FVIIa复合物将酶原FIX和FX转化成其活性(a)形式FIXa和FXa。FIXa由此可以在辅助因子FVIIIa的存在下激活额外的FX，并且随后Fxa可以在辅助因子FVa的存在下分别激活凝血酶原(FII)而形成凝血酶(FIIa)。凝血酶是凝血的关键参与者，由此又可以催化纤维蛋白原转化为纤维蛋白，并裂解血小板上的蛋白酶激活受体(PAR)1和4，从而导致血小板活化。与纤维蛋白结合的活化血小板对于止血栓塞的形成是必不可少的，而因此是正常止血的基本参与者。
[0012]已充分证实，FXI是一种血浆丝氨酸蛋白酶酶原，在体外和体内凝血酶生成的接触阶段和扩增阶段之间发挥支持作用(Davie EW et al.,Biochemistry.1991Oct 29；30(43):10363
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70，Gailani D and Broze GJ Jr.,Science.1991Aug 23；253(5022):909
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12，Kravtsov DV et al.Blood.2009Jul 9；114(2):452
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8.)。生理止血和病理性血栓前凝血酶生成均涉及FXI的激活和FXIa的活性。
[0013]然而，证实人或其他哺乳动物的遗传性FXI缺陷通常不会导致自发性出血的数据表明，FXI不是止血凝血酶生成的重要因素。FXI缺乏症，即血友病C，与特异性止血挑战如某些类型的外科手术和创伤的出血风险增加有关，但出血的严重程度与FXI的血浆水平或活性相关性却较差。同时，据报道，人类严重的FXI缺乏对血栓性疾病具有一定的保护作用，包括缺血性中风和深静脉血栓形成(DVT)(Salomon O et al.,Thromb Haemost.2011Feb；105(2):269
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73；Salomon O et al.,Blood.2008Apr 15；111(8):4113
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7)，并且高水平的FXI与血栓事件有关，并据报道会赋予DVT、心肌梗塞(MI)和中风的更高风险(Meijers JC et al.,N Engl J Med.2000Mar 9；342(10):696
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701，Berliner JI et al.,Thromb Res.2002Jul 15；107(l
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2):55
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60，Yang DT et al.,Am J Clin Pathol.2006Sep；126(3):411
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5)。因此，有人提出，FXI的药理学靶向可能比常规抗凝更安全，而灵长类动物研究提供了这一假设的证据(Gruber A and Hanson SR,Blood.2003Aug l；102(3):953
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955，Tucker El et al.,Blood.2009Jan 22；113(4):936
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944)。
[0014]综上所述，理论考虑和先前的研究表明FXI在维持止血方面具有辅助作用，但对血栓形成的发病机制贡献重要作用，从而使FXI成为安全抗血栓治疗的前景靶点。目前有大量的非临床和临床证据支持这一概念。目前可用的抗血栓药物靶向血栓的构成单元(纤维蛋白和血小板)，或者抑制分子(凝血因子)和细胞(血小板)参与血栓和止血栓塞形成过程。几十年来，抗血小板原纤维蛋白溶解剂和抗凝剂一直是治疗和预防血栓栓塞性疾病的主要药物，是临床实践中最常用的处方药之一。然而，当以有效剂量给予时，这些药物中的大多数可以完全阻断血栓形成和止血，而因此具有剂量限制性抗止血毒性。因此，目前的抗血栓剂由医生谨慎尝试性以低于完全有效的剂量进行给予，才能平衡抗血栓形成的益处和严重而甚至致命性出血的可能性。
[0015]到目前为止，显示出治疗潜力的抗FXI抗体的少数实例之一是文献Tucker本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种单克隆抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其特异性结合人因子XI和/或人因子XIa，包含：包含序列KASQDVSTAVA(SEQ ID NO：1)的轻链的CDR1；包含序列LTSYRNT(SEQ ID NO：2)的轻链的CDR2；包含序列QQHYKTPYS(SEQ ID NO：3)的轻链的CDR3；包含序列GYGIY(SEQ ID NO：4)的重链的CDR1；包含序列MIWGDGRTDYNSALKS(SEQ ID NO：5)的重链的CDR2；包含序列DYYGSKDY(SEQ ID NO：6)的重链的CDR3。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，包含如SEQ ID NO：8所示的V
H
区。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其中，所述单克隆抗体包含如SEQ NO:9所示的V
L
区。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其中，所述单克隆抗体包含如SEQ ID NO：8所示的V
H
区和如SEQ ID NO：9所示的V
L
区。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其中，所述单克隆抗体或其结合片段包含如SEQ ID NO：10所示的或由SEQ ID NO：12编码的轻链。6.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其中，所述单克隆抗体或其结合片段包含如SEQ ID NO：11所示的或由SEQ ID NO：13编码的重链。7.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其中，所述单克隆抗体或其结合片段、变体或衍生物包含如SEQ ID NO：10所示的或由SEQ ID NO：12编码的轻链和如SEQ ID NO：11所示的或由SEQ ID NO：13编码的重链。8.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其中，所述单克隆抗体是人源化的单克隆抗体或嵌合单克隆抗体。9.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其中，所述抗体是IgG。10.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其中，所述抗体是IgG4。11.一种多核苷酸，编码如权利要求1中限定的单克隆抗体、抗原结合片段、变体或衍生物。12...
【专利技术属性】
技术研发人员：安德拉斯，
申请(专利权)人：俄勒冈健康与科学大学，
类型：发明
国别省市：
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