苏丹黑B2染料及染色液、使用其的检测方法、含有其的凝胶电泳体系、试剂盒及制备方法技术

本发明专利技术公开一种苏丹黑B2染料及染色液、使用其的检测方法、含有其的凝胶电泳体系、试剂盒及制备方法，该苏丹黑B2染料由苏丹黑B的结构改造获得。通过本发明专利技术的技术方案，在测定脂蛋白亚分型的试剂盒及凝胶电泳体系中，能大大提高染料的脂溶性，使得染料和脂蛋白的结合条件更简单，结合时间更短，染色效果及染色效率更高；能准确区分各脂蛋白组份，同时定性检测脂蛋白亚分型，包括高密度脂蛋白、低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白。白及极低密度脂蛋白。白及极低密度脂蛋白。

【技术实现步骤摘要】
苏丹黑B2染料及染色液、使用其的检测方法、含有其的凝胶电泳体系、试剂盒及制备方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体为一种苏丹黑B2染料及染色液、使用其的检测方法、含有其的凝胶电泳体系、试剂盒、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]目前，对于脂代谢的检测，大部分试剂盒采用单项进行检测，或者采用血脂四项同时进行检测，但其中低密度脂蛋白的含量主要通过公式进行计算，常常会导致低密度脂蛋白定量检测结果的不准确；对于亚型的检测，主要用核磁共振，非变性梯度凝胶电泳、密度梯度离心等方法，这些方法费时费力，试验过程不好控制，需要大型仪器极高技能的专业人士进行操作。
[0003]此外，有部分使用凝胶电泳方法检测脂蛋白亚分型，但由于常规使用的苏丹黑B为重氮染料，能使中性脂肪呈蓝黑色，显示磷脂效果最好；而脂蛋白中各个亚型高密度、低密度等的主要成分有差异，所以苏丹黑B与脂蛋白的各个亚型的结合不均一，导致染色结果的差异很大，造成不能很好的同时定性检测脂蛋白各个亚分型，包括高密度脂蛋白、低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白。同时，由于苏丹黑B需要在37℃下进行染色，不易操作，容易导致实验结果不准确。针对上述问题，目前还没有很好的解决方案。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种苏丹黑B2染料及染色液、使用其的检测方法、含有其的凝胶电泳体系、试剂盒、制备方法及应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：根据本专利技术的一个方面， 提供一种苏丹黑B2染料，所述苏丹黑B2由苏丹黑B的结构改造获得，其具有如下所示的结构：。
[0006]根据本专利技术的一个方面，提供一种苏丹黑B2染色液，包含上述的苏丹黑B2染料。
[0007]根据本专利技术的一个方面，提供上述染色液的制备方法，包括下列步骤：取浓度为质量体积比0.1
‑
1.5%的上述的苏丹黑B2染料，将所述苏丹黑B2加入到选自丙酮、丙二醇、异丙醇和乙二醇组合中的一种中，以加入的丙酮或丙二醇或异丙醇或乙二醇的总体积计，其中含有的丙酮或丙二醇或异丙醇或乙二醇的体积百分比范围为大于等于98.0%并小于等于99.3％；在其中加入体积比为0.5
‑
1.5%的N,N
‑
二甲基甲酰胺（N,N
‑
Dimethylformamide, DMF）或1
‑
甲基
‑
2吡咯烷酮；再在其中加入辛基酚类聚氧乙烯醚表面活性剂（Triton X
‑
405）、聚乙二醇辛基苯基醚、吐温三者中的一种作为表面活性剂，所述表面活性剂的使用体积比为0.05
‑
0.5%（V/V）；将上述混合溶液充分混合后，避光保存，即获得所述染色液。
[0008]根据本专利技术的一个方面，提供一种脂蛋白亚分型定量检测方法，所述脂蛋白亚分型包括极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein, VLDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL）及其1
‑
7亚分型、高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL），所述检测方法按照下列步骤进行：S01：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对血清或血浆中的脂蛋白进行分离；S02：将所述血清或血浆中的脂蛋白用上述染料或上述的染色液或上述制备方法制得的染色液染色后，取混合液30μL加入到凝胶柱上；S03：在电泳槽中的电场作用下，经过聚丙烯酰胺凝胶分子筛效应，脂蛋白亚分型按照脂蛋白颗粒大小依次被分离开来；S04：所述脂蛋白亚分型电泳分离的结果经电泳装置的扫描系统得到脂蛋白电泳条带的光密度图谱；S05：将所述光密度图谱通过分析软件转换为峰型图谱，并进行所述峰型图谱中各峰型面积比例分析；S06：根据检测到的总胆固醇含量和所述各峰型面积的比例得到脂蛋白亚分型各组分的准确含量。
[0009]根据本专利技术的一个方面，提供一种检测试剂盒，包含上述的苏丹黑B2染料或上述的染色液或上述制备方法制得的染色液。
[0010]进一步地，所述试剂盒还包括凝胶柱，所述凝胶柱分为上下两层，其中，上层凝胶柱的浓度为2.7
‑
3.0 wt%聚丙烯酰胺，下层凝胶柱的浓度为3.4
‑
3.8 wt%聚丙烯酰胺，其中，所述聚丙烯酰胺包含丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺，所配制的凝胶液的主要组成成分为：丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷、N,N,N',N'
‑
四甲基二乙胺、过硫酸铵及蔗糖、Proclin300；优选的，所述上层凝胶柱的使用体积为140
‑
200μL，所述下层凝胶柱的使用体积为1.2
‑
1.6 mL，所述三羟甲基氨基甲烷的使用量浓度为质量体积比0.2
‑
2%，所述蔗糖的使用浓度为质量体积比0.5
‑
2%，所述N,N,N',N'
‑
四甲基二乙胺的使用浓度为体积比0.3
‑
2%, 所述凝胶液的PH值为6.8
±
0.2，所述Proclin300的浓度为体积比0.05
‰‑5‰
；优选的，所述试剂盒还包括电泳缓冲体系；优选的，所述试剂盒还包括质控品，更优选的，所述质控品包括质控品1和质控品2。
[0011]进一步地，所述检测试剂盒应用上述的脂蛋白亚分型定量检测方法。
[0012]根据本专利技术的一个方面，提供上述的检测试剂盒的制备方法，包括下列步骤：步骤（1），配液，将丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷、N,N,N',N'
‑
四甲基二乙胺过硫酸铵、蔗糖、Proclin300按照实际的使用浓度，加入到纯净水或去离子水中，充分搅拌均匀后，调节PH值，加入1.2
‑
1.6 ml到玻璃柱内，加入水或者乙醇进行压胶，时间不低于40分钟，成胶后得到聚丙烯酰胺含量为3.4
‑
3.8 wt%的凝胶柱，即为下层凝胶柱；步骤（2），配液，将丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷、N,N,N',N'
‑
四甲基二乙胺、过硫酸铵、蔗糖、Proclin300按照实际的使用浓度，加入到纯净水或去离子水中，充分搅拌均匀后，调节PH值，加入140
‑
200μL到玻璃柱内，加入水或者乙醇进行压胶，时间不低于40分钟，成胶后得到聚丙烯酰胺含量为2.7
‑
3.0wt%的凝胶柱，即为上层凝胶柱；步骤（3），将步骤（1）和（2）所得的凝胶柱放入到广口塑料瓶中，加入储存缓冲液；步骤（4），配液，取浓度为质量体积比0.1
‑
1.5%的上述的染料苏丹黑B2加入到选自丙酮、丙二醇、异丙醇和乙二醇组合中的一种中，以所述加入的丙酮或丙二醇或异丙醇或乙二醇的总体积计，其中含有的所述丙酮或丙二醇或异丙醇或乙二醇的体积百分比范围为大于等于98.0%并小于等于99.3％；在其中加入本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种苏丹黑B2染料，其特征在于，所述苏丹黑B2由苏丹黑B的结构改造获得，其具有如下所示的结构： 。2.一种苏丹黑B2染色液，其特征在于，包含权利要求1所述的苏丹黑B2染料。3.一种权利要求2所述染色液的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：取浓度为质量体积比0.1
‑
1.5%的权利要求1所述的苏丹黑B2染料，将所述苏丹黑B2加入到选自丙酮、丙二醇、异丙醇和乙二醇组合中的一种，以所述加入的丙酮或丙二醇或异丙醇或乙二醇的总体积计，其中含有的所述丙酮或丙二醇或异丙醇或乙二醇的体积百分比范围为大于等于98.0%并小于等于99.3％；在其中加入体积比为0.5
‑
1.5%的N,N
‑
二甲基甲酰胺（N,N
‑
Dimethylformamide, DMF）或1
‑
甲基
‑
2吡咯烷酮；再在其中加入辛基酚类聚氧乙烯醚表面活性剂（Triton X
‑
405）、聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X
‑
100）、吐温三者中的一种作为表面活性剂，所述表面活性剂的使用体积比为0.05
‑
0.5%；将上述混合溶液充分混合后，避光保存，即获得所述染色液。4.一种脂蛋白亚分型定量检测方法，其特征在于，所述脂蛋白亚分型包括极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein, VLDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL）及其1
‑
7亚分型、高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL），所述检测方法按照下列步骤进行：S01：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对血清或血浆中的脂蛋白进行分离；S02：将所述血清或血浆中的脂蛋白使用权利要求1所述染料或权利要求2所述的染色液或权利要求3所述制备方法制得的染色液染色后，取混合液30微升加入到凝胶柱上；S03：在电泳槽中的电场作用下，经过聚丙烯酰胺凝胶分子筛效应，脂蛋白亚分型按照脂蛋白颗粒大小依次被分离开来；S04：所述脂蛋白亚分型电泳分离的结果经电泳装置的扫描系统得到脂蛋白电泳条带的光密度图谱；S05：将所述光密度图谱通过分析软件转换为峰型图谱，并进行所述峰型图谱中各峰型面积比例分析；S06：根据检测到的总胆固醇含量和所述各峰型面积的比例得到脂蛋白亚分型各组分
的准确含量。5.一种检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的苏丹黑B2染料或权利要求2所述的染色液或权利要求3所述制备方法制得的染色液。6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括凝胶柱，所述凝胶柱分为上下两层，其中，上层凝胶柱的浓度为2.7
‑
3.0 wt%聚丙烯酰胺，下层凝胶柱的浓度为3.4
‑
3.8 wt%聚丙烯酰胺，其中，所述聚丙烯酰胺包含丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺，所配制的凝胶液的主要组成成分为：丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷（Trizmabase）、 N,N,N',N'
‑
四甲基二乙胺（TEMED）、过硫酸铵及蔗糖、Proclin300。7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述上层凝胶柱的使用体积为140
‑
200μL，所述下层凝胶柱的使用体积为1.2
‑
1.6 mL，所述三羟甲基氨基甲烷的使用量浓度为质量体积比0.2
‑
2%，所述蔗糖的使用浓度为质量体积比0.5
‑
2%，所述N,N,N',N'
‑
四甲基二乙胺的使用浓度为体积比0.3
‑
2%, 所述凝胶液的PH值为6.8
±
0.2，所述Proclin300的浓度为体积比0.05
‰‑5‰
。8.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括电泳缓冲体系。9.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括质控品。10.根据权利要求5
‑
9任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒应用权利要求4所述的脂蛋白亚分型定量检测方法。11.一种权利要求5
‑
10任一项所述的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：步骤（1），配液，将丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷、N,N,N',N'
‑
四甲基二乙胺过硫酸铵、蔗糖、Proclin300按照实际的使用浓度，加入到纯净水或去离子水中，充分搅拌均匀后，调节PH值，加入1.2
‑
1.6 mL到玻璃柱内，加...

【专利技术属性】
技术研发人员：佘鹏，牛钦，张媛媛，
申请(专利权)人：上海淘源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：