一种新冠病毒SARS-CoV-2抗原的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种新冠病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
一种新冠病毒SARS
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CoV
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2抗原的检测方法


本专利技术涉及生物
，具体涉及一种基于核酸适配体识别的表面增强拉曼光谱检测新冠病毒SARS
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CoV
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2抗原的方法。

技术介绍

新型冠状肺炎病毒SARS
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2的检测方法中的病原学及血清学检查主要有核酸检测、抗体检测、抗原检测。其中，核酸检测是SARS
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2检测的“金标准”，但存在耗时较长、无法现场检测的缺点。而抗体检测则需要一定的窗口期，难以实现感染者的早期诊断。现有的检测方法例如：CN202011431411.8公开了一种检测新冠病毒及其突变体的试剂盒，其特征在于，包括如下部分：(1)前底物A链和前底物B链；(2)Cas 13a蛋白；(3)crRNA或其DNA模板；(4)核酸连接酶；(5)点亮型RNA适体或其DNA模板；(6)体外转录试剂。CN202110353115.9公开了采用Pt
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Pd合金纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒及其检测方法和应用。所述的检测新冠病毒的试剂盒，含有新冠病毒SARS
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2中和抗体Pt
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Pd合金纳米颗粒试纸条。所述新冠病毒SARS
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2中和抗体Pt
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Pd合金纳米颗粒试纸条的制备方法为用合金纳米颗粒标记新冠病毒SARS
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2抗原作为捕获抗体纳米标记物，再将纯化的A型表达抗原及其抗体包被在纤维素膜上，分别作为检测线T线和质控线C线，经条件优化，建立新冠病毒中和抗体Pt
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Pd合金纳米颗粒试纸条。相比核酸、抗体检测，新冠病毒SARS
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2抗原检测能够在新冠病毒感染的早期(1
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10天)进行检测，并且成本更低，速度更快，有望在15
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20分钟内获得结果。因此，抗原检测更适合于早期大规模筛查，能够与核酸检测、抗体检测、CT检测相互印证，成为新冠肺炎排查的重要手段。并且新型冠状肺炎病毒SARS
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2不断在突变，这给检测带来了更大的压力。但现有的抗原检测试剂盒存在检测灵敏度不够导致假阴性问题，急需一种更快速、检测灵敏度更佳并且能够检测突变后病毒的抗原检测手段。

技术实现思路

本专利技术的主要目的，在于提供一种基于核酸适配体识别的表面增强拉曼光谱检测新冠病毒SARS
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2抗原的方法。本专利技术利用生物素
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链霉亲和素间的高亲和力，将核酸适配体SAptamer 1修饰在磁性微球上形成功能化磁珠，实现对新冠病毒SARS
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2S蛋白的靶向捕获、分离和富集，再通过修饰了巯基的核酸适配体S Aptamer 2特异性识别病毒，结合具备拉曼信号表达的金属纳米粒子，形成夹层(三明治式)结构，利用便携式拉曼光谱仪，在5分钟内实现对新冠病毒SARS
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2抗原的快速检测。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的，包括以下步骤：一种新冠病毒SARS
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2抗原的检测方法，包括如下步骤：S1：将新冠病毒抗原的第一核酸适配体或核酸适配体组合通过生物素
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链霉亲和
素相互作用修饰在磁性微球上，形成免疫磁珠捕获纳米粒子；S2：制备金属纳米溶胶；S3：将步骤S2制备的金属纳米溶胶与拉曼报告分子混合，再与巯基修饰的新冠病毒抗原的第二核酸适配体或核酸适配体组合混合；并封闭活性位点，获得免疫金属信号纳米粒子；S4：将步骤S1制备得到的免疫磁珠捕获纳米粒子与待测样本混合，再与步骤S3的免疫金属信号纳米粒子混合，获得三明治结构；步骤S5：将获得的三明治夹心结构通过拉曼光谱仪进行拉曼检测，得到新冠病毒抗原的拉曼光谱结果。
[0014]本专利技术的有益效果：本专利技术方法以适配体作为特异性识别元件，特异性结合SARS
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2抗原，不需要进行核酸提取、扩增，相比于免疫分析法中使用抗体作为识别元件，一方面能够稳定纳米材料在检测体系中的分散状态；另一方面能够高特异性和高亲和力地识别目标蛋白，并且稳定性好，制备成本低，在很大程度上提高了检测的准确性，检测速度更快。
附图说明
下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。图1是本专利技术检测原理示意图，免疫磁珠捕获纳米粒子与SARS
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2S蛋白发生特异性免疫反应，通过与免疫金信号纳米粒子孵化，构筑成夹层(三明治式)结构。然后进行快速磁分离，通过便携式拉曼光谱仪器，实现快速新冠病毒检出；图2是免疫金信号纳米粒子的紫外吸收光谱图；图3是夹层(三明治式)结构SEM图；图4是不同SARS
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2S蛋白浓度的表面增强拉曼光谱图；图5是检测SARS
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2假病毒的表面增强拉曼光谱图；图6是检测唾液中不同SARS
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2假病毒浓度的表面增强拉曼光谱图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本专利技术，但不用于限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。本专利技术的检测方法利用新冠病毒SARS
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2S蛋白核酸适配体特异性识别的原理(优先采用SARS
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2S蛋白核酸适配体，但不仅限于S蛋白核酸适体，亦可用SARS
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2其他抗原组分的核酸适体)，通过新冠病毒SARS
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2抗原免疫磁珠捕获纳米粒子与S蛋白(或其他抗原组分)发生特异性识别之后，与修饰SARS
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2抗原核酸适体的免疫金属信号纳米粒子孵育，形成三明治夹心结构。所述的新冠病毒SARS
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2抗原免疫磁珠捕获纳米粒子具有磁性并修饰能特异性识别新冠病毒SARS
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2抗原的适配体或适配体组合(优先采用SARS
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2S蛋白核酸适配体，但不仅限于S蛋白核酸适体，亦可用SARS
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2其他抗原组分的核酸适体)；所述的免疫金信号纳米粒子具备拉曼信号表达和SARS
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2抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新冠病毒SARS
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CoV
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2抗原的检测方法，包括如下步骤：S1：将新冠病毒抗原的第一核酸适配体或核酸适配体组合通过生物素
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链霉亲和素相互作用修饰在磁性微球上，形成免疫磁珠捕获纳米粒子；S2：制备金属纳米溶胶；S3：将步骤S2制备的金属纳米溶胶与拉曼报告分子混合，再与巯基修饰的新冠病毒抗原的第二核酸适配体或核酸适配体组合混合；并封闭活性位点，获得免疫金属信号纳米粒子；S4：将步骤S1制备得到的免疫磁珠捕获纳米粒子与待测样本混合，再与步骤S3的免疫金属信号纳米粒子混合，获得三明治结构；步骤S5：将获得的三明治夹心结构通过拉曼光谱仪进行拉曼检测，得到新冠病毒抗原的拉曼光谱结果。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的核酸适配体为新冠病毒S蛋白的核酸适配体。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤S1包括：取修饰了链霉亲和素的磁珠，加入缓冲液洗涤；将上述磁珠在缓冲液重悬，加入生物素化适配体或生物素化适配体组合，在室温下孵育，并用缓冲液洗涤，重悬于PBS溶液中，加入封闭剂，封闭磁珠表面的剩余结合位点，磁分离，并用PBS溶液洗涤，最后重新分散在PBS溶液中，制得所述的免疫磁珠捕获纳米粒子。4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，磁珠的粒径为0.5
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5微米。5.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，缓冲液为B&W洗涤缓冲液，其用1
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50mM pH 4
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8的Tris
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HCl、1
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【专利技术属性】
技术研发人员：李剑锋，关鹏程，宋彦龄，张月皎，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：