膜结合Flt-1诱饵及其用途制造技术

本发明专利技术涉及Flt

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】膜结合Flt
‑
1诱饵及其用途


[0001]本专利技术涉及医药领域、细胞生物学领域、分子生物学领域和遗传学领域。本专利技术涉及医药领域。

技术介绍

[0002]包括湿性年龄相关性黄斑变性(nAMD)以及癌症(例如，胶质母细胞瘤和结肠癌)的以异常新血管形成为特征的疾病可以通过抑制血管内皮生长因子(VEGF)的疗法进行治疗。
[0003]这些疗法包括基于抗体的抑制(Avastin和Lucentis)、适体(Macugen)和基于VEGF受体Flt
‑
1的可溶性诱饵(Eyelea)。
[0004]用于解决异常新血管形成的VEGF抗体疗法的全球市场巨大且竞争激烈，因此人们对解决这一问题相当感兴趣。例如，AMD影响0.4％的50岁至60岁的人群、0.7％的60岁至70岁的人群、2.3％的70岁至80岁的人群以及12％的超过80岁的人群，其中高达20％患有适用VEGF抗体的湿性AMD，使得该市场对发达国家的老龄人口极其有利可图。Avastin，一种VEGF单链抗体，还用于结肠癌、肺癌、胶质母细胞瘤和肾细胞癌。
[0005]目前基于蛋白质和抗体的疗法已被证明对稳定和改善湿性AMD的视力和抑制癌症增殖是有效的。
[0006]然而，目前的治疗方法存在许多问题。基于蛋白质和抗体的疗法的治疗剂量学表明，需要在多年内频繁注射VEGF抗体剂，以维持视力和控制疾病进程。

技术实现思路

[0007]目前的治疗方法因为需要在很长一段时间内频繁地给药，带来了极大的负担。
[0008]本专利技术人公开了缺少C末端胞内信号传导结构域的膜结合Flt
‑
1的核苷酸序列，该核苷酸序列对在哺乳动物细胞中表达进行了密码子优化。
[0009]本专利技术人还公开了作为内含子嵌套在上述Flt
‑
1的编码区内的靶向VEGF的mirtron(RNAi效应子)的核苷酸序列。
[0010]本专利技术人描述了一种组合治疗物，包括(1)膜结合Flt
‑
1诱饵，其胞内信号传导结构域被去除；和(2)靶向VEGF的mirtron，使用AAV2或AAV
‑
DJ作为遗传构建体递送。
[0011]根据本专利技术的第一方面，本专利技术人提供了一种Flt
‑
1诱饵。所述Flt
‑
1诱饵可以包含Flt
‑
1的VEGF结合结构域。所述Flt
‑
1诱饵可以包含膜锚定结构域。所述Flt
‑
1诱饵可以基本上不包含胞内结构域。
[0012]所述Flt
‑
1诱饵可以是不可溶的。
[0013]所述Flt
‑
1诱饵可以不能进行信号转导。所述Flt
‑
1诱饵可以不能通过SHC
‑
GRB2通路、PI3K通路或PLC通路进行信号传导。
[0014]所述Flt
‑
1诱饵可以缺少胞内结构域。所述Flt
‑
1诱饵可以缺少Flt
‑
1的胞内信号传导结构域。所述Flt
‑
1诱饵可以缺少GenBank登录号：NP_002010.2的第819位至第1338位的氨基酸。
Molecular Biology，ch.9，13，and 16，John Wiley&Sons，New York，N.Y.)；B.Roe，J.Crabtree，and A.Kahn，1996，DNA Isolation and Sequencing：Essential Techniques，John Wiley&Sons；J.M.Polak and James O
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‑
544
‑
7)；Antibodies：A Laboratory Manual by Ed Harlow(Editor)，David Lane(Editor)(1988，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ISBN0
‑
87969
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314
‑
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8247
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0562
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9)；and Lab Ref：A Handbook of Recipes，Reagents，and Other Reference Tools for Use at the Bench，Edited Jane Roskams and Linda Rodgers，2002，Cold Spring Harbor Laboratory，ISBN 0
‑
87969
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630
‑
3.
[0031]这些通用文本中的每一个都通过引用纳入本文
附图说明
[0032]图1的示意图显示了Flt1、Vegf
‑
Trap、coFlt1和sFlt1的差异。
[0033]图2的示意图显示了coFlt1和coFlt1
‑
Mirt对VEGF隔离和VEGF抑制有效。
[0034]图2A是在图2B至图2E中使用的基因结构的概念图。
[0035]图2B的示意图显示了转染2天后收获的由pcoFlt1、pcoFlt1
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Mirt和pcoFlt1转染的HEK293细胞的细胞裂解产物的HA抗体和His抗体的蛋白质印迹。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种Flt
‑
1诱饵，包含：(A)Flt
‑
1的VEGF结合结构域；以及(B)膜锚定结构域；其中所述Flt
‑
1诱饵基本上不包含胞内结构域。2.根据权利要求1所述的Flt
‑
1诱饵，其不可溶。3.根据权利要求1或2所述的Flt
‑
1诱饵，其中所述Flt
‑
1诱饵不能进行信号转导，例如通过SHC
‑
GRB2通路、PI3K通路或PLC通路。4.根据权利要求1、2或3所述的Flt
‑
1诱饵，其中所述Flt
‑
1诱饵缺少胞内结构域，例如Flt
‑
1的胞内信号传导结构域，优选为GenBank登录号：NP_002010.2的第819位至第1338位的氨基酸。5.根据前述权利要求中任一项所述的Flt
‑
1诱饵，其中所述Flt
‑
1的VEGF结合结构域包含这样的序列，即该序列包含GenBank登录号：NP_002010.2的第27位至第250位的氨基酸或能够结合VEGF的所述序列的片段、同源物、变体或衍生物，优选VEGF
‑
A(NP_001020537.2)或VEGF
‑
B(NP_001230662.1)。6.根据前述权利要求中任一项所述的Flt
‑
1诱饵，其中所述膜锚定结构域包含Flt1的跨膜结构域，所述Flt1的跨膜结构域包含GenBank登录号：NP_002010.2的第759位至第780位氨基酸或能够将Flt
‑
1诱饵锚定至细胞膜的所述Flt1的跨膜结构域的片段、同源物、变体或衍生物。7.根据前述权利要求中任一项所述的Flt
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：萧逸颀，刘明利，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：