包含含有谷氨酰胺的轻链C末端延伸的抗体、其缀合物以及方法和用途技术

抗体在其轻链的C末端处具有含有谷氨酰胺的延伸，使其适于经由转谷氨酰胺酶介导的转酰胺基作用进行缀合。胺基作用进行缀合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含含有谷氨酰胺的轻链C末端延伸的抗体、其缀合物以及方法和用途
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2018年11月30日提交的美国临时申请序列号62/773,708的35U.S.C.
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119(e)下的权益；将其公开内容通过引用并入本文。序列表
[0002]通过引用整体并入本文的是命名为“191017_SEQT_13142WO PCT_YC.txt”的序列表，所述序列表包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:40，其包括本文公开的核酸和/或氨基酸序列。所述序列表经由EFS
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Web以ASCII文本形式随同提交，并且因此构成了其纸质可读形式和计算机可读形式。所述序列表最初是在2018年10月26日使用PatentIn 3.5创建的，大小约为14K B。

技术介绍

[0003]本公开文本涉及可通过酶转谷氨酰胺酶缀合的经修饰的抗体和由此类抗体制成的缀合物。
[0004]引起当前强烈兴趣的一种类型的生物制剂是其中抗体与配偶体分子共价连接的生物制剂(“缀合物”或“免疫缀合物”)。因此，缀合物包含三种组分：(1)抗体、(2)配偶体分子、和(3)共价连接前两种组分的接头。
[0005]配偶体分子可以是治疗剂，如抗癌药物、佐剂、另一种蛋白质、或放射性同位素。抗体是其抗原由靶细胞或组织表达的抗体。抗体用于通过其与抗原的结合将缀合物递送至靶标。一旦到达那里，共价连接的切割或抗体的降解导致治疗剂在目标位置处的释放。相反，当缀合物在血液系统中循环时，治疗剂由于其与抗体的共价键而保持无活性，从而降低了副作用的风险。关于在抗癌治疗中的缀合物，参见Gerber等人2013。
[0006]作为治疗剂的替代，所述配偶体分子可以是用于诊断、定位疾病部位或监测医学状况的测定剂。在此类情况下，所述测定剂可以是例如生物素、荧光标记、放射性标记或氘代聚合物。Smith等人2019披露了用于MRI成像的包含氘代聚合物的缀合物。在此类情况下，在靶位点处的接头的切割不是必需的，并且实际上可能是不希望的。对于此类用途，可以将接头设计为不可切割的类型。
[0007]在制备缀合物中的关键步骤是共价连接步骤，也称为缀合步骤。已经披露了用于实现缀合的许多方法。最近引起人们极大兴趣的方法是由酶转谷氨酰胺酶(EC 2.3.2.13)介导的缀合。
[0008]已知许多转谷氨酰胺酶变体，其由不同的生物体自然产生或由生物工程制造。食品工业中常用于组织化(texturing)蛋白质的转谷氨酰胺酶变体是通过发酵或重组表达获得的茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)转谷氨酰胺酶。在本文中，通常使用术语“转谷氨酰胺酶”，除非指明特定的类型或来源。
[0009]转谷氨酰胺酶在谷氨酰胺(胺受体，或相对地，酰基供体)的甲酰胺侧链与赖氨酸(胺供体，或相对地，酰基受体)的ε
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氨基基团之间形成酰胺键。就特异性而言
2016、Bregeon等人2016、Bregeon等人2017、Dennler等人2014、Innate Pharma 2013、Lin等人2006、Mero等人2009、Mindt等人2008、Sato 2002、Sato等人2001、Schibli等人2007以及Sugimura等人2007。
[0016]还已知为了经由迈克尔(Michael)加成与马来酰亚胺基团缀合的目的，将含有半胱氨酸的末端延伸附接到抗体上。Liu等人2014披露了将此类延伸附接到重链的C末端。Babcook等人2017披露了将此类延伸附接到轻链的C末端。
[0017]本说明书的结尾处列出了通过第一作者或专利技术人和年份对本文中引用的文献的完全引用。

技术实现思路

[0018]缀合位点的位置可以影响缀合物的稳定性和药代动力学。Strop等人2013。因此，希望提供可替代的缀合位点和缀合物结构，以使可用于开发生物制品的选择多样化。
[0019]本说明书公开了抗体，所述抗体在轻链上具有含有谷氨酰胺的C末端延伸以用于与转谷氨酰胺酶缀合。在一个实施方案中，提供了一种全长抗体，所述抗体在其轻链的C末端(羧基末端)上具有含有谷氨酰胺的延伸，所述含有谷氨酰胺的延伸包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、NO:2、NO:3、NO:4、NO:5、NO:6、NO:7、NO:8、NO:9、NO:10、NO:11、NO:12、NO:13、NO:14、NO:15、NO:16、NO:17、NO:18、NO:19、NO:20、NO:21、NO:22、NO:23、NO:24、NO:25、NO:26、NO:29、NO:30、NO:31、NO:32、NO:33、NO:34、NO:35、NO:36、NO:37、NO:38、NO:39、和NO:40。
[0020]在另一方面，本说明书提供了一种式(IV)的缀合物其中Ab是一种全长抗体，所述全长抗体在其轻链的C末端(羧基末端)上具有含有谷氨酰胺的延伸，所述含有谷氨酰胺的延伸包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、NO:2、NO:3、NO:4、NO:5、NO:6、NO:7、NO:8、NO:9、NO:10、NO:11、NO:12、NO:13、NO:14、NO:15、NO:16、NO:17、NO:18、NO:19、NO:20、NO:21、NO:22、NO:23、NO:24、NO:25、NO:26、NO:29、NO:30、NO:31、NO:32、NO:33、NO:34、NO:35、NO:36、NO:37、NO:38、NO:39、和NO:40；L是经由与含有谷氨酰胺的延伸中的谷氨酰胺的酰胺键而键合至Ab的接头部分；并且D选自蛋白质、放射性同位素、测定剂、和治疗剂。
[0021]在另一方面，本说明书提供了一种制造抗体缀合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在转谷氨酰胺酶的存在下，将全长抗体与胺供体化合物混合，所述全长抗体在其轻链的C末端(羧基末端)上具有含有谷氨酰胺的延伸，所述含有谷氨酰胺的延伸包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、NO:2、NO:3、NO:4、NO:5、NO:6、NO:7、NO:8、NO:9、NO:10、NO:11、NO:12、NO:13、NO:14、NO:15、NO:16、NO:17、NO:18、NO:19、NO:20、NO:21、NO:22、NO:
23、NO:24、NO:25、NO:26、NO:29、NO:30、NO:31、NO:32、NO:33、NO:34、NO:35、NO:36、NO:37、NO:38、NO:39、和NO:40，所述胺供体化合物包含伯胺和选自以下的部分：蛋白质、放射性同位素、测定剂、和治疗剂；以及(b)允许所述转谷氨酰胺酶催化在所述含有谷氨酰胺的延伸的谷氨酰胺的侧链甲酰胺与所述胺供体化合物的伯胺之间形成酰胺键，从而制造所述抗体缀合物。
[0022]在另一方面，本说明书提供了一种制造抗体缀合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在转谷氨酰胺酶的存在下，将全长抗体与第本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种全长抗体，所述全长抗体在其轻链的C末端上具有含有谷氨酰胺的延伸，所述含有谷氨酰胺的延伸包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、NO:2、NO:3、NO:4、NO:5、NO:6、NO:7、NO:8、NO:9、NO:10、NO:11、NO:12、NO:13、NO:14、NO:15、NO:16、NO:17、NO:18、NO:19、NO:20、NO:21、NO:22、NO:23、NO:24、NO:25、NO:26、NO:29、NO:30、NO:31、NO:32、NO:33、NO:34、NO:35、NO:36、NO:37、NO:38、NO:39、和NO:40。2.根据权利要求1所述的全长抗体，其中所述延伸具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、NO:2、NO:3、NO:4、NO:5、和NO:6。3.根据权利要求1所述的全长抗体，其中所述延伸具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、NO:8、NO:9、NO:10、NO:11、和NO:12。4.根据权利要求1所述的全长抗体，其中所述延伸具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:14、NO:15、NO:16、NO:17、NO:18和NO:19。5.根据权利要求1所述的全长抗体，其中所述延伸具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:20、NO:21、NO:22、NO:23、NO:24、和NO:25。6.根据权利要求1所述的全长抗体，其中所述含有谷氨酰胺的延伸在谷氨酰胺的N末端侧上具有缬氨酸
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亮氨酸(VL)。7.一种式(IV)的缀合物其中Ab是一种全长抗体，所述全长抗体在其轻链的C末端(羧基末端)上具有含有谷氨酰胺的延伸，所述含有谷氨酰胺的延伸包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、NO:2、NO:3、NO:4、NO:5、NO:6、NO:7、NO:8、NO:9、NO:10、NO:11、NO:12、NO:13、NO:14、NO:15、NO:16、NO:17、NO:18、NO:19、NO:20、NO:21、NO:22、NO:23、NO:24、NO:25、NO:26、NO:29、NO:30、NO:31、NO:32、NO:33、NO:34、NO:35、NO:36、NO:37、NO:38、NO:39、和NO:40；L是经由与含有谷氨酰胺的延伸中的谷氨酰胺的酰胺键而键合至Ab的接头部分；并且D选自蛋白质、放射性同位素、测定剂、和治疗剂。8.根据权利要求7所述的缀合物，其中D是细胞毒性药物。9.根据权利要求7所述的缀合物，其中D是TLR3、TLR7、TLR9、STING、NLRP3、或RIG
‑
I激动剂t。10.根据权利要求7所述的缀合物，其中L是
‑
(CH2)2‑6‑
。11.根据权利要求7所述的缀合物，其中L是其中T是自我牺牲基团；t是0或1；
AA
a
和每个AA
b
独立地选自丙氨酸、β
‑
丙氨酸、γ
‑
氨基丁酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、γ
‑
羧基谷氨酸、瓜氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、和缬氨酸；p是1、2、3、或4；q是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10；并且r是1、2、3、4、或5。12.一种制造抗体缀合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在转谷氨酰胺酶的存在下，将全长抗体与胺供体化合物混合，所述全长抗体在其轻链的C末端(羧基末端)上具有含有谷氨酰胺的延伸，所述含有谷氨酰胺的延伸包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、NO:2、NO:3、NO:4、NO:5、NO:6、NO:7、NO:8、NO:9、NO:10、NO:11、NO:12、NO:13、NO:14、NO:15、NO:16、NO:17、NO:18、NO:19、NO:20、NO:21、NO:22、NO:23、NO:24、NO:25、NO:26、NO:29、NO:30、NO:31、NO:32、NO:33、NO:34、NO:35、NO:36、NO:37、NO:38、NO:39、和NO:40，所述胺供体化合物包含伯胺和选自以下的部分：蛋白质、放射性同位素、测定剂、和治疗剂；以及(b)允许所述转谷氨酰胺酶催化在所述含有谷氨酰胺的延伸的谷氨酰胺的侧链甲酰胺与所述胺供体化合物的伯胺之间形成酰胺键，从而制造所述抗体缀合物。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述胺供体化合物具有结构H2N
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L
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D其中L是接头部分并...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：