一种调控番茄侧枝的基因及方法技术

一种调控番茄侧枝的基因及方法，所述基因的核苷酸序列如Seq No.1所示。本发明专利技术得到的转基因番茄与未转化的番茄相比，通过对植株分枝、叶夹角、花序形态观察，DCD1基因编辑番茄植株具有较少的分支、叶夹角也较野生型更小，花序更加紧凑；侧枝数目平均减少82.14%，叶夹角平均减少35%，花枝长度平均减少67%；所得的转基因番茄，具有适合密植和机械化收割的特性。具有适合密植和机械化收割的特性。具有适合密植和机械化收割的特性。

【技术实现步骤摘要】
一种调控番茄侧枝的基因及方法


[0001]本专利技术属于生物工程
，涉及一种调控番茄侧枝的基因及方法。

技术介绍

[0002]番茄(学名：Solanum lycopersicum)，即西红柿，是管状花目、茄科、番茄属的一种一年生或多年生草本植物。番茄原产南美洲，中国南北方广泛栽培。番茄的果实营养丰富，具特殊风味。
[0003]在番茄育种过程中，现代番茄商业化的兴起，主要是由于番茄植株形态的改变，通过培育出多种适合不同种植条件的番茄株型，以满足商业化需要。随着科技的发展，利用转基因技术，实现植物株型的改变，已经成为创制“理想株型”的重要方法。
[0004]CRISPR
‑
Cas9基因编辑技术，是对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，这项技术目前已经广泛的用于动物、植物和微生物的基因编辑领域。CRISPR/Cas9系统由两部分构成：成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(Cas)。该系统发挥作用需要sgRNA(small guide RNA)和基因序列上的PAM结构(5
′‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种调控番茄侧枝的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序列如Seq No.1所示。2.一种调控番茄侧枝的方法，其特征在于：包括下列步骤：步骤1：将接头正向引物F1、接头反向引物R1、接头正向引物F2、接头反向引物R2分别用无菌ddH2O溶解稀释成10μM母液，各取10 μL加入到80 μL无菌ddH2O中，混合稀释到1μM，然后置于PCR仪中，在85
‑
90℃条件下处理20
‑
40s，然后在室温条件下冷却完成靶点引物退火，得到靶点引物退火产物；接头正向引物F1：5'
‑
GTCAGAAGCGAAGCCCATGGAGG
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3'；接头反向引物R1：5'
‑
AAACCCTCCATGGGCTTCGCTTC
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3'；接头正向引物F2：5'
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GTCACCAGCAACCGTACCCCCAC
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3'；接头反向引物R2：5'
‑
AAACGTGGGGGTACGGTTGCTGG
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3'；步骤2：将1μL的pYLgRNA
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AtU#质粒混合液、0.5μL步骤1获得的靶点引物退火产物、35U的T4 DNA 连接酶、0.5μL的10
×
T4 DNA连接酶反应液和5U的BsaI核酸内切酶混匀，用ddH2O补至10μL体系；PCR条件：37℃，5min；20℃，5min，PCR仪反应5个循环，使靶点引物与gRNA表达盒连接，扩增gRNA表达盒；步骤3：以1μL步骤2反应产物为模板，加入0.2 μM的引物U
‑
F和0.2 μM的接头反向引物R1与接头反向引物R2组成的混合物，1μL的dNTPs，1μL的高保真DNA聚合酶，10μL的5
×
高保真DNA聚合酶反应液和33μL dd H2O，获得第一扩增反应体系，PCR扩增后得到第一扩增产物；以1μL步骤2反应产物为模板，加入0.2 μM的引物gRNA
‑
R和0.2 μM的接头正向引物F1或接头正向引物F2组成的混合物，1μL的dNTPs，1μL 的高保真DNA聚合酶，10μL的5
×
高保真DNA聚合酶反应液和33μL dd H2O，获得第二扩增反应体系，PCR扩增后得到第二扩增产物；引物U
‑
F：5'
‑
CTCCGTTTTACCTGTGGAATCG
‑
3'；gRNA
‑
R：5'
‑ꢀ
CGGAGGAAAATTCCATCCAC
ꢀ‑
3'；步骤4：将位置特异引物B1
’
与位置特异引物B2混合得到PT1特异引物工作液；将位置特异引物B2
’
与位置特异引物BL混合得到PT2L特异引物工作液；将第一扩增产物和第二扩增产物分别稀释，然后各取1μL，混合后得到2μL模板；2μL模板、3μL 10
×
PT1特异引物工作液、0.6μL dNTPs、0.6μL高保真DNA聚合酶、6μL 5
×
高保真DNA聚合酶和17.8μL dd H2O，获得第三扩增反应体系，PCR扩增后得到第三扩增产物；2μL模板；3μL 10
×
PT2L特异引物工作液、0.6μL dNTPs、0.6μL高保真DNA聚合酶、6μL 5
×
高保真DNA聚合酶和17.8μL dd H2O，获得第四扩增反应体系，PCR扩增后得到第四扩增产物；位置特异引物B1
’
：5'
‑
TTCAGAGGTCTCTCTCGACTAGTGGAATCGG...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡康棣，张华，姚改芳，孙红叶，孙忱，彭湘君，赵玉琪，宋慧慧，李立霞，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：