CTV三肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种CTV三肽，其氨基酸序列为Cys

【技术实现步骤摘要】
CTV三肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及生物活性肽领域，特别涉及CTV三肽及其应用。

技术介绍

[0002]炎症是机体对外界刺激的一种防御反应，当炎症发生时，促炎介质(如肿瘤坏死因子
ꢀ‑
a(TNF
‑
a)、白细胞介素(IL)
‑
1、IL
‑
6、IL
‑
8和干扰素
‑
g(IFN
‑
g))在感染或组织损伤部位募集和激活。这些介质可以通过与不同细胞类型中的各种细胞和亚细胞成分相互作用来放大炎症反应。然而，持续的炎症反应使得促炎介质过量导致组织损伤和免疫功能丧失。炎症反应分为急性炎症和慢性炎症。急性炎症过程短，愈合快(如局部组织损伤)。慢性炎症过程长导致机体免疫紊乱。研究表明，慢性炎症反应通常与疾病的发病机制有关，如2型糖尿病、炎症性肠病(IBD)、关节炎、动脉粥样硬化和其他心血管疾病((Serhan&Savill,2005；Wang et al.,2011)。根据流行病学和临床研究，全世界15
‑
20％的恶性肿瘤是由慢性炎症引起的，在发达国家和发展中国家，它已经成为一种公共威胁((Kuper,Adami,&Trichopoulos,2000)。然而，目前大多数药物干预不足以控制慢性炎症反应，长期服用抗炎药物会伴随严重的副作用(Carter et al., 2014；Roubille,Martel
‑
Pelletier,Davy,Haraoui,&Pelletier,2013)，如心脑血管疾病、心肌梗等疾病与抗炎药物在不同水平上的使用有关。虽然慢性炎症性疾病致病因素复杂，但导致病理异常的炎症途径是相同的，因此这些炎症途径可以作为开发与慢性炎症反应相关疾病的治疗和预防治疗的潜在靶点(Majumder,Mine,&Wu,2016；VendraminiCosta&Carvalho,2012)。
[0003]NF
‑
κB通路是负责维持防御系统免受有害刺激的的主要信号通路。然而，当这些信号变得过度和不受控制时，就会导致慢性炎症。NF
‑
κB信号通路涉及多种功能，如细胞因子(IL
‑
1b、 IL
‑
6、IL
‑
8和TNF
‑
a)的产生、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶
‑
2(COX
‑
2)表达的调节。当机体受到内源性或外源性炎症(如脂多糖或肿瘤坏死因子)刺激时，IKK复合物(IKKα和 IKKβ)介导IκB
‑
α磷酸化，导致p50
‑
p65异源二聚体可以自由迁移到细胞核中，并激活与炎症、生长控制、细胞粘附和凋亡保护有关的各种基因的转录。
[0004]生物活性肽是一类对人体功能有积极影响，最终影响人体健康的特定蛋白片段。据报道， V PP、IPP、TPFP、AVPYPGA、YP等能够抑制血管紧张素转化降低血压。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是解决现有技术的不足，提供一种CTV三肽，其氨基酸序列为Cys
‑
Thr
‑
Val，分子量为321Da。该CTV三肽通过固相合成法获得，能够有效预防并缓解炎症性肠病，可以应用在制备预防和/或缓解炎症性肠病的食品或药物中。
[0006]在本专利技术中，申请人公开了一种抗炎三肽的氨基酸序列，并检测了其在体外炎症模型中表现的抗炎效果，结果表明该三肽在体外模型中通过抑制NF
‑
κB中p
‑
IκB
‑
α和p
‑
p65的表达发挥抗炎作用。
[0007]本专利技术的另一目的是提供一种药物组合物，其活性成分包括CTV三肽，用于预防和/或缓解炎症性肠病。该药物组合物还可以包括溶剂或可药用辅助剂。
[0008]本专利技术采用TNF
‑
α诱导人肠上皮细胞(HT
‑
29)体外炎症模型来研究在2、4、8、16mM 的浓度该三肽的抗炎活性。测定典型细胞因子IL
‑
8的含量，同时运用WST
‑
1试剂盒测定细胞活力。本专利技术采用转录组测序、RT
‑
PCR、Western
‑
blot，验证其抗炎作用机制。
[0009]本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了一种CTV三肽，通过试验验证发现本专利技术的CTV 三肽能够有效降低促炎因子mRNA表达水平，具有一定的医学价值，可用于开发预防和/或辅助治疗炎症性肠病的食品或药物。
附图说明
[0010]图1所示为CTV对TNF
‑
α诱导的HT
‑
29细胞IL
‑
8的分泌影响及其对细胞活力的影响情况图；
[0011]图2所示为各组转录组数据样本间相关性热图；
[0012]图3所示为转录组数据主成分分析结果图；
[0013]图4所示为差异基因火山图，其中，(A)为NEGvsPOS组差异基因火山图，(B)为 POSvsCTV组差异基因火山图；
[0014]图5所示为CTV对TNF
‑
α诱导的HT
‑
29细胞因子mRNA表达水平的影响情况图；
[0015]图6所示为CTV对TNF
‑
α诱导的HT
‑
29细胞NF
‑
κB通路中关键蛋白表达水平的影响情况图；
[0016]图7所示为CTV对NF
‑
κB信号通路的影响情况图。
具体实施方式
[0017]以下将结合实施例和附图对本专利技术的构思及产生的技术效果进行清楚、完整的描述，以充分地理解本专利技术的目的、方案和效果。
[0018]一、实验过程
[0019]1.炎症模型建立
[0020]以3
×
105cells/mL的密度将细胞种于细胞培养板上，每隔24h换液，培养5
‑
7天待细胞融合到85％左右，弃去培养液，用HBSS缓冲液洗2次。首先加入用含5％FBS的DMEM
‑
F12 新鲜培养液配置的不同浓度的三肽样品预孵育2h，其次再向培养板中加入TNF
‑
α(使其终浓度为5ng/mL)继续孵育4h。孵育结束后，收集细胞上清液用于ELISA测定，下层细胞可根据不同实验要求进行处理。
[0021]2.细胞活力测定
[0022]参考Mengya Zhang(Zhang et al.,2018)等人所述方法对处理后细胞进行活力测定。实验细胞经HBSS清洗三次后，每孔加入等量WST
‑
1稀释液均匀铺满细胞培养板，放入细胞培养箱中避光孵育15本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CTV三肽，其特征在于，其氨基酸序列为Cys
‑
Thr
‑
Val。2.根据权利要求1所述的CTV三肽，其特征在于，其分子量为321Da。3.根据权利要求1所述的CTV三肽，其特征在于，其通过固相合成法获得。4.权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂勇刚，李媛，赵燕，徐明生，姚瑶，吴娜，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：