同时扩增人25个STR基因座的特异性扩增引物组、荧光标记扩增试剂盒及应用和方法技术

本发明专利技术涉及同时扩增人25个STR基因座的特异性扩增引物组、荧光标记扩增试剂盒及应用和方法，属于分子遗传学技术领域。本发明专利技术所述特异性扩增引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1~50所示的引物，对应的人25个STR基因座包括23个常染色体STR基因座和2个性别鉴定STR基因座。本发明专利技术所述特异性扩增引物组对应的基因座包含了目前市面上主流案件需求的所有位点，同时还包含了2个性别鉴定基因座，可有效的预防由于Y染色体缺失导致的性别鉴定错误的风险；25个基因座联合起来，具有高个体识别力、高非父排除率的特征。父排除率的特征。父排除率的特征。

【技术实现步骤摘要】
同时扩增人25个STR基因座的特异性扩增引物组、荧光标记扩增试剂盒及应用和方法


[0001]本专利技术涉及分子遗传学
，具体涉及同时扩增人25个STR基因座的特异性扩增引物组、荧光标记扩增试剂盒及应用和方法。

技术介绍

[0002]STR（short tandem repeats，短串连重复序列）又称微卫星序列，是大量存在于人类基因组DNA中的短串连重复序列，重复单位为2~6个核苷酸。由于具有高度多态性和稳定性，并且与AMP
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FLP和VNTR等分型方法相比，STR基因分型方法所扩增的产物长度小得多（小于500 bp），因此对于模板质量要求较低，即使降解的DNA模板也可以进行分析。此外，STR分型适用于多种DNA纯化方法所纯化的DNA，而这些纯化方法所获得的DNA量往往不够作Southern印迹分析。鉴于以上这些特点，STR分型技术已经广泛应用于法医身份识别鉴定。
[0003]法医DNA数据库是集成现代DNA检验技术、信息技术、网络技术和科学管理等要素，实现跨时空多元化应用、精确打击犯罪、保护人民、维护社会稳定的十分重要的科技利器。法医DNA数据库的核心在于所收录的STR（short tandem repeat）数据信息，一个完善的法医DNA数据库应该包含常染色体STR数据库和Y染色体STR数据库。Y染色体STR数据为案件提供侦查线索，缩小侦查范围，可以预测罪犯可能存在的地区、种族甚至姓氏，常染色体STR数据用于最后罪犯个体的筛查及确认。
[0004]最早由美国公布了13个CODIS核心基因座（CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、vWA），随着我国法医DNA数据库的完善，我国公安部公布了属于我们自己的核心基因座（20个基因座，包含原美国13个CODIS核心基因座及Amelogenin、D2S1338、D19S433、D6S1043、D12S391、Penta D、Penta E）及优选基因座（10个基因座，包换D1S1656、D2S441、D22S1045、D10S1248、D8S1132、D15S659、D3S3045、D19S253、D6S477、D10S1435用于扩大筛查使用），相对应的，公安DNA法医鉴定对试剂盒的基因座数量、信息含量及试剂盒的兼容性就有了更高的需求。而目前市面上，在优选基因座上各家的试剂盒各不相同，公安在使用过程中极不方便，且公安用户除了对基因座的需求增加以外，主要对扩增时间、适用检材种类、灵敏度等也有了越来越高的要求。
[0005]为了从根本上解决公安用户的使用需求，亟需开发一款新的常染色体STR试剂盒。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供同时扩增人25个STR基因座的特异性扩增引物组、荧光标记扩增试剂盒及应用和方法。本专利技术所述特异性扩增引物组能够提高后续试剂盒检测的兼容性、减少扩增时间、提高试剂盒的检材适应性、提高试剂盒的灵敏度、缩短扩增片段大小、增加试剂盒的特异性，进一步满足公安用户的使用需求。
[0007]本专利技术提供了同时扩增人25个STR基因座的特异性扩增引物组，所述人25个STR基因座包括23个常染色体STR基因座和2个性别鉴定STR基因座，所述23个常染色体STR基因座
分别是：D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、D10S1248、D3S1358、TH01、D21S11、D2S1338、D1S1656、Penta D、D2S441、D19S433、D18S51、D22S1045、vWA、D8S1179、TPOX、FGA、CSF1PO、Penta E、D6S1043和D12S391；所述2个性别鉴定基因座为rs2032678和Amelogenin；所述特异性扩增引物组包括：rs2032678扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:1~2所示；Amelogenin扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:3~4所示；D5S818扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:5~6所示；D13S317扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:7~8所示；D7S820扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:9~10所示；D16S539扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:11~12所示；D10S1248扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:13~14所示；D3S1358扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:15~16所示；TH01扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:17~18所示；D21S11扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:19~20所示；D2S1338扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:21~22所示；D1S1656扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:23~24所示；Penta D扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:25~26所示；D2S441扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:27~28所示；D19S433扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:29~30所示；D18S51扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:31~32所示；D22S1045扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:33~34所示；vWA扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:35~36所示；D8S1179扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:37~38所示；TPOX扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:39~40所示；FGA扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:41~42所示；CSF1PO扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:43~44所示；Penta E扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:45~46所示；D6S1043扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:47~48所示；D12S391扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:49~50所示。
[0008]本专利技术还提供了同时扩增人25个STR基因座的荧光标记扩增试剂盒，所述荧光标记扩增试剂盒包括反应体系和检测试剂，所述反应体系包括阳性对照DNA M2或阳性对照DNA 9948、上述技术方案所述特异性扩增引物组、反应预混液和去离子水；所述检测试剂包括分子量内标和等位基因阶梯。
[0009]优选的是，所述25个STR基因座的特异性扩增引物组的浓度如下：SEQ ID NO:1~2所示的rs2032678扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.11~0.16μM；SEQ ID NO:3~4所示的Amelogenin扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.06~0.11μM；SEQ ID NO:5~6所示的D5S818扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.06~0.11μM；SEQ ID NO:7~8所示的中D13S317扩增用引物对各引物的浓度分别为0.08~0.13μM；SE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.同时扩增人25个STR基因座的荧光标记扩增试剂盒，其特征在于，所述荧光标记扩增试剂盒包括反应体系和检测试剂，所述反应体系包括阳性对照DNA M2或阳性对照DNA 9948、同时扩增人25个STR基因座的特异性扩增引物组、反应预混液和去离子水；所述检测试剂包括分子量内标和等位基因阶梯；所述同时扩增人25个STR基因座的特异性扩增引物组包括：rs2032678扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:1~2所示；Amelogenin扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:3~4所示；D5S818扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:5~6所示；D13S317扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:7~8所示；D7S820扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:9~10所示；D16S539扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:11~12所示；D10S1248扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:13~14所示；D3S1358扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:15~16所示；TH01扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:17~18所示；D21S11扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:19~20所示；D2S1338扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:21~22所示；D1S1656扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:23~24所示；Penta D扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:25~26所示；D2S441扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:27~28所示；D19S433扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:29~30所示；D18S51扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:31~32所示；D22S1045扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:33~34所示；vWA扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:35~36所示；D8S1179扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:37~38所示；TPOX扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:39~40所示；FGA扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:41~42所示；CSF1PO扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:43~44所示；Penta E扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:45~46所示；D6S1043扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:47~48所示；D12S391扩增用引物对：核苷酸序列如SEQ ID NO:49~50所示；所述反应预混液包括：0.19~0.38U/μL的热启动Taq DNA聚合酶、100~200 mM的Tris缓冲液、100~200mM的KCL、3.75~7.5mM的MgCl2、50~100mM的(NH4)2SO4、0.5~1μM的dNTP、1000~1500mM的甜菜碱、0.19%~0.38%的Triton、0.5~1mg/ml的BSA、5%~15%的Tween、2.5%~7.5%的甘油和去离子水。2.根据权利要求1所述的荧光标记扩增试剂盒，其特征在于，所述25个STR基因座的特异性扩增引物组的浓度如下：SEQ ID NO:1~2所示的rs2032678扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.11~0.16μM；SEQ ID NO:3~4所示的Amelogenin扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.06~0.11μM；SEQ ID NO:5~6所示的D5S818扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.06~0.11μM；SEQ ID NO:7~8所示的中D13S317扩增用引物对各引物的浓度分别为0.08~0.13μM；SEQ ID NO:9~10所示的D7S820扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.28~0.33μM；SEQ ID NO:11~12所示的D16S539扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.12~0.17μM；SEQ ID NO:13~14所示的D10S1248扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.12~0.17μM；SEQ ID NO:15~16所示的D3S1358扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.09~0.14μM；SEQ ID NO:17~18所示的TH01扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.07~0.12μM；SEQ ID NO:19~20所示的D21S11扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.17~0.22μM；SEQ ID NO:21~22所示的D2S1338扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.07~0.12μM；SEQ ID NO:23~24所示的D1S1656扩增用引物对中
各引物的浓度分别为0.13~0.18μM；SEQ ID NO:25~26所示的Penta D扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.26~0.31μM；SEQ ID NO:27~28所示的D2S441扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.12~0.17μM；SEQ ID NO:29~30所示的D19S433扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.25~0.30μM；SEQ ID NO:31~32所示的D18S51扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.10~0.15μM；SEQ ID NO:33~34所示的D22S1045扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.10~0.15μM；SEQ ID NO:35~36所示的vWA扩增用引物对中各引物的浓度分别为0.08~0.13μM；SEQ ID NO:37...

【专利技术属性】
技术研发人员：冉凌飞，蒿杰，刘甲乾，路瑶，
申请(专利权)人：百特元生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：