【技术实现步骤摘要】
一种分离并纯化重组TPH2蛋白的方法及试剂盒
[0001]本专利技术涉及蛋白分离领域，具体涉及一种分离并纯化重组TPH2蛋白的方法及试剂盒。
技术介绍
[0002]色氨酸是人体必需氨基酸之一，参与多种生物代谢过程，是激素等生物活性物质的合成前体，在医药、食品行业都扮演着不可缺失的角色。色氨酸经过羟化酶氧化后可形成5
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羟基色氨酸(5
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HTP)，再经过脱羧反应产生5
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羟基色氨(5
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HT)。5
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HT又名血清素，与肾上腺素、去肾上腺素、组胺等物质一样，都是人体中重要的胺类物质。5
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HT在神经和大脑中有大量分布，是褪黑激素合成的前体，在人体中具有减轻忧郁、失眠、食欲不振、体重失调等症状的作用。此外，抑郁症、自闭症、狂躁症、精神分裂疾病和人体肠道应激反应综合征等疾病的发病过程通常与5
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HT的合成或代谢途径受损相关。因此，5
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HT是一种重要的精神疾病药物。
[0003]目前
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，获取含重组TPH2蛋白的溶液，所述重组TPH2蛋白中包括TPH2、链霉亲和素和Flag标签；亲和层析：分别采用Flag磁珠和链霉亲和素磁珠进行亲和层析，获取层析液；采用分子筛对层析液进行层析纯化即可获得TPH2。2.根据权利要求1所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，所述获取含重组TPH2蛋白的溶液的过程为：获得含TPH2
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2Streptavidin
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3Flag基因片段的重组质粒，将重组质粒转染到293F表达细胞进行重组蛋白表达后，进行细胞破碎处理获得细胞破碎液，该细胞破碎液即为含重组TPH2蛋白的溶液；优选的，所述细胞破碎处理时采用机械破碎法、反复冻融法或超声波处理法进行细胞破碎，破碎过程中所用的缓冲液为平衡缓冲液；或/和，在使用Flag磁珠和链霉亲和素磁珠之前，先采用平衡缓冲液对Flag磁珠和链霉亲和素磁珠进行保存；所述平衡缓冲液包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L
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色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。3.根据权利要求2所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，在进行Flag磁珠和链霉亲和素磁珠保存之前，先使用超纯水和0.1mol/L的NaOH溶液对其进行清洗；在采用Flag磁珠进行吸附之前，先采用重生缓冲液和平衡缓冲液分别洗脱Flag磁珠至少一次；其中，重生缓冲液包括含0.1mol/L的Gly的水溶液，并采用HCl调节pH至2.0
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3.5。4.根据权利要求1
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3任一项所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，采用Flag磁珠进行亲和层析的过程为：将需要纯化的溶液加入到Flag磁珠中进行吸附，采用洗杂缓冲液冲洗后，再采用至少一次flag小肽溶液对该Flag磁珠进行洗脱即可；采用链霉亲和素磁珠进行亲和层析的过程为：将需要纯化的溶液加入到链霉亲和素磁珠中进行吸附，采用洗杂缓冲液冲洗后，再采用至少一次生物素溶液对该链霉亲和素磁珠进行洗脱即可。5.根据权利要求4所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，所述洗杂缓冲液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，1～10mmol/L的ATP，1～10mmol/L的MgCl2，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；所述flag小肽溶液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L
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色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，0.1～0.5mg/ml的flag，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；所述生物素溶液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱孔福，张华威，王大平，马涛，姜星，
申请(专利权)人：南方科技大学，
类型：发明
国别省市：
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