一种非水溶性葡聚糖含量的检测方法技术

本发明专利技术具体公开了一种非水溶性葡聚糖含量的检测方法，包括以下步骤：S1.样品处理：S11.在待测样品中按照固液比为1:15～25，加入1mol/L的NaOH溶液，搅拌至溶解；S12.将步骤S1中的不溶物过滤除去，加入总体积的1/5～1/4的GTMAC混合均匀，在65～75℃条件下反应2～4h；S2.Ru(bpy)

【技术实现步骤摘要】
一种非水溶性葡聚糖含量的检测方法


[0001]本专利技术涉及分析检测领域，具体涉及一种非水溶性葡聚糖含量的检测方法。

技术介绍

[0002]电化学发光(Electrogenerated chemiluminescence,ECL)，又称电致化学发光，是化学发光与电化学结合的产物，是指通过施加一定的电压进行电化学反应，在电极表面产生一些电生的物质，然后这些电生的物质之间或者电生物质与体系中某些组分之间通过电子传递形成激发态，由激发态返回到基态而产生的一种发光现象。该技术集成了发光分析高灵敏度和电化学电位可控性的优点，已经成为分析化学工作者十分感兴趣的研究领域之一。电化学发光分析法不仅保留了化学发光分析法灵敏度高、线性范围宽、设备简单、操作方便、快速、易于实现自动化等优点，还具有电化学分析方法控制性强、选择性好、可提供高活性的发光反应物质和节省试剂等优点。
[0003]超灵敏电化学发光传感器的迅速发展主要归功于很好的电化学发光信号放大策略。多种纳米材料，例如，碳纳米管、石墨烯、金纳米以及纳米复合材料等作为一种信号放大器已经在电化学发光传感器的构建上得到了广泛的注意。尤其，石墨烯是一种单原子厚度的二维材料，具有非凡的物理化学性质，如大的比表面积、可调节的电子性质。因此石墨烯已经成为在构建电化学发光传感器领域中最具前景的电极材料。
[0004]石墨烯的生产方法有很多，其中还原超声剥离得到的氧化石墨烯(GO)的方法是最有效的方法。然而，由于石墨烯无论是在干燥状态还是在溶液状态都很容易团聚，这使石墨烯的实际应用受到了阻碍。最开始在石墨烯中引进金属纳米粒是为了分开石墨烯片层防止石墨烯的团聚。然而，现在发现把金属纳米粒沉积到石墨烯表面，赋予了石墨烯应用的新领域，比如，催化、磁性材料、电子传导等领域。石墨烯金属纳米复合材料作为一种电化学发光信号放大器已经应用到了ECL生物传感器中，并且所得到的传感器具有很好的性能。所以石墨烯
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金纳米复合材料也是一种很好的用于信号放大的材料。
[0005]葡聚糖为右旋吡喃葡萄糖聚合体，分子式为(C6H
10
O5)n。葡聚糖主要包括α
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葡聚糖和β
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葡聚糖两种形式。其中，α
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葡聚糖主要存在微生物在生长过程中分泌的粘液中，如蔗糖经细菌发酵产生的胞外多糖，目前是最佳的血浆代用品之一。β
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葡聚糖则广泛存在于微生物、植物乃至动物体内，主要以细胞壁中存在，对异体宿主防御系统具有较强的诱导和活性作用，是一类活性强、毒副作用低的良好的生物应答效应物。
[0006]2012年日本米田章登对美洲鲎和东方鲎的血液进行了DNA测序，找到了与真菌细胞壁中β
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葡聚糖特异性结合的功能区。将此特异性DNA区域命名为美洲鲎属G因子α亚基片端a(Gαa)。
[0007]作为深部真菌感染的病原体的的代表，可列举假丝酵母菌、曲霉菌，冉义一个的细胞壁中都存在β
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葡聚糖，它是真菌细胞壁上的的特有成分，能被免疫细胞识别。因此在临床上，血清和血浆中的β
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葡聚糖的测定被用于真菌感染症的早期临床诊断、治疗效果和康复的判断标准。
[0008]酵母是一种重要的食品和工业微生物，在其细胞壁中存在大量的以β
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1,3
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D为主链、β
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1,6
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D为侧链的不溶性葡聚糖。这种物质具有抗细菌、抗病毒，增强哺乳动物的免疫力等作用，是一种良好的生物效应调节剂，广泛应用于食品、医药、化妆品等行业，是国内外研究的热门课题。由于酵母葡聚糖的水不溶性使其测定有一定困难，对葡聚糖的检测具有一定的困难。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于克服现有技术中的问题，提供了一种非水溶性葡聚糖含量的检测方法。本专利技术利用夹心形式的免疫转感器，将β
‑
葡聚糖季铵盐化提高其水溶性，提高了对β
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葡聚糖检测的准确性。
[0010]本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：
[0011]一种非水溶性葡聚糖含量的检测方法，包括以下步骤：
[0012]S1.样品处理：
[0013]S11.在待测样品中按照固液比为1:15～25，加入1mol/L的NaOH溶液，搅拌至溶解；
[0014]S12.将步骤S1中的不溶物过滤除去，加入总体积的1/5～1/4的GTMAC混合均匀，在65～75℃条件下反应2～4h；
[0015]S2.Ru(bpy)
32+
修饰Gαa蛋白：
[0016]S21.制备Ru(bpy)
32+
掺杂的SiO2；
[0017]S22.将步骤S21的产物分散含有质量分数为5％～10％的戊二醛PBS缓冲溶液中，搅拌2～4h；
[0018]S23.将步骤S22过滤得到的纳米粒子分散到含有Gαa蛋白的PBS缓冲液中，在0～4℃条件下培育12～24h；
[0019]S24.将步骤S23得到的产物用PBS溶液清洗之后，在0～4℃保持在PBS缓冲液中；
[0020]S3.石墨烯金纳米电极的制备：
[0021]S31.配置0.5～1.0mg/mL的GO溶液，再在其中加入氯金酸，使得氯金酸的浓度为10～50μM；
[0022]S32.将打磨好的GCE电极浸泡其中，利用循环伏安法以5～10mV/s的扫描速度，在
‑
1.5V
‑
0.5V范围扫描8～15圈；
[0023]S33.将步骤S32修饰的电极用去离子水冲洗3～5遍；
[0024]S4.待测物检测
[0025]S41.将步骤S3制备的电极浸泡在浓度为0.01～0.05g/mL的Gαa蛋白的PBS溶液中3～5h；
[0026]S42.将步骤S41的电极用PBS溶液清洗之后，浸泡在步骤S1的待测溶液中1～3h；
[0027]S43.将步骤S42的电极用PBS溶液清洗之后，浸泡在步骤S2的溶液中0.5～1h；
[0028]S44.在电化学发光系统中测试步骤S43电极的发光强度。
[0029]优选地，所述步骤S11中固液比为1:20。
[0030]优选地，所述所述步骤S12的反应温度为70℃，反应时间3h。
[0031]优选地，所述PBS缓冲剂的pH为7.2。
[0032]优选地，所述步骤S31中GO的浓度为1.0mg/mL。
[0033]优选地，所述步骤S31中氯金酸的浓度为20μM。
[0034]优选地，所述步骤S32中扫描速度为10mV/s，扫描圈数为10圈。
[0035]优选地，所述步骤S41中浸泡时间为4h。
[0036]优选地，所述步骤S42中浸泡时间为1.5h。
[0037]优选地，所述步骤S43中浸泡时间为1h。
[0038]上述方法中步骤S1样本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非水溶性葡聚糖含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.样品处理：S11.在待测样品中按照固液比为1:15～25，加入1mol/L的NaOH溶液，搅拌至溶解；S12.将步骤S1中的不溶物过滤除去，加入总体积的1/5～1/4的GTMAC混合均匀，在65～75℃条件下反应2～4h；S2.Ru(bpy)
32+
修饰Gαa蛋白：S21.制备Ru(bpy)
32+
掺杂的SiO2；S22.将步骤S21的产物分散含有质量分数为5％～10％的戊二醛PBS缓冲溶液中，搅拌2～4h；S23.将步骤S22过滤得到的纳米粒子分散到含有Gαa蛋白的PBS缓冲液中，在0～4℃条件下培育12～24h；S24.将步骤S23得到的产物用PBS溶液清洗之后，在0～4℃保持在PBS缓冲液中；S3.石墨烯金纳米电极的制备：S31.配置0.5～1.0mg/mL的GO溶液，再在其中加入氯金酸，使得氯金酸的浓度为10～50μM；S32.将打磨好的GCE电极浸泡其中，利用循环伏安法以5～10mV/s的扫描速度，在
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1.5V
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0.5V范围扫描8～15圈；S33.将步骤S32修饰的电极用去离子水冲洗3～5遍；S4.待测物检测：S41.将步骤S3制备的电极浸泡在浓度为0.01～0.05g/mL的Gαa蛋白的PBS溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓娟，
申请(专利权)人：宁波绿糖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：