一种蛇毒中的抗炎多肽DAvp-1及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种蛇毒中的抗炎多肽DAvp

【技术实现步骤摘要】
一种蛇毒中的抗炎多肽DAvp
‑
1及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种蛇毒中的抗炎多肽DAvp
‑
1及其应用。

技术介绍

[0002]炎症表现为红、肿、热、痛和功能障碍，是机体应对刺激的防御反应。在大多数情况下，炎症是有益的，是体内一种自动的防御反应，但有时炎症有害，会对人体自身组织产生攻击。炎症疾病严重影响了人们的生活质量，例如常见的类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎等。
[0003]肿瘤坏死因子(TNF
‑
α，TNF)是具有多种功效的细胞因子，与包括肠炎、风湿性关节炎、败血性休克等在内的多种自身免疫和炎症疾病有关。目前上市和在研的小分子类TNF
‑
α抑制剂多价格昂贵且副作用大；且TNF
‑
α与其受体的结合面积较大，所以小分子很可能无法起到很好的抑制作用。相比之下，多肽属于大分子，更适合作为拮抗TNF
‑
α的靶标，因此在临床药物研发上拥有巨大潜力。
[0004]蛇作为传统中药已有数百年历史，但其中的有效成分和作用机制尚存在许多未知。蛇毒是含有多种蛋白质和多肽活性成分的混合物，有研究表明这些成分可能具有抗肿瘤、抗炎、抗中风和止痛的生物学活性。因此，蛇毒具有开发出拮抗TNF
‑
α多肽的潜力。
[0005]尖吻蝮(Deinagkistrodonacutus)的蛇毒已经被证明有抗炎作用，但其具体的抗炎成分还并不明确。如果能够精准筛选出尖吻蝮蛇毒中具有抗炎功能的多肽分子，则可以一定程度上解析尖吻蝮蛇毒的抗炎机理，并有望提供新的抗炎多肽，具有临床应用和科学研究双重价值。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种蛇毒中的抗炎多肽DAvp
‑
1及其应用。
[0007]为实现上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种多肽DAvp
‑
1，DNA序列如SEQ ID NO:1所示。
[0008]优选的，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0009]相应的，所述多肽DAvp
‑
1在制备抗炎药物中的应用。
[0010]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术成功地从尖吻蝮蛇毒的噬菌体文库中筛选出了可以和TNFR1结合的一种全新的多肽DAvp
‑
1。多肽DAvp
‑
1具有潜在的拮抗TNF
‑
α的作用，是多肽类抗炎药物研发的优良候选。
附图说明
[0011]图1为尖吻蝮毒腺总RNA凝胶电泳示意图；
[0012]图2为尖吻蝮毒腺总RNA逆转录产物凝胶电泳示意图；
[0013]图3为噬菌体内含基因PCR产物凝胶电泳示意图；
[0014]图4为DAvp
‑
1的三维结构模拟图；
[0015]图5为DAvp
‑
1可与TNFR1结合的结构示意图；
[0016]图6为TNFR1和DAvp
‑
1之间的结合模型图；
[0017]图7为不同浓度的DAvp
‑
1流过固定在生物传感器芯片上的TNFR1时引起剂量依赖性共振示意图；
[0018]图8为动物模型的便血情况评分统计图；
[0019]图9为动物模型的大便稠度评分统计图；
[0020]图10为动物模型的体重变化评分统计图；
[0021]图11为病理实验对照组结肠组织染色切片图；
[0022]图12为病理实验DSS组结肠组织染色切片图；
[0023]图13为病理实验给药组1结肠组织染色切片图；
[0024]图14为病理实验给药组2结肠组织染色切片图；
[0025]图15为病理实验给药组3结肠组织染色切片图。
具体实施方式
[0026]本专利技术提供了一种从尖吻蝮蛇毒中获得的具有抗炎潜力的多肽。所述多肽的DNA序列如SEQ ID NO:1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，二级结构示意图如图4所示，三维结构模拟图如图5所示。
[0027]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0028]实施例一：构建尖吻蝮蛇毒噬菌体文库
[0029]本实施例整体步骤为：先提取尖吻蝮毒腺组织的总RNA，提取mRNA，把提取到的mRNA通过反转录得到cDNA。在cDNA的末端加上合成的酶切位点并进行酶切。酶切后洗脱掉长度过低的DNA片段。连接T7 select vector arms，将编码目标肽的基因插入到噬菌体T7的基因组中，使尖吻蝮蛇毒的cDNA序列融合到10B衣壳的C端，从而使目标蛋白在噬菌体颗粒表面表达，再转导到大肠杆菌细胞中。
[0030]获得的噬菌体文库的初始滴度为1.2
×
106pfu/mL。随机挑选原始文库的噬菌斑，对噬菌斑的内含基因进行PCR、凝胶电泳。凝胶电泳图显示已成功在噬菌体中插入了大小不等的片段，根据PCR计算得原始文库重组率接近100％。说明初始文库质量较好，重组率高。将得到的初始文库进行扩增，得到滴度为7.6
×
10
10
pfu/ml的扩增文库。噬菌体展示肽库包含多达10
10
种多样的变异体，这些变异体可使尖吻蝮蛇毒中的多肽和蛋白以多种多样的大小和结构出现在噬菌体表面，为后续炎症多肽的筛选提供了丰富的展示肽库。
[0031]本实施例涉及的培养基和试剂如下：
[0032]1、噬菌体提取缓冲液：NaCl 2.922g，MgSO
4 0.738g，Tris 1.2114g，加入超纯水至500mL，加盐酸调pH至8，1.20
×
105Pa，121℃高温灭菌30min，4℃保存备用。
[0033]2、液体LB培养基：Tryptone 5g,Yeast extract 2.5g，NaCl 5g，加入超纯水至500mL，1.20
×
105Pa，121℃高温灭菌30min，4℃保存备用。
[0034]3、固体LB培养基：Tryptone 5g，Yeast extract 2.5g，NaCl 5g，Agar 7.5g，加入超纯水至500mL，1.20
×
105Pa，121℃高温灭菌30min。
[0035]4、M9TB培养基：TB 100mL，5
×
M9溶液25mL，1M的MgSO
4 125μL，过滤后的20％glucose 2.5mL。
[0036]5、噬菌体洗脱缓冲液(1％SDS)：SDS 1g溶于100mL的超纯水。
[0037]6、80％的甘油溶液:甘油80mL加入蒸馏水20mL混匀，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽DAvp
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1，其特征在于：DNA序列如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述的多肽DAvp
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘杨，张亢然，陈勤，唐业忠，
申请(专利权)人：中国科学院成都生物研究所，
类型：发明
国别省市：