雷公藤的质量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种雷公藤的质量检测方法，本发明专利技术通过大量实验筛选，采用超高效液相色谱检测，该检测方法可以同时检测雷公藤中雷公藤甲素、雷公藤内酯酮等二萜类成分，雷公藤红素、雷公藤内酯甲等三萜类成分，雷公藤晋碱、雷公藤次碱等生物碱类。方法学检测结果表明，该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价雷公藤制剂的质量，对控制质量和保证临床疗效具有重要意义。临床疗效具有重要意义。临床疗效具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
雷公藤的质量检测方法


[0001]本专利技术涉及一种中药制剂的质量控制方法，具体涉及雷公藤的质量检测方法。

技术介绍

[0002]雷公藤是卫矛科雷公藤属植物雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.的根，又名黄藤、断肠草等，主产于福建、浙江、安徽、河南等地，主要以去皮根的木质部入药。其药用最早记载于明朝兰茂所著的《滇南本草》，称其“味辛，性温，有毒。入肝脾十二经，行十二经络”，具有“治筋骨疼痛、风寒湿痹、麻木不仁、瘫痪痿软、湿气流痰”等功效。目前认为雷公藤的有效成分主要包括二萜类、生物碱类、三萜类及苷类等，其中很多成分既是抗炎及免疫抑制的有效成分，又是毒性成分。现代药理研究证实雷公藤具有抗炎、免疫调节、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、抗排异、抗血管生成、骨保护、神经保护等作用。雷公藤已作为一种非甾体抗炎剂和免疫抑制剂已广泛用于临床治疗RA，是公认疗效确切的单味中药。雷公藤多苷片为从雷公藤中提取分离到的一种有效组分，含多种二萜内酯、生物碱、三萜类及苷类成分，具有独特的抗炎和免疫抑制效应，现已被制成中药制剂，通过国家食品药品监督管理局批准用于治疗包括RA在内的自身免疫性和炎性疾病.
[0003]目前，关于雷公藤及其药物制剂的多成分检测质量控制方法局限于有限的少数个别化合物，不能全面反应雷公藤的质量。
[0004]因此，为了充分控制好雷公藤及其提取物和制剂的质量，维护患者的利益，很有必要在现有技术的基础之上研究设计出能准确全面检测雷公藤及其制剂有效成分的检测方法。

技术实现思路
/>[0005]专利技术目的：本专利技术的目的是解决现有技术的不足，经过大量实验筛选，提供一种雷公藤的有效成分的含量测定方法。该方法可同时检测雷公藤及其制剂中的二萜类成分、三萜类成分和生物碱类成分。本专利技术经方法学证明，本专利技术提供的检测方法，灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价雷公藤药材及其提取物与制剂的质量，对控制质量和保证疗效具有重要意义。
[0006]技术方案：为了实现以上目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0007]一种雷公藤的质量检测方法，包括以下步骤：
[0008]步骤(1)混合对照品溶液的制备
[0009]精密称取雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲对照品适量，分别加甲醇制备成单一对照品储备液；精密吸取上述对照品储备液适量，混合后加甲醇稀释，最终制成雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲的混合对照品溶液；
[0010]步骤(2)供试品溶液的制备
[0011]取雷公藤或雷公藤制剂，精密加入醇类溶剂，提取，合并提取液，滤过，续滤液过微孔滤膜，制得供试品溶液；
[0012]步骤(3)线性回归方程的建立
[0013]取步骤(1)的混合对照品依次稀释5倍，得到系列浓度的对照品溶液，依次注入UPLC，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；
[0014]步骤(4)含量测定
[0015]取步骤(2)的雷公藤供试品溶液注入UPLC进行分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲的含量。
[0016]作为优选方案，以上所述的雷公藤的质量检测方法，步骤(1)混合对照品溶液的制备
[0017]精密称取雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲对照品适量，分别加甲醇制备成单一对照品储备液；精密吸取上述对照品储备液适量，混合后加甲醇稀释，最终制成每1mL含雷公藤次碱0.013mg、雷公藤春碱0.2500mg、雷公藤吉碱0.1500mg、雷公藤甲素0.0006mg、雷公藤内酯酮0.0005mg、雷酚内酯0.00125mg、雷公藤红素0.0045mg、雷公藤内酯甲0.004mg的混合对照品溶液。
[0018]作为优选方案，以上所述的雷公藤的质量检测方法，步骤(2)供试品溶液的制备方法为：
[0019]取雷公藤或雷公藤制剂，精密加入6～12倍量的甲醇或乙醇，回流或超声提取2～3次，每次0.5～2小时，合并提取液，滤过，续滤液过微孔滤膜，制得供试品溶液。
[0020]作为优选方案，以上所述的雷公藤的质量检测方法，步骤(3)和步骤(4)中的UPLC的色谱条件为：
[0021]采用UPLC BEH C
18
色谱柱，规格为100mm
×
2.1mm，1.7μm，流动相A相为乙腈
‑
B相为水，梯度洗脱；流速：0.4mL
·
min
‑1，进样量1μL，柱温35℃，自动进样器温度10℃；
[0022]质谱条件为：
[0023]采用Xevo TQ
‑
XS质谱系统进行质谱检测，该系统配有ESI源，以正负模式进行检测，电离源条件设定为：毛细管电压3.0kV；脱溶温度400℃；锥气流量150L/h；脱溶气体流量为1000L/h。碰撞气体采用氩气；采用MRM模式进行检测和定量。
[0024]作为优选方案，以上所述的雷公藤的质量检测方法，梯度洗脱方式为：0～2.08min，A：30％～40％；2.08～4.17min，A：40％～49％；4.17～6.25min，A：49％～49％；6.25～7.29min，A：49％～55％；7.29～8.34min，A：55％～80％；8.34～9.38min，A：80％～85％；9.38～10.42min，A：85％～30％。
[0025]作为优选方案，以上所述的雷公藤的质量检测方法，8种化学成分的质谱检测参数如下：
[0026][0027]作为优选方案，以上所述的雷公藤的质量检测方法，步骤(3)中建立的标准曲线为：
[0028][0029]筛选实验：
[0030]1、色谱条件优化
[0031]本专利技术通过考察乙腈
‑
水、乙腈
‑
甲醇、甲醇
‑
水、甲醇
‑
磷酸水等不同比例下作为流动相对雷公藤中的所有成分的分离效果影响，结果显示使用甲醇作为有机相分离效果不佳，而乙腈分离较好，杂质峰干扰较少。确定流动相后，本专利技术又对梯度洗脱方式进行了筛选，发现不同的洗脱方式，得到的分离度明显不同，由于雷公藤由二萜、三萜、生物碱不同极性的有效成分，需要在一根色谱柱上分离，难度极大，本专利技术通过大量实验筛选不同时间点的流动相组成，筛选得到最佳的梯度洗脱方式。
[0032]并且本专利技术根据8种化学成分的结构特定，筛选了8种成分的质谱检测参数，不能质谱检测参数，检测丰度不同，本专利技术经过大量实验筛选出8种不同类型成分的各自最佳的质谱条件，灵敏度高，检测准确度高。
[0033本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种雷公藤的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)混合对照品溶液的制备精密称取雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲对照品适量，分别加甲醇制备成单一对照品储备液；精密吸取上述对照品储备液适量，混合后加甲醇稀释，最终制成雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲的混合对照品溶液；步骤(2)供试品溶液的制备取雷公藤或雷公藤制剂，精密加入醇类溶剂，提取，合并提取液，滤过，续滤液过微孔滤膜，制得供试品溶液；步骤(3)线性回归方程的建立取步骤(1)的混合对照品依次稀释5倍，得到系列浓度的对照品溶液，依次注入UPLC，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；步骤(4)含量测定取步骤(2)的雷公藤供试品溶液注入UPLC进行分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲的含量。2.根据权利要求1所述的雷公藤的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)混合对照品溶液的制备精密称取雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲对照品适量，分别加甲醇制备成单一对照品储备液；精密吸取上述对照品储备液适量，混合后加甲醇稀释，最终制成每1mL含雷公藤次碱0.013mg、雷公藤春碱0.2500mg、雷公藤吉碱0.1500mg、雷公藤甲素0.0006mg、雷公藤内酯酮0.0005mg、雷酚内酯0.00125mg、雷公藤红素0.0045mg、雷公藤内酯甲0.004mg的混合对照品溶液。3.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐于平，白雪，付瑞嘉，徐顶巧，乐世俊，
申请(专利权)人：陕西中医药大学，
类型：发明
国别省市：