利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法技术

本发明专利技术公开了利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法，改变了传统的融合方法。将任意一侧电极添加通电螺线圈，使融合电极带有强磁性吸引带有磁性的供体细胞黏贴到电极上，形成电极

【技术实现步骤摘要】
利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体为利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法。

技术介绍

[0002]体细胞克隆技术是指把动物体细胞经过抑制培养，使细胞处于休眠状态。采用核移植的方法，利用细胞拆合或细胞重组技术，将卵母细胞去核作为核受体，以体细胞或含少量细胞质的细胞核即核质体作为核供体，将后者移入前者中，构建重组胚，供体核在去核卵母细胞的胞质中重新编程，并启动卵裂，开始胚胎发育过程，妊娠产仔，克隆出动物的技术，又可称之为体细胞核移植技术。
[0003]体细胞克隆技术在克隆猪的生产中已经得到了广泛的应用，但是在整套克隆猪生产体系当中克隆胚胎的融合是一个重要的环节，目前普遍使用的方法就是利用制作的玻璃拨卵针将重构胚中带有供体细胞的一侧手动拨到垂直于电极的方向，此方法不但耗时长、融合效果不稳定，徒手操作受人员不固定的限制导致结果不一致，时间过长还容易导致融合液的蒸发，渗透压升高使重构胚脱水死亡；以上问题促使克隆胚胎的制作无法达到工厂化生产。

技术实现思路

[0004]本专利技术解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法，包括以下步骤,其特征在于：S1：卵母细胞和体细胞的获取；S2：卵母细胞的体外成熟培养；S3：从产磁细菌中提取磁性质粒；S4：体细胞的培养；S5：将带磁质粒转染到供体细胞内；S6：利用体细胞核移植技术制作重构胚；S7：在融合设备的融合电极任意一端加装电螺线圈；S8：对螺线圈通电，然后将重构胚进行融合(激活)；S9：对融合(激活)数据进行记录、检测和总结。2.根据权利要求1所述的利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法，其特征在于：所述步骤2中用预温的成熟培养液含10％的PFF(卵泡液)，0.5μg/mLFSH(促卵泡激素)，0.5μg/mL LH(黄体生成素)，10ng/mLEGF(表皮生长因子)，1％ITS(胰岛素、转铁蛋白混合试剂)以及抗氧化剂等试剂加如适当的胚胎水配置而成；屠宰场采集新鲜猪卵巢，用注射器刺破卵泡获取卵母细胞复合体(COCs)，用M199Hank
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s+0.3％的BSA洗液洗3遍，放入成熟培养液中；培养液用4孔细胞培养板分装，每孔600μL并覆盖300μL石蜡油，放入50枚卵丘卵母细胞复合体，于38.5℃，5％CO2，饱和湿度的CO2培养箱中培养；成熟培养36
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38h后，对卵丘卵母细胞复合体进行脱卵丘细胞，将卵丘细胞已发生扩展的卵丘卵母细胞复合体放入5mL含0.25％透明质酸酶和0.3％BSA的M199 Hank
’
s中，涡旋消化30s，然后将消化液连同消化好的卵母细胞一并倒入60mm2圆形培...

【专利技术属性】
技术研发人员：华再东，郭帅，朱向星，王肆玖，周昌胜，
申请(专利权)人：武汉纽利特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：