细胞特异性转录调控序列及其用途制造技术

公开了用于在一种或多种特定细胞亚型中表达目的核酸的包含最小启动子和细胞特异性增强子的新合成表达盒。还公开了包含这样的合成表达盒的载体和宿主细胞。本申请还公开了在细胞中表达目的核酸诸如编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸的方法以及使用合成表达盒、载体和细胞治疗疾病或病症诸如癌症和遗传疾病的方法。方法。方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞特异性转录调控序列及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年1月24日提交的美国临时申请序列号62/796,254的权益，其全部内容通过援引并入本文。


[0003]本专利技术一般地涉及基因在特定细胞亚型例如免疫细胞诸如T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞中的靶向表达，其可用于造血干细胞(HSC)工程和基于细胞的治疗。

技术介绍

[0004]转导基因在给定细胞亚型或组织中的靶向表达具有挑战性。随着干细胞工程和诱导多能干细胞(iPS)研究领域的不断发展，需要能够仅在源自亲本细胞的靶标群体中表达给定蛋白质。然而，使用传统/天然启动子面临大小和有时特异性的技术问题。例如，目前，造血相关疾患的基因治疗依赖于在强启动子控制下用转基因转导HSC
1,2
。使用这种类型的构建体，源自修饰干细胞的细胞将表达新基因，而不管细胞亚型如何，这可能会导致危险的后果。
[0005]嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞疗法已成为一种针对多种癌症的有前途的新治疗工具。在CAR免疫细胞疗法中，患者的免疫细胞(例如T细胞、NK细胞)被工程化以表达与肿瘤抗原结合的CAR，从而可以特异性杀死表达抗原的肿瘤细胞。目前，这种策略虽然有效，但由于T细胞耗竭和体内工程化T细胞的丢失，通常不会持续。此外，大量CAR
‑
T细胞的输注可能由于细胞因子的大量释放而导致高毒性(细胞因子释放综合征)。因此，需要允许在循环中连续且渐进地补充CAR修饰细胞并将CAR的表达限制在仅特定细胞(例如，T细胞、NK细胞)的方法。
[0006]本说明书参考了许多文献，其内容通过援引以其整体并入本文。

技术实现思路

[0007]本公开提供了以下项目：
[0008]1.一种用于在细胞中表达目的核酸的合成表达盒，包含：
[0009](i)最小启动子；和
[0010](ii)用于在所述细胞中表达目的核酸的与所述最小启动子可操作地偶联的转录增强子，其中所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少50个连续核苷酸具有至少70％序列同一性的序列。
[0011]2.根据项目1所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少100个连续核苷酸具有至少70％序列同一性的序列。
[0012]3.根据项目2所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与SEQ ID NO:7
‑
47中所列的任一序列具有至少70％序列同一性的序列。
[0013]4.根据项目1所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
‑
47中所列的任一序列的至少50个连续核苷酸具有至少80％序列同一性的序列。
[0014]5.根据项目4所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少100个连续核苷酸具有至少80％序列同一性的序列。
[0015]6.根据项目5所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与SEQ ID NO:7
‑
47中所列的任一序列具有至少80％序列同一性的序列。
[0016]7.根据项目1所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
‑
47中所列的任一序列的至少50个连续核苷酸具有至少90％序列同一性的序列。
[0017]8.根据项目7所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少100个连续核苷酸具有至少90％序列同一性的序列。
[0018]9.根据项目8所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与SEQ ID NO:7
‑
47中所列的任一序列具有至少90％序列同一性的序列。
[0019]10.根据项目1所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少50个连续核苷酸具有至少95％序列同一性的序列。
[0020]11.根据项目10所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
‑
47中所列的任一序列的至少100个连续核苷酸具有至少95％序列同一性的序列。
[0021]12.根据项目11所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与SEQ ID NO:7
‑
47中所列的任一序列具有至少95％序列同一性的序列。
[0022]13.根据项目1所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含以下或由以下组成：来自SEQ ID NO:7
‑
47中所列的任一序列的至少50个连续核苷酸。
[0023]14.根据项目13所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含以下或由以下组成：来自SEQ ID NO:7
‑
47中所列的任一序列的至少100个连续核苷酸。
[0024]15.根据项目13所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列或由SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列组成。
[0025]16.根据项目1至15中任一项所述的合成表达盒，其中，所述最小启动子是人巨细胞病毒CMV最小启动子(miniCMV)。
[0026]17.根据项目16所述的合成表达盒，其中，所述最小启动子包含SEQ ID NO:6的序列或由SEQ ID NO:6的序列组成。
[0027]18.根据项目1至17中任一项所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子在所述合成表达盒中的所述最小启动子的上游。
[0028]19.根据项目1至18中任一项所述的合成表达盒，还包含多腺苷酸化(poly(A))信号。
[0029]20.根据项目1至19中任一项所述的合成表达盒，还包含转录终止信号。
[0030]21.根据项目1至20中任一项所述的合成表达盒，还包含与所述最小启动子和转录增强子可操作地偶联的目的核酸。
[0031]22.根据项目1至21中任一项所述的合成表达盒，还包含选择标记。
[0032]23.根据项目1至22中任一项所述的合成表达盒，其中，所述细胞是干细胞。
[0033]24.根据项目23所述的合成表达盒，其中，所述干细胞是造血干细胞(HSC)、胚胎干细胞、全能干细胞、多能干细胞、多潜能干细胞或诱导多能干细胞(iPSC)。
[0034]25.根据项目1至22中任一项所述的合成表达盒，其中，所述细胞是免疫细胞。
[0035]26.根据项目25所述的合成表达盒，其中，所述免疫细胞是T细胞、自然杀伤(NK)细胞或B细胞。
[0036]27.根据本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于在细胞中表达目的核酸的合成表达盒，所述合成表达盒包含：(i)最小启动子；和(ii)用于在所述细胞中表达目的核酸的与所述最小启动子可操作地偶联的转录增强子，其中所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少50个连续核苷酸具有至少70％序列同一性的序列。2.根据权利要求1所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少100个连续核苷酸具有至少70％序列同一性的序列。3.根据权利要求2所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列具有至少70％序列同一性的序列。4.根据权利要求1所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少50个连续核苷酸具有至少80％序列同一性的序列。5.根据权利要求4所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少100个连续核苷酸具有至少80％序列同一性的序列。6.根据权利要求5所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列具有至少80％序列同一性的序列。7.根据权利要求1所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少50个连续核苷酸具有至少90％序列同一性的序列。8.根据权利要求7所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少100个连续核苷酸具有至少90％序列同一性的序列。9.根据权利要求8所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列具有至少90％序列同一性的序列。10.根据权利要求1所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少50个连续核苷酸具有至少95％序列同一性的序列。11.根据权利要求10所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少100个连续核苷酸具有至少95％序列同一性的序列。12.根据权利要求11所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含与SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列具有至少95％序列同一性的序列。13.根据权利要求1所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含以下或由以下组成：来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少50个连续核苷酸。14.根据权利要求13所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含以下或由以下组成：来自SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列的至少100个连续核苷酸。15.根据权利要求13所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子包含SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列或由SEQ ID NO:7
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47中所列的任一序列组成。16.根据权利要求1至15中任一项所述的合成表达盒，其中，所述最小启动子是人巨细胞病毒CMV最小启动子(miniCMV)。17.根据权利要求16所述的合成表达盒，其中，所述最小启动子包含SEQ ID NO:6的序列或由SEQ ID NO:6的序列组成。18.根据权利要求1至17中任一项所述的合成表达盒，其中，所述转录增强子在所述合成表达盒中的所述最小启动子的上游。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的合成表达盒，还包含多腺苷酸化(poly(A))信号。20.根据权利要求1至19中任一项所述的合成表达盒，还包含转录终止信号。21.根据权利要求1至20中任一项所述的合成表达盒，还包含与所述最小启动子和转录增强子可操作地偶联的目的核酸。22.根据权利要求1至21中任一项所述的合成表达盒，还包含选择标记。23.根据权利要求1至22中任一项所述的合成表达盒，其中，所述细胞是干细胞。24.根据权利要求23所述的合成表达盒，其中，所述干细胞是造血干细胞(...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃利，
申请(专利权)人：HSJ增殖合伙人有限公司，
类型：发明
国别省市：