一种检测样品中一种或多种靶核酸的存在或其水平的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测样品中一种或多种靶核酸的存在或其水平的方法，还涉及一种探针组以及包含一个或多个所述探针组的试剂盒。本申请的探针组和检测方法能够减少检测所用的探针个数，同时缩短了检测时间，降低了酶的用量，还能够检测较短的靶核酸。还能够检测较短的靶核酸。还能够检测较短的靶核酸。

【技术实现步骤摘要】
一种检测样品中一种或多种靶核酸的存在或其水平的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种检测样品中一种或多种靶核酸的存在或其水平的方法，还涉及一种探针组以及包含一个或多个所述探针组的试剂盒。

技术介绍

[0002]近年来单细胞研究的成果向我们揭示了单个细胞的基因表达水平与其周围细胞群体的平均表达水平存在极大的差异，即组织中存在细胞群体的表达异质性。而RNA的表达水平及其组织中的定位，往往与细胞和组织的生长发育调控有着密切的关系。所以，为了在保留空间位置信息的同时能更好地了解基因的功能及其调控网络，对RNA进行定量检测就显得意义重大。
[0003]以往传统的原位杂交可对RNA实现原位检测，但由于此方法的反应产物为小分子或沉淀物，在环境中极易扩散开甚至脱离检测探针，因此在精确定位目标分子的具体位置方面还存在一些问题，同时传统方法由于制备探针的过程复杂，缺乏一定灵敏度和特异性，在科研和诊断实验室中一直未能受到广泛使用。
[0004]随后发展起来的单分子荧光原位杂交在一定程度上解决了上述原位杂交所存在的问题，该方法基于的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
540,JOE,HEX,CAL Fluor Orange 560,TAMRA,CAL Fluor Red 590,ROX,CAL Fluor Red 610,TEXAS RED,CAL Fluor Red 635,Quasar 670,CY3,CY5,CY5.5,Quasar 705)；(5)所述扩增酶为核酸聚合酶(特别是模板依赖性核酸聚合酶)；优选地，所述核酸聚合酶为DNA聚合酶，例如热稳定的DNA聚合酶；优选地，所述热稳定的DNA聚合酶获自，Thermus aquaticus(Taq),Thermus thermophiles(Tth),Thermus filiformis,Thermis flavus,Thermococcus literalis,Thermus antranildanii,Thermus caldophllus,Thermus chliarophilus,Thermus flavus,Thermus igniterrae,Thermus lacteus,Thermus oshimai,Thermus ruber,Thermus rubens,Thermus scotoductus,Thermus silvanus,Thermus thermophllus,Thermotoga maritima,Thermotoga neapolitana,Thermosipho africanus,Thermococcus litoralis,Thermococcus barossi,Thermococcus gorgonarius,Thermotoga maritima,Thermotoga neapolitana,Thermosiphoafricanus,Pyrococcus woesei,Pyrococcus horikoshii,Pyrococcus abyssi,Pyrodictium occultum,Aquifexpyrophilus和Aquifex aeolieus；优选地，所述DNA聚合酶为Φ29聚合酶。5.权利要求1
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4任一项所述的方法，所述方法具有选自下列的一个或多个特征：(1)预处理所述检测样品；优选地，所述预处理选自细胞透化，核酸提取，纯化，富集；(2)提供怀疑含有一种或多种靶核酸的检测样品、第一探针、第二探针、锁式探针和连接酶，并使检测样品与第一探针、第二探针、锁式探针和连接酶接触，然后提供检测探针，或者，提供怀疑含有一种或多种靶核酸的检测样品、第一探针、第二探针、锁式探针、连接酶和检测探针，并使检测样品与它们接触；优选地，所述连接酶选自T4 DNA连接酶，DNA连接酶Ⅰ，DNA连接酶Ⅲ和DNA连接酶Ⅳ；优选地，所述连接酶为T4 DNA连接酶。6.权利要求1
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5任一项所述的方法，其中，所述第一探针和第二探具有选自下列的一个或多个特征：(1)所述第一探针和第二探针各自独立地包含或者由天然存在的核苷酸(例如脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)，经修饰的核苷酸，非天然的核苷酸(例如肽核酸(PNA)或锁核酸)，或其任何组合组成；(2)所述第一探针和第二探针的长度各自独立地为15
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20nt，20
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30nt，30
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40nt，40
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50nt，50
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60nt，60
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70nt，70
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80nt，80
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90nt，90
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100nt，100
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200nt，200
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300nt，300
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400nt，400
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500nt，500
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600nt，600
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700nt，700
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800nt，800
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900nt，900
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1000nt；(3)所述第一互补序列和第二互补序列的长度各自独立地为10
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15nt，15
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20nt，20
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30nt，30
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40nt，40
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50nt；优选地，所述第一互补序列和第二互补序列的长度各自独立地为10
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20nt；(4)所述第一互补序列具有与骨架序列互补的第一部分，以及与检测探针序列互补的第二部分；(5)所述第二互补序列具有与骨架序列互补的第三部分，以及与检测探针序列互补的第四部分；优选地，所述第一部分、第二部分、第三部分和第四部分的长度各自独立地为0nt
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15nt；优选地，所述第一部分、第二部分、第三部分和第四部分的长度各自独立地为5nt
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10nt(例如，5nt，6nt，7nt，8nt，9nt，10nt)；(6)所述第一和第二连接序列的长度各自独立地为5
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10nt，10
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15nt，15
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20nt，20
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30nt，30
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40nt，40
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50nt；优选地，所述第一和第二连接序列的长度各自独立地为5
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15nt(例如，5nt，6nt，7nt，8nt，9nt，10nt，11nt，12nt，13nt，14nt，15nt)；(7)所述第一和第二靶结合序列的长度各自独立地为12
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15nt，15
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20nt，20
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30nt，30
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40nt，40
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50nt；优选地，所述第一和第二靶结合序列的长度各自独立地为12
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30nt。7.权利要求1
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6任一项所述的方法，其中，所述检测探针具有选自下列的一个或多个特征：(1)所述检测探针各自独立地包含或者由天然存在的核苷酸(例如脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)，经修饰的核苷酸，非天然的核苷酸(例如肽核酸(PNA)或锁核酸)，或其任何组合组成；(2)所述检测探针的长度各自独立地为15
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20nt，20
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30nt，30
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40nt，40
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50nt，50
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60nt，60
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘玲，黄丽华，柯荣秦，
申请(专利权)人：厦门先能生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：