本发明专利技术属于基因检测技术领域，具体为一种用于检测女性原发不孕的MEI1基因及检测该基因突变的试剂盒。本发明专利技术MEI1基因作为判断因女性卵子受精后反复胚胎停育或移植失败致不孕的标记，具体通过检测MEI1基因是否发生突变来判断女性是否为卵子受精后反复胚胎停育或移植失败而导致的原发性不孕。本发明专利技术还包括检测MEI1基因是否发生突变的引物，以及由引物和DNA聚合酶、dNTP及缓冲液组成的检测试剂盒。本发明专利技术可通过检测MEI1基因是否突变，指导临床具有此基因突变的病人，是否合适进行试管婴儿术。
【技术实现步骤摘要】
用于检测女性原发不孕的MEI1基因及检测该基因突变的试剂盒
本专利技术属于基因检测
，具体涉及一种用于检测女性原发不孕的MEI1基因及检测该基因突变的试剂盒。
技术介绍
正常怀孕及生殖是维持及延续人类种群的重要环节。对于女性不孕，目前已经有ZP-1，Stag3，FSHR等基因被发现与女性不孕症密切相关（HuangHLetal,MutantZP1infamilialinfertility.NEnglJMed.2014370(13):1220-6;deRouxNetal,Afamilywithhypogonadotropichypogonadismandmutationsinthegonadotropin-releasinghormonereceptor.NEnglJMed.1997337(22):1597-602;CaburetSetal,Mutantcohesioninprematureovarianfailure.NEnglJMed.2014370(10):943-9）。但是，均未在临床中应用。导致女性不孕症的原因很多，有一些临床报道涉及以卵子不成熟为特征的女性不孕症的描述（Rudaketal,fertilityandsterility,199054:292-296;HumanReproduction,199510:2343-2349;fertilityandsterility199971:567-570;HumanReproduction200116(10):2136-2138;HumanReproduction200217(6):1604-1609;HumanReproduction200217(10):2556-2559）。这些病人通过反复进行授精-胚胎移植术（试管婴儿），均因未能获取到成熟卵细胞，而无法完成成功的体外授精操作。如果能发现相关致病基因，则对疾病临床诊断及分型都具有重要意义。最近我们发现了导致人类卵子成熟障碍的致病基因TUBB8(NEnglJMed.2016Jan21;374(3):223-32)、PATL2（AmJHumGenet.2017Oct5;101(4):609-615），导致人类卵子受精障碍致病基因WEE2（AmJHumGenet.2018Apr5;102(4):649-657），导致卵子死亡致病基因PANX1（SciTranslMed.2019Mar27;11(485):eaav8731），导致合子分裂失败致病基因BTG4（AmJHumGenet.2020Jul2;107(1):24-33）及早期胚胎停育致病基因PADI6（AmJHumGenet.2016Sep1;99(3):744-752）。但是，这几个基因仅能解释部分患者的原因，相当多患者的原因依然未知。经对现有技术文献的检索发现，仅发现少数几篇围绕MEI1基因功能的研究文章。这些研究报道该基因在小鼠卵子受精及早期胚胎发育过程中起着重要作用，且纯合敲除雌鼠由于卵母细胞减数分裂缺陷而完全不孕。但是，至今未见关于MEI1基因突变与人类植入前胚胎发育异常的任何报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种操作方便、效果明确的用于检测女性原发不孕的MEI1基因及检测该基因突变的试剂盒。本专利技术提出的用于检测女性原发不孕的MEI1基因，其核酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术涉及筛查因卵子受精后反复胚胎停育或移植失败而致原发性不孕的方法，就是通过检测MEI1基因是否发生突变来判断病人是否为卵子受精后反复胚胎停育或移植失败而导致的原发性不孕。患者携带MEI1基因突变导致的不孕，表现为卵子可以成熟，但受精后反复胚胎停育或移植失败及试管婴儿失败。可见，MEI1基因可以作为判断因卵子受精后反复胚胎停育或移植失败致女性不孕的标记。检测MEI1基因是否发生突变方法，具体可从患者的外周血中提取DNA后，用PCR（多聚酶链式反应）法结合DNA测序，来检测MEI1基因是否发生了突变。其中，检测的样本是DNA，该DNA样本来自于待检人群的外周血。或者，检测的样本是RNA、蛋白、细胞或者血清样本，该样本来自于待检人群的外周血。本专利技术涉及检测MEI1基因是否发生突变的引物。MEI1基因有31个外显子编码区，用于检测第1外显子编码区的PCR扩增引物对为：5’-CTGAGGGCAAGCGAGGAG-3’（SEQIDNO.2）5’-GGGAGGAGAGTGAACACAGC-3’（SEQIDNO.3）测序引物对同上；用于检测第2号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5’-TCCTCACCAACTTGTTAGGCTT-3’（SEQIDNO.4）5’-GCATCTTGGATCTTAGAAAAAGGG-3’（SEQIDNO.5）测序引物对同上；用于检测第3号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5’-CCTGGGCAGGTCATCGAAAG-3’（SEQIDNO.6）5’-TTGAAAACTAATGGGGTTCCTCTT-3’（SEQIDNO.7）测序引物对同上；用于检测第4号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5’-CAGAACTCCTTTAGTTTAGATGTGC-3’（SEQIDNO.8）5’-ACTCTGCCACCAACTCAGTG-3’（SEQIDNO.9）测序引物对同上；用于检测第5号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5’-GCTGATTGCTGACTGTGGTG-3’（SEQIDNO.10）5’-TTTGCAGACGGGGAAACTGA-3’（SEQIDNO.11）用于检测第6号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5’-GGACTTACCATTACTACCCCGTTA-3’（SEQIDNO.12）5’-AGTGACAGGACGTGAGCTAT-3’（SEQIDNO.13）测序引物对同上；用于检测第7号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5’-GCCTAGCACTTAGTGGGCTC-3’（SEQIDNO.14）5’-AAGACAAGGCCCAAGAAGCA-3’（SEQIDNO.15）测序引物对同上；用于检测第8、9号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5’-CACGGAGACCCCTTCCCATA-3’（SEQIDNO.16）5’-CTTCCCTTGCTGAAGCGTCT-3’（SEQIDNO.17）测序引物对同上；用于检测第10、11号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5’-GGGACTGTGCTATGGCTTGT-3’（SEQIDNO.18）5’-CCTCAACAGGCCCTTAGGTA-3’（SEQIDNO.19）测序引物对同上；用于检测第12号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5’-CAAGAAGTTGT本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.MEI1基因作为判断因女性卵子受精后反复胚胎停育或移植失败致不孕的标记的应用，所述MEI1基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n
【技术特征摘要】
1.MEI1基因作为判断因女性卵子受精后反复胚胎停育或移植失败致不孕的标记的应用，所述MEI1基因的核酸序列如SEQIDNO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，通过检测MEI1基因是否发生突变来判断女性是否为卵子受精后反复胚胎停育或移植失败而导致的原发性不孕。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测MEI1基因是否发生突变，具体步骤如下：
对MEI1中31个外显子编码区，分别利用对应的引物对SEQIDNO.2、SEQIDNO.3--SEQIDNO.50、SEQIDNO.51，进行PCR扩增，然后利用相同的引物进行测序，与UCSC中MEI1的标准序列：SEQIDNO.1进行比对，从而发现突变。
4.用于检测MEI1基因是否发生突变的引物，其特征在于，对于MEI1基因的31个外显子编码区，检测用的PCR扩增引物对依次为：SEQIDNO.2、SEQIDNO.3，SEQIDNO.4、SEQIDNO.5，SEQIDNO.6、SEQIDNO.7，SEQIDNO.8、SEQIDNO.9，SEQIDNO.10、SEQIDNO.11，SEQIDNO.12、SEQIDNO.13，SEQIDNO.14、SEQIDNO.15，SEQIDNO.16、SEQIDNO.17，SEQIDNO.18、SEQIDNO.19，SEQIDNO.20、SEQIDNO.21，SEQIDNO.2...
【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，桑庆，
申请(专利权)人：复旦大学，珠海复旦创新研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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