一种判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法技术

本发明专利技术公开了一种及时判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法。本发明专利技术在于建立了一种及时的华贵栉孔扇贝低温损伤判断标准，通过对华贵栉孔扇贝的消化腺和闭壳肌分别进行脂肪和糖原含量的检测，比对损伤程度判断标准，低温一级损伤：消化腺脂肪的含量≤40％且闭壳肌糖原的含量≤15mg/g；低温二级损伤：消化腺脂肪的含量≤45％且闭壳肌糖原的含量≤20mg/g，同时高于一级损伤标准；低温未损伤：消化腺的脂肪含量>45％或者闭壳肌的糖原含量>20mg/g。本方法可以通过脂肪和糖原含量的检测，判断华贵栉孔扇贝是否处于低温损伤以及处于何种程度的低温损伤状态，及时判断育种所需亲贝受到的低温损伤程度，为耐低温品种的培育提供支持。

【技术实现步骤摘要】
一种判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法
本专利技术涉及一种判断贝类低温损伤程度的方法，属于贝类育种领域，特别涉及一种判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法。
技术介绍
华贵栉孔扇贝(ChlamysnobilisReeve)隶属软体动物门、瓣鳃纲、珍珠贝目、扇贝科，为暖水性海洋贝类，广泛分布在我国的东南沿海、泰国、越南、印度尼西亚以及日本。因其有生长快、养殖周期短、经济效益高等优势而广受养殖户的青睐，上世纪80年代就已在福建、广东、广西、海南等大规模养殖，成为我国南方最重要的海水养殖贝类之一，为我国海水养殖业带来了巨大的经济效益。由于华贵栉孔扇贝为暖水性贝类，其养殖过程中冬季时常会出现大规模死亡，给养殖业者带来巨大的经济损失。因此，培育出耐低温的新品种已成为华贵栉孔扇贝养殖产业的迫切需要。低温胁迫贝类的研究一直都有报道，但没有关于判定低温损伤程度的方法报道。我们前期在华贵栉孔扇贝低温胁迫的研究中通常采用观察外套膜皱缩情况以及鳃的损伤情况来判断其损伤程度，但当观察到这种肉眼可见的损伤时，扇贝已经处于低温应激的后期，此时进行回温养殖，扇贝也很难恢复活力，不能够再作为耐低温品种培育中的亲贝。因此，寻找一种能够及时判断扇贝低温损伤程度的方法对培育耐低温新品种具有重要意义。然而，迄今为止，还没有判断贝类低温损伤程度的报道，为其耐低温品种培育服务。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术目的是提供一种通过检测机体组织脂肪含量和糖原含量，及时判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法，以解决现有肉眼观察存在的判断低温损伤不及时的问题。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供一种判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法，根据华贵栉孔扇贝机体组织的脂肪含量和糖原含量进行判断。低温引起的冷损伤反应是一个耗能过程，脂肪和糖原作为生物体内重要的能源物质，它们的分解能够保证生命的正常活动。1g脂肪完全氧化分解后释放热量约9千卡，是相同质量的蛋白和碳水化合物的2倍，因此脂肪是一种高效的能源物质，饲料中脂质的添加还能起到节约蛋白质的作用。除了提供能量外，脂类物质还在生物体内具有多种生物学功能，其中固醇脂可以用来合成维生素D、性激素和蜕壳激素等，而磷脂和糖脂等还是构成生物膜的主要成分，变温动物在不同的环境损伤如温度、盐度的变化时，通常通过调节细胞膜中不饱和脂肪酸的含量来维持细胞膜的流动性。除了为机体提供能量，糖原还可分解转化为甘油、海藻糖、葡萄糖等小分子碳水化合物，通过葡萄糖分解产生ATP的方式为机体提供能量抵御寒冷。脂肪和糖原对华贵栉孔扇贝的生命活动非常重要。由于低温能够影响脂肪和糖原的代谢，因此通过检测机体组织中脂肪含量和糖原含量的变化能够及时地判断华贵栉孔扇贝的低温损伤程度。因此，本专利技术提供了一种通过检测机体组织中脂肪含量和糖原含量的变化来及时判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法。进一步地，所述判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法包括以下步骤：(1)样品获得：选取低温胁迫后的扇贝，取样消化腺和闭壳肌；(2)脂肪含量检测：测定消化腺组织中脂肪含量，利用氯仿-甲醇法、传统索氏抽提法或脂肪仪测定法中的一种；(3)糖原含量检测：测定闭壳肌组织中横纹肌的糖原含量，利用硫酸-蒽酮比色法、邻甲苯胺比色法或碘显色法中的一种；(4)低温损伤判断。更进一步地，步骤(1)中，所述选取低温胁迫后的扇贝的数量≥3只。更进一步地，步骤(1)中，还包括将选取低温胁迫后的扇贝经生理盐水冲洗后，取样消化腺和闭壳肌，-20℃保存的步骤。更进一步地，步骤(2)中，所述消化腺组织是冷冻干燥后的消化腺组织。更进一步地，步骤(2)中，所述氯仿-甲醇法包括以下步骤：A、样品称量：称取样品，记录重量M1；称量干燥的玻璃离心管，记录重量M2；B、脂肪提取：采用体积比2:1的氯仿:甲醇混合液进行提取，取下层澄清，转移至所述称重干燥的玻璃离心管中，再次加入体积比2:1的氯仿:甲醇混合液进行提取，取下层澄清，液氮吹干后称重M3；C、计算：脂肪含量％＝(M3-M2)÷M1×100％；所述传统索氏抽提法包括以下步骤：A、样品称量：称取样品，记录重量M1，用烘干后的滤纸包包裹好，记录重量M2；B、抽提：将样品滤纸包放入索氏抽提器的抽提筒内，采用无水乙醚进行抽提；C、抽提后称量：取出所述样品滤纸包，待溶剂挥发后将所述样品滤纸包冷冻干燥，称重所述样品滤纸包，记录重量M3；D、计算：脂肪含量％＝(M2-M3)÷M1×100％；所述脂肪仪测定法包括以下步骤：A、样品称量：称取样品，记录重量M1；将浸提杯烘干，冷却后称重，记录重量M2；B、抽提：采用无水乙醚进行提取，提取过程包括浸提、淋洗、溶剂回收、预干燥；C、称重：提取完成后，取出浸提杯，烘干冷却后称重，记录重量M3；D、计算：脂肪含量％＝(M3-M2)÷M1×100％。更进一步地，步骤(2)中，所述氯仿-甲醇法具体包括以下步骤：A、样品称量：称量样品，记录重量M1；称量干燥的玻璃离心管，标记并记录重量M2；B、脂肪提取：每g样品加入20ml提取液，所述提取液为体积比2:1的氯仿:甲醇混合液，混匀，放置2～8℃，每隔10～12h混匀一次，48～60h后取出，加入7ml/g样品的纯水，混匀1～3min后，2000～5000rpm离心10～15min，取下层澄清，转移至所述称重干燥的玻璃离心管中；继续加入20ml/g样品的提取液，混匀1～3min后2000～5000rpm离心10～15min；取下层澄清，液氮吹干后称重M3；C、计算：脂肪含量％＝(M3-M2)÷M1×100％。所述传统索氏抽提法具体包括以下步骤：A、样品称量：称取样品1.0～1.5g，记录重量M1，用烘干后的滤纸包包裹好，称重样品滤纸包，记录重量M2；B、抽提：将所述样品滤纸包放入索氏抽提器的抽提筒内，并注入无水乙醚至刚好没过所述样品滤纸包，然后将所述抽提筒与已装入2/3容积的无水乙醇的接收瓶连接，最后放在水浴锅内100～105℃恒温加热，抽提时间为6～10h；C、抽提后称量：取出所述样品滤纸包，待溶剂挥发后将所述样品滤纸包冷冻干燥，称重所述样品滤纸包，记录M3；D、计算：脂肪含量％＝(M2-M3)÷M1×100％。所述脂肪仪测定法具体包括以下步骤：A、样品称量：称取样品1.0～1.5g，记录重量M1，放入滤纸筒内；将浸提杯在110～120℃烘干1～2h冷却后称重，记录重量M2；B、抽提：将滤纸筒悬挂于冷凝器回流阀的下方，放好浸提杯，装入30～50ml无水乙醚溶剂，浸提60～80min，淋洗150～180min，预干燥5～10min，提取溶剂回收；C、称重：提取完成后，取出浸提杯，110～120℃烘干1～2h冷却后称重，记录重量M3；D、计算：脂肪含量％＝(M3-M2)÷M1×100％。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法，其特征在于，根据华贵栉孔扇贝机体组织的脂肪含量和糖原含量进行判断。/n

【技术特征摘要】
1.一种判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法，其特征在于，根据华贵栉孔扇贝机体组织的脂肪含量和糖原含量进行判断。


2.根据权利要求1所述判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)样品获得：选取低温胁迫后的扇贝，取样消化腺和闭壳肌；
(2)脂肪含量检测：测定消化腺组织中脂肪含量，利用氯仿-甲醇法、传统索氏抽提法或脂肪仪测定法中的一种；
(3)糖原含量检测：测定闭壳肌组织中横纹肌的糖原含量，利用硫酸-蒽酮比色法、邻甲苯胺比色法或碘显色法中的一种；
(4)低温损伤判断。


3.根据权利要求2所述判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述选取低温胁迫后的扇贝的数量≥3只。


4.根据权利要求2所述判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述消化腺组织是冷冻干燥后的消化腺组织。


5.根据权利要求2所述判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述氯仿-甲醇法包括以下步骤：
A、样品称量：称取样品，记录重量M1；称量干燥的玻璃离心管，记录重量M2；
B、脂肪提取：采用体积比2:1的氯仿:甲醇混合液进行提取，取下层澄清，转移至所述称重干燥的玻璃离心管中，再次加入体积比2:1的氯仿:甲醇混合液进行提取，取下层澄清，液氮吹干后称重M3；
C、计算：脂肪含量％＝(M3-M2)÷M1×100％；
所述传统索氏抽提法包括以下步骤：
A、样品称量：称取样品，记录重量M1，用烘干后的滤纸包包裹好，记录重量M2；
B、抽提：将样品滤纸包放入索氏抽提器的抽提筒内，采用无水乙醚进行抽提；
C、抽提后称量：取出所述样品滤纸包，待溶剂挥发后将所述样品滤纸包冷冻干燥，称重所述样品滤纸包，记录重量M3；
D、计算：脂肪含量％＝(M2-M3)÷M1×100％；
所述脂肪仪测定法包括以下步骤：
A、样品称量：称取样品，记录重量M1；将浸提杯烘干，冷却后称重，记录重量M2；
B、抽提：采用无水乙醚进行提取，提取过程包括浸提、淋洗、溶剂回收、预干燥；
C、称重：提取完成后，取出浸提杯，烘干冷却后称重，记录重量M3；
D、计算：脂肪含量％＝(M3-M2)÷M1×100％。


6.根据权利要求2所述判断华贵栉孔扇贝低温损伤程度的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述闭壳肌组织为仅有横纹肌的扇贝闭壳肌组织。

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【专利技术属性】
技术研发人员：郑怀平，朱雯璐，张传旭，江胜，
申请(专利权)人：汕头大学，
类型：发明
国别省市：广东;44