一种羊肚菌多糖及其低共熔溶剂提取方法技术

本发明专利技术公开了一种羊肚菌多糖及其低共熔溶剂提取方法。所示提取方法包括如下步骤：S1、将羊肚菌粉碎，采用低共熔溶剂进行超声提取，去除蛋白后进行透析，得到提取液；S2、所述提取液经醇沉后收集沉淀，经冷冻干燥即得到羊肚菌多糖；低共熔溶剂中，氢键受体为氯化胆碱，氢键供体为草酸。经本发明专利技术验证，羊肚菌多糖对DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力均随浓度的增加而增强，本发明专利技术提取的多糖在高浓度下具有较好的抗氧化能力。经本发明专利技术实验验证，本发明专利技术方法提取的羊肚菌多糖对α‑葡萄糖苷酶和α‑淀粉酶均具有明显的抑制作用，且对α‑葡萄糖苷酶的抑制效果优于对α‑淀粉酶的抑制效果，具有降血糖活性。

【技术实现步骤摘要】
一种羊肚菌多糖及其低共熔溶剂提取方法
本专利技术涉及一种羊肚菌多糖及其低共熔溶剂提取方法，属于多糖制备

技术介绍
传统多糖的提取方式多是热水抽提，以水为介质，存在费时、生产能耗高、活性组分易损失、得率低等缺陷。低共熔溶剂(DES)作为一类新型绿色介质，由氢键受体和氢键供体按照一定比例混合构成，二者通过氢键相互结合，能够提供或接受外部电子或质子形成氢键，使得它们可以溶解多种物质。此外，低共熔溶剂不仅具有离子液体的良好性质，如热稳定性优异，与水和有机溶剂混溶，对各种有机化合物具有优异的溶解性和萃取性，而且原料易得，成本较低，制备简单，无污染。梯棱羊肚菌(Morchellaimportuna)是一种名贵的大型药食用真菌，富含蛋白质、多糖、甾醇等多种生物活性物质，特别是羊肚菌多糖具有抗肿瘤、提高机体免疫力、降血脂、抗氧化、抗疲劳等功效，且无毒副作用。尽管羊肚菌多糖具有很好的生理活性，但其提取效率一直较低，制约了对羊肚菌多糖构效关系的研究及深度开发和利用。因此有必要提供一种提取效率高的羊肚菌多糖的提取方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种采用氯化胆碱和草酸制作的低共熔溶剂提取羊肚菌多糖的方法，该方法提取率高，成本低，能耗低，绿色环保，操作简单，制备的多糖总糖含量高，蛋白质等杂质少，糖醛酸含量高，是一种优良的提取方法本专利技术所提供的羊肚菌多糖的提取方法，包括如下步骤：S1、将羊肚菌粉碎，采用低共熔溶剂进行超声提取，去除蛋白后进行透析，得到提取液；S2、所述提取液经醇沉后收集沉淀，经冷冻干燥即得到羊肚菌多糖。步骤S1中，所述羊肚菌粉碎后过100目筛；步骤S1中，所述低共熔溶剂中，氢键受体为氯化胆碱，氢键供体为草酸；所述低共熔溶剂的体积含水量为80～90％，优选90％；本专利技术方法采用的氯化胆碱/草酸低共熔溶剂作为一种环境友好型的离子液体类似物，具有性质稳定、选择性强、价格低廉等优点。所述低共熔溶剂中，所述氯化胆碱与所述草酸的摩尔比2～2.5：1，优选2：1。步骤S1中，所述超声提取的温度为50～70℃，优选60℃，时间为20～40min，优选30min；所述超声提取可在600W的条件下进行。步骤S1中，所述羊肚菌与所述低共熔溶剂的料液比为1g：20～40mL，优选1g：30mL。步骤S1中，采用亚铁氰化钾-乙酸锌法去除蛋白。步骤S2中，采用乙醇进行醇沉；具体可在真空条件下于-80℃的条件下进行冷冻干燥。上述方法提取得到的羊肚菌多糖也属于本专利技术的保护范围。本专利技术采用新型的绿色低共熔溶剂作为萃取剂，羊肚菌多糖提取率比传统的热水抽提法高4.5倍，多糖含量提高了26.18％，糖醛酸含量高了7.28％。相关研究表明，糖醛酸的含量与其抗氧化能力有关，经本专利技术验证，羊肚菌多糖对DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力均随浓度的增加而增强，本专利技术提取的多糖在高浓度下具有较好的抗氧化能力。经本专利技术实验验证，本专利技术方法提取的羊肚菌多糖对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶均具有明显的抑制作用，且对α-葡萄糖苷酶的抑制效果优于对α-淀粉酶的抑制效果，具有降血糖活性。附图说明图1为不同类型DES提取率的比较。图2为氯化胆碱-草酸体系中不同含水量对多糖提取率的影响。图3为不同摩尔比的氯化胆碱-草酸体系对提取率的影响。图4为提取时间对多糖提取率的影响。图5为提取温度对多糖提取率的影响。图6为料液比对多糖提取率的影响。图7为各种因素对多糖提取率相互作用的响应面图和等高线图。图8为羊肚菌多糖对DPPH自由基的清除率。图9为羊肚菌多糖对ABTS自由基的清除率。图10为羊肚菌多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率。图11为羊肚菌多糖对α-淀粉酶的抑制率。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中各指标的测定方法如下：羊肚菌多糖含量的测定：采用苯酚-硫酸法测量多糖含量。吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1mL标准葡萄糖溶液(0.1mg/mL)于试管中，用蒸馏水分别添加至2mL，取400μL标准葡萄糖溶液，加入200μL苯酚溶液(5％)和1mL硫酸后摇匀，在室温下静止10min，37℃反应20min，在490nm处测吸光值。以蒸馏水作为空白，平行测定3次，取平均值。以多糖浓度x为横坐标，吸光值y为纵坐标,绘制葡萄糖标准曲线，得回归方程：y＝12.621x+0.011R2＝0.999。准确吸取0.1mg/mL的羊肚菌多糖溶液400μL，按照上述方法进行显色反应后测定反应液的吸光度，将其代入上述回归方程，计算样品中多糖的含量。羊肚菌多糖中还原糖含量的测定：分别量取葡萄糖溶液对照品0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，以蒸馏水补充至2ml后摇匀，取0.5mL对照品加入1.5ml已经配制好的DNS溶液，摇匀后，经沸水浴5min后取出，之后用流动冷水速冷至室温后加4mL蒸馏水；以空白管为对照，540nm检测吸光度。以葡萄糖质量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线y＝1.6551x-0.1308R2＝0.9996。准确吸取4mg/mL的羊肚菌多糖溶液0.5mL，按照上述方法进行显色反应后测定反应液的吸光度，将其代入上述回归方程，计算样品中还原糖的含量。羊肚菌多糖中蛋白质含量的测定：采用考马斯亮蓝法测定蛋白质标准曲线。取0.1mg/mL牛血清蛋白标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，以蒸馏水补足至1mL，加入考马斯亮蓝溶液5mL，摇匀后静置5min，于595nm处测定反应液的吸光度。以蒸馏水作为空白，平行测定3次，取平均值。以牛血清蛋白浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，对其进行线性回归后得到回归方程y＝0.0079x+0.059R2＝0.9991。准确吸取4mg/mL的羊肚菌多糖溶液1mL，按照上述方法进行显色反应后测定反应液的吸光度，将其代入上述回归方程，计算样品中蛋白质的含量。羊肚菌多糖中糖醛酸含量的测定：采用咔唑-硫酸法测定半乳糖醛酸标准曲线。分别精密吸取半乳糖醛酸(99μg/mL)0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL溶液置于10mL于具塞试管中，各管加水至0.5mL，分别在冰水浴中加入四硼酸钠－硫酸溶液3mL，用漩涡混合器混匀，于沸水浴中加热5min，取出后立即冷却至室温，加0.1％咔唑溶液0.1mL，摇匀，煮沸5min，冷却至室温后在530nm处测定其吸光度。以浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，对其进行线性回归后得到回归方程y＝5.1306x-0.0195，R2＝0.9997。准确吸取0.25mg/mL的羊肚菌多糖溶液500μL，按照上述方法进行显色反应后测定反应液的吸光度，将其代入上述回归方程，计算样品中糖醛酸的含本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种羊肚菌多糖的提取方法，包括如下步骤：/nS1、将羊肚菌粉碎，采用低共熔溶剂进行超声提取，去除蛋白后进行透析，得到提取液；/nS2、所述提取液经醇沉后收集沉淀，经冷冻干燥即得到羊肚菌多糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种羊肚菌多糖的提取方法，包括如下步骤：
S1、将羊肚菌粉碎，采用低共熔溶剂进行超声提取，去除蛋白后进行透析，得到提取液；
S2、所述提取液经醇沉后收集沉淀，经冷冻干燥即得到羊肚菌多糖。


2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤S1中，所述低共熔溶剂中，氢键受体为氯化胆碱，氢键供体为草酸。


3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：所述低共熔溶剂的体积含水量为80～90％。


4.根据权利要求2或3所述的提取方法，其特征在于：所述低共熔溶剂中，所述氯化胆碱与所述草酸的摩尔比2～2.5：1。...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐丽婧，潘旭，孟俊龙，常明昌，冯翠萍，程艳芬，耿雪冉，程钢，刘靖宇，王术荣，邓冰，何畅，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：山西;14