用于防治巨型艾美耳球虫的重组多肽及疫苗制造技术

本发明专利技术涉及兽用生物制品领域，具体而言，涉及一种用于防治巨型艾美耳球虫的重组多肽及疫苗。通过免疫巨型艾美耳球虫重组多肽疫苗EM‑ATEV蛋白，能有效控制鸡体感染巨型艾美耳球虫，大大降低养鸡场抗球虫药的使用量，有效控制鸡球虫病。

【技术实现步骤摘要】
用于防治巨型艾美耳球虫的重组多肽及疫苗
本专利技术涉及兽用生物制品领域，具体而言，涉及一种用于防治巨型艾美耳球虫的重组多肽及疫苗。
技术介绍
巨型艾美耳球虫(Eimeriamaxima,E.maxima)是一种专性细胞内寄生的顶复门原虫，可引起严重危害集约化养鸡业生产的鸡球虫病。在无预防措施或预防失败(如因抗药性问题致药物无效)的情况下，鸡发病率可达30％-100％，致死率可高达80％。全球每年因鸡球虫病引起的经济损失超过30亿美元以上。目前对鸡球虫病的防控仍主要是执行“在饲料中添加各种抗球虫药进行药物防控”和“活卵囊疫苗进行疫苗防控”的技术方法。但鸡球虫广泛而严重的抗药性，以及活卵囊疫苗存在的潜在散毒风险使鸡球虫病的防控面临严峻挑战，新的抗球虫药物及疫苗研制成为亟待解决的问题。然而，人们至今对球虫与宿主细胞的详细互作机制尚无系统认识，造成新型抗球虫药物及分子疫苗的研制面临巨大困难。微线蛋白是一种在顶复门原虫中高度保守的微线分泌蛋白，可以和棒状体分泌的颈部蛋白共同形成“运动结合体(MovingJunction)”，共同完成虫体与宿主细胞的粘附作用，是协助虫体进入宿主细胞的关键物质。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一方面涉及重组多肽，其氨基酸序列为SEQIDNO:3所示。本专利技术的第二方面涉及分离的核酸，其编码如上所述的重组多肽。本专利技术的第三方面涉及载体，其具有如上所述的核酸。本专利技术的第四方面涉及宿主细胞，其基因组中掺有如上所述的核酸，或如上所述的载体。本专利技术的第五方面涉及如上所述的重组多肽的制备方法，包括：在适宜的条件下培养如上所述的宿主细胞，收集培养液和/或所述宿主细胞的裂解液，分离纯化得到所述重组多肽。本专利技术的第六方面涉及疫苗，其含有如上所述的重组多肽、如上所述的核酸或如上所述的载体。本专利技术的第七方面涉及成套试剂盒，其包含如上所述的疫苗，以及用于接种所述疫苗的容器。本专利技术的第八方面涉及如上所述的重组多肽、如上所述的核酸或如上所述的载体在制备用于防治巨型艾美耳球虫的药物中的应用。本专利技术的有益效果为：通过免疫巨型艾美耳球虫重组多肽疫苗EM-ATEV蛋白，能有效控制鸡体感染巨型艾美耳球虫，大大降低养鸡场抗球虫药的使用量，有效控制鸡球虫病。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术一个实施例中巨型艾美耳球虫重组多肽疫苗EM-ATEV真核表达质粒在DF-1细胞中表达的WB分析(M.蛋白质分子质量标准；1.DF-1细胞总蛋白；2.原核表达阳性对照；3.pCDA3.1-EM-ATEV1转染至DF-1细胞中的表达产物)；图2为本专利技术一个实施例中巨型艾美耳球虫重组多肽疫苗EM-ATEV表达产物SDS-PAGE电泳分析图(M.蛋白质分子质量标准；1.未诱导菌液；2.37℃诱导后菌液；3-4.纯化后重组表达蛋白)；图3为本专利技术一个实施例中巨型艾美耳球虫重组多肽疫苗EM-ATEV表达产物的WB图(M.蛋白质分子质量标准；1-2.pET30a-EM-ATEV2重组纯化蛋白)。具体实施方式现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本专利技术涉及重组多肽，其氨基酸序列为SEQIDNO:3所示。本专利技术还涉及分离的核酸，其编码如上所述的重组多肽。核酸可以为DNA或RNA。在一些实施方式中，所述的核酸针对宿主进行密码子优化。在一些实施方式中，所述的核酸的核苷酸序列如SEQIDNO:1或SEQIDNO:2所示。此外，本领域技术人员容易得知，所述重组多肽的氨基酸序列还可以与选自SEQIDNO：3的氨基酸序列实质上相似的序列。所述核酸的核苷酸序列还可以与选自SEQIDNO：1或SEQIDNO:2的核苷酸序列实质上相似的序列。“实质上相似”意指给定核酸或氨基酸序列与参比序列共有至少95％的同一性，例如，96％、97％、98％、98.5％、99％、99.5％。或者，意指给定核酸或氨基酸序列与参比序列具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个核酸或氨基酸的区别，对于多肽，这种区别优选为氨基酸的置换或者缺失。优选地，实质上相似的序列亦保留多肽的能够检测内源性抗体效率高的独特活性。通常置换视为保守置换，例如在脂肪族氨基酸Ala、Val、Leu和Ile中的彼此置换、羟基残基Ser和Thr的互换、酸性残基Asp和Glu的交换、酰胺残基Asn和Gln之间的置换、碱性残基Lys和Arg的交换以及芳香残基Phe、Tyr间的置换。本专利技术还涉及载体，其具有如上所述的核酸。术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。在一些实施方式中，本专利技术所述载体中包含基因工程中常用的调控元件，例如增强子、启动子、内部核糖体进入位点(IRES)和其他表达控制元件(例如转录终止信号，或者多腺苷酸化信号和多聚U序列等)。本专利技术还涉及宿主细胞，其基因组中掺有如上所述的核酸，或如上所述的载体。术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如S2果蝇细胞或Sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，CHO细胞，COS细胞，NSO细胞，HeLa细胞，BHK细胞，HEK293细胞或人细胞等的动物细胞。宿主细胞优选为真核细胞，更优选为禽类动物细胞。宿主细胞通常不具有全能性的动物细胞(优本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO:3所示。/n

【技术特征摘要】
1.重组多肽，其氨基酸序列为SEQIDNO:3所示。


2.分离的核酸，其编码权利要求1所述的重组多肽。


3.根据权利要求2所述的核酸，其针对宿主进行密码子优化。


4.根据权利要求3所述的核酸，其核苷酸序列如SEQIDNO:1或SEQIDNO:2所示。


5.载体，其具有权利要求2～4任一项所述的核酸。


6.宿主细胞，其基因组中掺有权利要求2～4任一项所述的核酸，或权利要求5所述的载体。


7.权利要求1所述的重组多肽的制备方法，包括：
在...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙铭飞，戚南山，廖申权，吕敏娜，吴彩艳，李娟，蔡海明，林栩慧，胡俊菁，于林增，肖文婉，张小慧，张健騑，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物卫生研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44